甘草次酸對(duì)kk-Ay糖尿病小鼠早中期腎纖維化的保護(hù)作用

劉文靜　南一　魯玉梅　袁玲

摘要：目的?探討甘草次酸（glycyrrhetic?acid）對(duì)kk-Ay糖尿病小鼠早中期腎纖維化的保護(hù)作用，從而揭示甘草次酸通過調(diào)節(jié)腎纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)，延緩早中期糖尿病腎纖維化進(jìn)展。方法?利用自發(fā)性KK-Ay糖尿病模型小鼠，建立預(yù)期糖尿?。―iabetes?Mellitus，DM）早中期腎纖維化模型（即將6周齡KK-Ay小鼠用KK專用高脂飼料飼喂6周）。再分別給予高、低濃度的甘草次酸連續(xù)灌胃干預(yù)10周。1.觀察測(cè)量腎纖維化小鼠的體重、血糖變化;2.采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)總膽固醇（TG），甘油三酯（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）;3.利用光鏡及透射電鏡觀察（TEM）腎臟組織形態(tài)、病理變化;4.采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Lamininl（層黏連蛋白）、E-cadherin（鈣黏蛋白）、α-SMA（α-平滑肌動(dòng)蛋白）腎間質(zhì)纖維化指標(biāo)及腎纖維化轉(zhuǎn)化因子TGF-β1的表達(dá)情況。結(jié)果?與C57空白對(duì)照組小鼠比較，模型組小鼠的體重、空腹血糖明顯增加（P<0.05）;血生化檢測(cè)顯示模型組小鼠Scr、BUN、TC、TG，LDL顯著增加，HDL減?。≒<0.05），而經(jīng)過甘草次酸藥物組干預(yù)后體重、血糖，以及Scr、BUN、TC、TG、LDL明顯減輕，而HDL增加（P<0.05）。通過HE染色、Masson三色法，透射電鏡顯示：甘草次酸對(duì)kk-Ay糖尿病腎病小鼠早中期腎小球、腎小管及間質(zhì)均有明顯的修復(fù)及保護(hù)作用;免疫組化結(jié)果顯示：經(jīng)過甘草次酸處理后，層黏連蛋白-1、α-SMA、TGF-β1的表達(dá)降低，E-鈣黏蛋白增加了（P<0.05）。結(jié)論?甘草次酸對(duì)kk-Ay糖尿病模型小鼠早中期腎纖維化具有保護(hù)作用，可能通過影響腎纖維化轉(zhuǎn)化因子TGF-β1、Lamininl、E-cadherin、α-SMA纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而延緩早中期糖尿病腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展。

關(guān)鍵詞：甘草次酸;?KK-Ay小鼠;?EMT;?Lamininl;?E-cadherin;?α-SMA

中圖分類號(hào)：R285?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：1007-2349（2020）03-0072-07

隨著人們生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改變，糖尿?。―iabetes?Mellitus，DM）人數(shù)所占全球總?cè)藬?shù)比例明顯呈上升趨勢(shì)，繼而糖尿病腎?。―iabetic?Kidney?Disease，DKD）的數(shù)目也在不斷地增加[1-2]。糖尿病腎病是糖尿病嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要原因之一，在國(guó)內(nèi)也是終末期腎功能衰竭的主要原因。目前，嚴(yán)格控制葡萄糖和血壓適用于臨床實(shí)踐，但治療效果并不理想。近年來眾多研究者將目光投向了傳統(tǒng)中醫(yī)藥寶庫，它在糖尿病腎病的治療中起到了很好的補(bǔ)充作用。

甘草是中醫(yī)治療中最常用的草本植物，屬于豆科植物。古代文獻(xiàn)記載甘草無毒且具和百藥解百毒作用，在中藥處方中最為常用?，F(xiàn)代研究表明甘草中主要的活性物質(zhì)-18β-甘草次酸（GA），是甘草中的主要有效成分，是由甘草根莖中提取的五環(huán)三藉類化合物。18β-GA是具有多種藥理功能的藥物，具有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗?jié)儭⒖寡趸?、降血脂、?zhèn)咳、改善胰島素抵抗以及免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用。近年來GA在腎臟相關(guān)疾病的治療研究方面也有了很大的進(jìn)展，包括對(duì)于腎臟缺血再灌注以及腎臟慢性鎘中毒的保護(hù)作用。但是相關(guān)報(bào)道還是很少，因此本實(shí)驗(yàn)著重探討GA對(duì)于DN動(dòng)物模型的治療效果，以期待為DN的治療提供新的參考依據(jù)[3-5]。

1?材料與方法

1.1?實(shí)驗(yàn)材料?動(dòng)物：選用KK/upj-Ay/J小鼠（6周齡）SPF級(jí)，雄性75只和C57BL/6J（6周齡）SPF級(jí)，雄性對(duì)照小鼠15只，體重25±2?g，購買于北京維通利華有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0004，于寧夏醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心屏障內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，并觀察有無不良反應(yīng)。飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司提供：普通飼料（總熱能14KJ/g：蛋白質(zhì)20%、脂肪8%、碳水化合物5%）;高脂飼料purina#5008（粗蛋白23.5%、粗脂肪6.5%），許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0008。

1.2?藥物制備?選用甘草次酸（glycyrrhetic?acid）—18β-GA，使用前用蒸餾水配成濃度為0.36?g/mL、0.72?g/mL藥物濃縮液，放置冰箱備用。

1.3?實(shí)驗(yàn)試劑?血糖試紙（德國(guó)羅氏公司，批號(hào)：06454038），磷酸鹽緩沖液（Phosphate?Buffered?Saline，PBS）（北京索萊寶科技有限公司），水合氯醛（青島宇龍海藻有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)H37022673）無水乙醇（天津市化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20060406），4%多聚甲醛（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20080203）Anti-Laminin抗體（公司，批號(hào)）、Anti-E-cadherin抗體、、Anti-α-SMA抗體、Anti-TGF-β1抗體。

1.4?實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1?造模與分組?將6齡雄性KK-Ay小鼠30只給予KK飼料，飼養(yǎng)至12周齡，根據(jù)隨機(jī)血糖≥13.9mmol/L測(cè)定糖尿病模型。模型建立后，隨機(jī)分為4組：KK-Ay中早期糖尿病腎病模型組10只、甘草次酸組（低劑量GL：0.36?g·kg-1·d-1;高劑量GH：0.72?g·kg-1·d-1）各10只，另10只C57BL/6對(duì)照小鼠，給予普通飼料飼養(yǎng)。連續(xù)給藥10周至小鼠達(dá)到22周齡。

1.4.2?小鼠體重、血糖?在固定時(shí)間每周測(cè)量小鼠的體重，然后記錄求平均值。通過血糖試紙尾靜脈采血法以2周的間隔測(cè)量小鼠的空腹血糖并記錄。

1.4.3?血生化檢測(cè)?在給藥10周后處死所有小鼠。從腹主動(dòng)脈收集血液并以3000?g/min離心15分鐘。分離血清用于檢測(cè)總膽固醇（TC），甘油三酯（TG），尿素氮（BUN），低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）通過自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)上述生化指標(biāo)（BS-120，Mindary，Shenzheng）。

1.4.4?組織病理學(xué)（HE染色、Masson三色法、透射電鏡）檢測(cè)?KK-Ay小鼠給藥10周后處死，并取材腎臟，將其左腎沿腎門部位縱剖為2片，二分之一腎臟放于4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行前固定，腎組織乙醇梯度脫水、透明，進(jìn)口石蠟包埋，切成5μm的薄片粘附載玻片上，進(jìn)行H&E、Masson染色、免疫組化，在光鏡下觀察腎組織病理學(xué)變化。另一片切成0.2?cm×0.1?cm大小塊狀，置于特殊固定液中固定供電鏡用，經(jīng)常規(guī)脫水、透明、樹脂包埋處理后，用透射電鏡觀察腎組織微小結(jié)構(gòu)變化。

1.4.5?免疫組化分析?經(jīng)過脫水，脫蠟和修復(fù)抗原對(duì)腎組織切片進(jìn)行封閉，然后與一抗稀釋液一起孵育TGF-β1（1：100），E-鈣黏蛋白（1：100）和α-SMA（1：50），層黏連蛋白-1（1：100），4°C孵育過夜然后加入二抗。然后用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌切片并加入顯色劑。最后蘇木精染色以定位細(xì)胞核。

1.5?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?所有數(shù)據(jù)均表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。使用SPSS?23.0通過單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。當(dāng)方差齊時(shí)，使用最小顯著差異（LSD）測(cè)試。當(dāng)方差不齊時(shí)，使用Tamhane的T2檢驗(yàn)。P<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?KK-Ay小鼠體重、血糖變化結(jié)果?在高脂高糖KK飼料誘發(fā)飼喂12周的時(shí)間，觀察發(fā)現(xiàn)KK-Ay小鼠飲食量、尿量明顯增加，毛發(fā)干枯易脫落，說明出現(xiàn)明顯地DM癥狀。與C57空白組比較，模型組小鼠組體重顯著增加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與模型組組比較，KK-Ay+GH?0.72?g·kg-1組及KK-Ay+GL?0.36?g·kg-1組體重相對(duì)下降。（P<0.05），尤以KK-Ay+GH?0.72?g·kg-1組效果顯著，說明：甘草次酸能改善KK-Ay小鼠的身體肥胖。見表1、圖1。

與空白組小鼠空腹血糖相比較，KK-Ay模型組小鼠血糖升高明顯，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與KK-Ay組空腹血糖比較，KK-Ay+GH?0.72?g·kg-1組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），15周齡時(shí)，KK-Ay+GH?0.72?g·kg-1組，KK-Ay+GL?0.36?g·kg-1組有顯著性差異，說明GH?0.72?g·kg-1組和GL?0.36?g·kg-1組能夠顯著改善血糖，見表2，圖2。

2.2?血生化檢測(cè)結(jié)果?C57對(duì)照組相比，模型組TG，TC和LDL脂質(zhì)代謝水平顯著升高（P<0.05）。HDL顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，給藥組TG和TC水平均有顯著變化（P<0.05）。然而，給藥組的HDL和LDL變化并不明顯，見表3。與對(duì)照組相比，模型組小鼠腎功指標(biāo)Scr和BUN水平顯著升高（P<0.05）。與模型組相比，治療組水平顯著下降（P<0.05）。但甘草次酸組之間的差異不顯著（表4）。因此，甘草次酸可以有效改善腎功能和脂質(zhì)代謝。

2.3?組織病理學(xué)（HE染色、Masson三色法、透射電鏡）結(jié)果

2.3.1?HE染色?C57組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)未見明顯改變，22周齡KK-Ay組腎組織可見腎小球體積增大，系膜基質(zhì)增多，基底膜增厚，腎小管出現(xiàn)空泡樣病變。空白組較KK-Ay模型組腎組織增生程度較輕。KK-Ay+GH?0.72?g·kg組、KK-Ay+GL?0.36?g·kg組腎組織改變較模型組組輕，見圖3。

2.3.2?Masson三色法?與C57比較，KK-Ay組可見腎小球囊體積增大，腎小球囊壁增寬，基底膜不同程度增厚，膠原纖維染色明顯，腎小管空泡樣病變，腎間質(zhì)膠原纖維顯著增大。甘草次酸組與模型組比較，腎小球基底膜增厚程度沒有KK-Ay模型組組嚴(yán)重，膠原纖維染色也不甚明顯，腎間質(zhì)膠原纖維沉積量少。給藥組較模型組腎臟病理情況輕。KK-Ay+GH?0.72?g·kg-1組與KK-Ay+GL?0.36?g·kg組進(jìn)行比較，無顯著性差異。見圖4。

3.3?透射電鏡?空白組內(nèi)可見毛細(xì)血管腔開放良好，內(nèi)皮細(xì)胞，足細(xì)胞無異常，足突像梳子一樣清晰可見，毛細(xì)血管基底膜均勻，系膜區(qū)無增生。與空白組相比，模型組腎小球基底膜上足細(xì)胞足突呈矮柱狀融合、脫落，微絨毛化，基底膜變薄，系膜細(xì)胞染色質(zhì)聚集，局部系膜區(qū)輕度增生，膜細(xì)胞個(gè)數(shù)大于3個(gè);與模型組相比，甘草次酸組腎小球基底膜上足細(xì)胞足突輕度融合，基底膜輕度增厚，但厚度均勻，線粒體有損傷，基底膜上有致密物沉積，足細(xì)胞染色質(zhì)邊集，見圖5。

3.4?免疫組化法檢測(cè)Laminin-1、E-cadherin、α-SMA、TGF-β1蛋白結(jié)果?與C57組相比，α-SMA、Laminin-1、TGF-β1在模型組小鼠腎小球的表達(dá)量明顯增加;與模型組比較，α-SMA、Laminin-1、TGF-β1在KK-Ay+GH?0.72?g·kg-1組、KK-Ay+GL?0.36?g·kg組表達(dá)減少;但二者無明顯差異。與C57組相比，E-cadherin蛋白在模型組KK-Ay小鼠腎小球的表達(dá)量是明顯減少;與模型組比較，E-cadherin在KK-Ay+GH?0.72?g·kg-1組、KK-Ay+GL?0.36?g·kg-1組中的表達(dá)均增加，見圖6～圖9。

4?討論

糖尿病發(fā)展為糖尿病腎病，并且將近一半的患者最終進(jìn)展為終末期腎臟病[6]。慢性腎?。–KD）終末期腎衰竭的主要病理變化是腎間質(zhì)纖維化，腎小球纖維化，腎血管纖維化和腎小管纖維化等。超過1/3的間質(zhì)成纖維細(xì)胞源自腎小管上皮細(xì)胞的上皮質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），EMT的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過程，即多種病理因素可導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞受損。損傷的腎小管細(xì)胞或炎性細(xì)胞釋放TGF-β1，誘導(dǎo)上皮細(xì)胞EMT變化，使上皮細(xì)胞發(fā)生獲得分泌FN的間充質(zhì)細(xì)胞的表型，細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）成分引起腎間質(zhì)纖維化[7]。所以抑制腎小管上皮細(xì)胞分化的EMT過程是延緩DN進(jìn)展的重要目標(biāo)。

有專家認(rèn)為EMT能夠被劃分成四個(gè)階段：上皮細(xì)胞失去黏附能力（E-cad丟失）-重建細(xì)胞骨架蛋白肌動(dòng)蛋白（a-SMA表達(dá)增多）-腎小管基底膜崩解（Laminin-1缺乏）-細(xì)胞遷移和侵襲能力增強(qiáng)。Laminin-1是層黏連蛋白，是細(xì)胞外基質(zhì)的高分子量（400約900kDa）蛋白質(zhì)。它們是基底層的主要成分，也是大多數(shù)細(xì)胞和器官的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)基礎(chǔ)，影響細(xì)胞分化遷移和黏附。研究表明層黏連蛋白-1上的非硫酸化HNK-1表位通常被嵌入并掩蓋在堅(jiān)固的基底膜中，從而與其他蛋白質(zhì)緊密結(jié)合[8-11]。EMT過程還涉及到很多鈣黏蛋白表達(dá)的改變，作為鈣黏附蛋白家族中重要成員之一的E-cadherin具有特殊生物學(xué)活性，它不僅是一種腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移抑制劑，也是主要的正常細(xì)胞生長(zhǎng)接觸抑制劑。鈣黏蛋白是一類Ca2+依賴的糖蛋白，是最為經(jīng)典的上皮細(xì)胞標(biāo)志物。E-cad的丟失是上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的標(biāo)志，會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)EMT的進(jìn)展，E-cad與EMT過程互相影響，最終導(dǎo)致上皮細(xì)胞徹底轉(zhuǎn)分化成纖維細(xì)胞造成腎小管間質(zhì)纖維化[12-14]。a-平滑肌蛋白（a-SMA）屬于6種肌動(dòng)蛋白家族之一。a-SMA顯著表達(dá)于發(fā)育成熟個(gè)體的血管平滑化細(xì)胞和肌性上皮細(xì)胞。a-SMA早期表達(dá)是EMT的標(biāo)志物，肌成纖維細(xì)胞在腎纖維化過程中的作用主要表現(xiàn)在結(jié)締組織損傷修復(fù)過程中，特異性表達(dá)a-SMA，具有極強(qiáng)的的收縮，增殖和分泌ECM的能力。是研究上皮細(xì)胞EMT及纖維化又一標(biāo)志物[15-17]。因此，抑制腎小管EMT可以減少成纖維細(xì)胞的數(shù)量，抑制ECM（細(xì)胞外基質(zhì)）的合成和分泌，為預(yù)防和治療DN腎間質(zhì)纖維化提供了新的途徑。

筆者對(duì)18β-甘草次酸及其衍生物在糖尿病腎病纖維化可能的作用位點(diǎn)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探究，發(fā)現(xiàn)GA在腎臟相關(guān)疾病的治療研究方面也有了很大的進(jìn)展，包括對(duì)于腎臟缺血再灌注以及腎臟慢性鎘中毒的保護(hù)作用[18，19]。如李開龍等[20]認(rèn)為甘草酸可通過下調(diào)腎臟中結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（TGF-β1）的表達(dá)抑制腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生，馬立彬等[21]通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)甘草酸二胺通過抑制TGF-β1的表達(dá)而發(fā)揮抗大鼠腎間質(zhì)纖維化作用。于力[22]也證實(shí)甘草酸可以抑制細(xì)胞因子TGF-β1和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的表達(dá)從而改善腎小球硬化。趙海燕等[23]研究發(fā)現(xiàn)：18β-甘草次酸能有效降低2型糖尿病大鼠的血糖和血脂，改善胰島素抵抗。王會(huì)玲等[24]通過大鼠實(shí)驗(yàn)對(duì)比甘草酸和潑尼松對(duì)慢性馬兜鈴酸腎病大鼠腎臟組織病理及超微病理改變的影響，發(fā)現(xiàn)甘草酸和潑尼松一樣具有改善馬兜鈴酸腎病引起的腎臟組織病理及超微結(jié)構(gòu)改變且其引起體重、血壓升高的副作用低于后者。Yoke?Yin等[25]研究發(fā)現(xiàn)：給予大鼠甘草次酸100μg/g，24h后胰島素的敏感性有所提高，降低了血糖、三酰甘油、總膽固醇。本次實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果：模型組KK-Ay小鼠體重、空腹血糖明顯增加，說明小鼠出現(xiàn)了明顯的DN癥狀，通過HE染色、Masson染色、電鏡等方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)KK-Ay小鼠腎組織出現(xiàn)了纖維化的病理變化，經(jīng)過甘草次酸長(zhǎng)時(shí)間灌胃腎纖維化小鼠，取腎臟行HE染色觀察，結(jié)果與模型組相比腎小球大小基本正常、基底膜增生明顯減輕;系膜區(qū)纖維化改善，腎小管萎縮改善。說明較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)甘草次酸對(duì)模型小鼠腎功能及腎臟病理形態(tài)變化有影響。免疫組化顯示：糖尿病小鼠腎組織中TGF-β1、a-SMA、Laminin-1蛋白呈高表達(dá)，E-cad減少，說明腎組織出現(xiàn)明顯的纖維化。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)表述表述一致。

綜上所述，長(zhǎng)時(shí)間甘草次酸灌胃將會(huì)影響糖尿病腎病KK-Ay小鼠腎組織E-cad及a-SMA、Laminin-1蛋白的分布及含量的變化，有助于延緩DN所致的EMT腎間質(zhì)纖維化的過程。由于本次實(shí)驗(yàn)主要是對(duì)甘草次酸的藥效學(xué)進(jìn)行研究，但是甘草次酸對(duì)于DN動(dòng)物模型的治療機(jī)制研究方面存在欠缺。下一步筆者將更深入的研究DN發(fā)病機(jī)制研究，以期待為DN的治療提供新的參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]汪會(huì)琴.2型糖尿病報(bào)告發(fā)病率研究進(jìn)展[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2016，28（1）：37-39+57.

[2]張敏.我國(guó)糖尿病流行病學(xué)和疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)研究現(xiàn)狀[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2017，17（56）：176.

[3]李小琴，沈瑩，石珺.甘草次酸對(duì)糖尿病腎病動(dòng)物模型的療效觀察[J].臨床腎臟病雜志，2018，18（7）：434-439.

[4]邢燕.甘草次酸通過PI3K-AKT途徑抑制H2O2所致大鼠心肌細(xì)胞氧化損傷[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2018，18（6）：1044-1049.

[5]繆雨青，周文麗，王杰軍.甘草次酸及其衍生物對(duì)炎癥和免疫功能影響的研究進(jìn)展[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2018，38（11）：1405-1408.

[6]Zhang，X.Protective?Effects?of?Berberine?on?Renal?Injury?in?Streptozotocin（STZ）-Induced?Diabetic?Mice[J].Int?J?Mol?Sci，2016，17（8）.

[7]王雅寧.黃芪甲苷抑制糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化的作用和機(jī)制[D].2017，山東大學(xué).

[8]Zhao，C.Effects?of?tripterygium?wilfordii?polyglucoside?on?expression?of?Activin?A?and?influence?of?transdifferentiation?in?renal?tubulointerstitium?of?rats?with?diabetic?nephropathy[J].Zhonghua?Yi?Xue?Za?Zhi，2014，94（18）：1427-32.

[9]Miosge，N.，Ultrastructural?colocalization?of?nidogen-1?and?nidogen-2?with?laminin-1?in?murine?kidney?basement?membranes[J].Histochem?Cell?Biol，2000，113（2）：115-24.

[10]Reuters，I.，M.Weber?and?E.Schulze-Lohoff，Rho/Rho?kinase?pathway?regulates?maintenance?of?the?differentiated?tubular?epithelial?cell?phenotype?on?laminin-1[J].Nephron?Physiol，2006，104（2）：p95-p106.

[11]Kizuka，Y.Laminin-1?is?a?novel?carrier?glycoprotein?for?the?nonsulfated?HNK-1?epitope?in?mouse?kidney[J].Glycobiology，2008，18（4）：331-8.

[12]曾仁鳳.辛伐他汀對(duì)纖維化大鼠肺組織Snail1、E-鈣粘素、波形蛋白表達(dá)的影響[D].2014，南華大學(xué).

[13]尹盼盼.E-鈣黏素在原發(fā)性腎病綜合征患者足細(xì)胞中的表達(dá)及意義[D].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2013，23（6）：34-38.

[14]季巍巍.非酒精性肝纖維化a-SMA、E-鈣黏素、Twist1及TGF-β1的變化及意義[D].安徽醫(yī)科大學(xué)，2012.

[15]陳文玲.健脾軟肝方對(duì)四氯化碳致肝纖維化大鼠α-SMA及其mRNA表達(dá)的影響[J].世界中醫(yī)藥，2018，13（9）：2261-2267+2271.

[16]李光超.基于“肝腎同源”探討DN大鼠肝中TGF-β1、Smad-4、α-SMA和PDGF在中藥治療前后的變化[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2014，20（4）：459-461.

[17]陳建.抗纖靈方對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)腎纖維化小鼠腎組織α-SMA和Ⅰ型膠原的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017，32（2）：739-742.

[18]吳玲玲.縫隙連接阻斷劑18α-甘草次酸對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用[J].石河子大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013，31（5）：607-611.

[19]張小兵.長(zhǎng)期口服18β-甘草次酸對(duì)大鼠血糖、血脂的影響[J].中醫(yī)研究，2015，28（7）：48-51.

[20]李開龍.甘草酸18α體對(duì)梗阻性腎病大鼠腎間質(zhì)中NF-κB表達(dá)的影響[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2004（1）：31-33.

[21]馬立彬.甘草酸二胺抗大鼠腎間質(zhì)纖維化作用及其機(jī)制[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2007（6）：756-759.

[22]于力.甘草甜素對(duì)大鼠腎小球硬化早期的防護(hù)作用[J].中草藥，2010，41（2）：250-255.

[23]趙海燕，王彥芳，楊少娟.18β-甘草次酸對(duì)2型糖尿病大鼠血糖和血脂的影響[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2013，23（24）：1-4.

[24]王會(huì)玲，張金元，黃健，甘草酸和潑尼松對(duì)慢性馬兜鈴酸腎病大鼠腎臟組織病理及超微病理改變的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007（1）：45-49.

[25]Yoke，Y.C.，H.T.So?and?K.K.Abdul，Effects?of?Glycyrrhizic?Acid?on?Peroxisome?Proliferator-Activated?Receptor?Gamma（PPARgamma），Lipoprotein?Lipase（LPL），Serum?Lipid?and?HOMA-IR?in?Rats[M].PPAR?Res，2010：530265.

（收稿日期：2019-10-29）