茶多酚對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)鵝小腸上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用

付 晶，林 桐，陳艾玲，鄧 珊，劉春朋

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱 150030；2.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，廣州 510225）

內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)為畜禽健康必要條件。隨著畜牧業(yè)集約化、高密度飼養(yǎng)模式的推廣，在養(yǎng)殖過程中，如飼養(yǎng)管理不當(dāng)可造成動(dòng)物應(yīng)激。機(jī)體產(chǎn)生過量自由基、體內(nèi)氧化還原平衡遭到破壞，發(fā)生氧化應(yīng)激損傷，嚴(yán)重影響機(jī)體健康和生產(chǎn)性能[1]。腸道為機(jī)體養(yǎng)分消化吸收、物質(zhì)新陳代謝的主要器官，因其特有的血管解剖結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及對(duì)流氧交換機(jī)制決定其應(yīng)激狀態(tài)下更易發(fā)生氧化損傷，誘發(fā)腸道疾病[2]。在畜牧業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)、畜禽標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)模化養(yǎng)殖模式持續(xù)推進(jìn)的大趨勢下，畜禽腸道問題日益突出，為減輕氧化應(yīng)激對(duì)畜禽腸道健康的影響，研究腸道氧化應(yīng)激機(jī)理并尋找預(yù)防和修復(fù)腸道氧化損傷的方法成為亟待解決的問題之一。

肉鵝是我國華南地區(qū)主要水禽飼養(yǎng)種類。在生產(chǎn)周期中，腸道易受外界刺激，高飼料轉(zhuǎn)化率、養(yǎng)殖環(huán)境污染和頻繁的免疫程序等不利因素，均可導(dǎo)致肉鵝機(jī)體代謝過程中產(chǎn)生大量自由基，引發(fā)腸道疾病[3]。抗氧化劑可清除自由基、減緩氧化應(yīng)激危害。隨著飼用抗生素的全面禁用，開發(fā)綠色功能性飼料添加劑在畜牧生產(chǎn)中尤為必要。

茶多酚（Tea polyphenols, TP）為一類從茶葉中提取的多酚類化合物總稱，作為天然藥物具有廣泛的藥理作用和生物學(xué)功能，如抗氧化、抗炎癥、抑菌、清除機(jī)體自由基等[4]。TP為迄今為止唯一被列入我國食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)的天然抗氧化劑[5]。TP 作為飼料添加劑在家禽生產(chǎn)中已有應(yīng)用，但其發(fā)揮生物學(xué)特性的內(nèi)在機(jī)制有待進(jìn)一步研究。目前，相關(guān)研究主要集中于雞、鴨等生長性能、繁殖性能、肉品質(zhì)及菌群調(diào)節(jié)等方面[6]，關(guān)于TP 在養(yǎng)鵝生產(chǎn)中的應(yīng)用尤其是對(duì)鵝腸道抗氧化功能研究未見報(bào)道。本研究體外分離培養(yǎng)鵝小腸上皮細(xì)胞，使用過氧化氫（H2O2）處理，建立氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞模型；采用TP對(duì)細(xì)胞作預(yù)處理，探討TP對(duì)H2O2引發(fā)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用機(jī)制，為TP 作為功能性飼料添加劑在養(yǎng)鵝生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

25～26胚齡發(fā)育良好的馬崗鵝鵝胚，購自廣州文健明種鵝養(yǎng)殖有限公司。茶多酚（純度≥98%），購自北京索萊寶科技有限公司。

1.2 主要試劑

DMEM/F12 培養(yǎng)基（11320033）、0.05% Trypsin-EDTA（2530062），購于Gibco 公司；表皮生長因子EGF（E4127）、青鏈霉素（V900929）、膠原酶Ⅺ（C7657）、中性蛋白酶Ⅰ（D4818）、L-谷氨酰胺（G8540）、3% H2O2，購自Sigma 公司；鼠尾膠原蛋白（C8062）、MTT 試劑盒（M1020）、一抗稀釋液（A1810），購自北京索萊寶科技有限公司；優(yōu)級(jí)胎牛血清（11011），購自杭州四季青公司；細(xì)胞角蛋白18 單克隆抗體（M01357）、SABC 免疫組化試劑盒（SA1021）、DAB顯色試劑盒（AR1022），購自武漢博士德公司；乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 主要儀器

超凈工作臺(tái)（VS-1300U），二氧化碳培養(yǎng)箱（Thermo fisher scientific），低溫高速離心機(jī)（Thermo fisher scientific），倒置顯微鏡（Olympus CX41），電熱恒溫水槽（上海一恒CU-600），酶標(biāo)儀（Thermo fisher scientific 51119300），紫外分光光度計(jì)（Eppendorf）。

1.4 樣品采集及處理

1.4.1 鵝小腸上皮細(xì)胞分離、純化及鑒定

1.4.1.1 鵝小腸上皮細(xì)胞分離

取25～26胚齡發(fā)育良好鵝胚，75%酒精棉擦拭外殼，晾干后用滅菌解剖器械在超凈臺(tái)內(nèi)取出小腸組織，暫置于DMEM/F12培養(yǎng)基。隨后在含有雙抗DMEM/F12培養(yǎng)液（不含血清）中，小心剝離腸系膜，使用PBS反復(fù)沖洗腸腔內(nèi)容物，直至上清液澄清。將小腸組織剪成＜1 mm3碎塊，使用比例為9∶1膠原酶Ⅺ和中性蛋白酶混合酶，37 ℃消化25 min后，4 ℃離心10 min棄上清，即獲得鵝小腸上皮細(xì)胞沉淀。

1.4.1.2 鵝小腸上皮細(xì)胞純化

根據(jù)上皮細(xì)胞較成纖維細(xì)胞貼壁慢的特點(diǎn)，選用“相差貼壁法”使兩類細(xì)胞分離以達(dá)到純化目的。即：先將1.4.1.1中分離得到的細(xì)胞沉淀用含有雙抗和10%血清的DMEM/F12 培養(yǎng)基吹勻，隨后將懸液接種至第1個(gè)培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)90 min；然后輕輕吸取全部培養(yǎng)液（含未貼壁上皮細(xì)胞），接種到第2 個(gè)培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，更換新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液，即獲得純化的鵝小腸上皮細(xì)胞。

1.4.1.3 鵝小腸上皮細(xì)胞鑒定

取純化后傳至第二代的小腸上皮細(xì)胞，將其以每孔1×104密度接種到24 孔板上，培養(yǎng)3～4 d。吸去培養(yǎng)液，使用PBS洗滌細(xì)胞2～3次。然后按照博士德SABC免疫組化染色試劑盒說明書操作，細(xì)胞固定、滅活、封閉、一抗孵育、二抗孵育、SABC 染色和DAB 顯色。顯微鏡下觀察顯色情況，待10～15 min顯色完成后，蒸餾水充分洗滌以終止顯色反應(yīng)。

1.4.2 茶多酚干預(yù)鵝小腸上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型建立

1.4.2.1 H2O2誘導(dǎo)鵝小腸上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型建立

按照每孔0.5～1×104個(gè)細(xì)胞將對(duì)數(shù)生長期鵝小腸上皮細(xì)胞接種于96 孔培養(yǎng)板，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞生長至80%時(shí)，棄去細(xì)胞培養(yǎng)上清液，加入配制的含有終濃度分別為0（對(duì)照組）、100、200、400、800 和1 600 μmol·L-1的H2O2培養(yǎng)液，每組6個(gè)平行。置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)2 和4 h后，測定細(xì)胞存活率。

1.4.2.2 TP對(duì)鵝小腸上皮細(xì)胞增殖的影響

按照每孔0.5～1×104個(gè)細(xì)胞取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，待細(xì)胞生長至80%時(shí)，棄去細(xì)胞培養(yǎng)上清液，加入配制的含有終濃度分別為0（對(duì)照組）、12.5、25、50、100 和200 μg·mL-1TP 培養(yǎng)液，每組6個(gè)平行。置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后，測定細(xì)胞存活率。

1.4.2.3 TP預(yù)處理鵝小腸上皮細(xì)胞損傷模型建立

試驗(yàn)分為4 組：對(duì)照組、TP 處理組、H2O2處理組、TP和H2O2聯(lián)合組（TP預(yù)處理組）。其中：①對(duì)照組：用DMEM/F12 培養(yǎng)基培養(yǎng)小腸上皮細(xì)胞12 h；②TP 處理組：用含有100 μg·mL-1TP 的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)小腸上皮細(xì)胞12 h；③H2O2處理組：先用DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)小腸上皮細(xì)胞10 h，再用含有400 μmol·L-1H2O2的DMEM/F12 培養(yǎng)基培養(yǎng)小腸上皮細(xì)胞2 h；④TP+H2O2聯(lián)合組：先用含有100 μg·mL-1TP的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)小腸上皮細(xì)胞10 h，再加入終濃度為400 μmol·L-1H2O2，共培養(yǎng)2 h，測定相關(guān)指標(biāo)。

1.4.3 鵝小腸上皮細(xì)胞活力檢測

按1.4.2 分組及藥物處理后，小心吸去原培養(yǎng)基，每孔加入90 μL新鮮DMEM/F12培養(yǎng)基和10 μL MTT 溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h；然后吸去培養(yǎng)基，再向每孔加入110 μL Formazan溶解液后，置于搖床上低速震蕩10 min，使結(jié)晶充分溶解。在酶標(biāo)儀490 nm波長處測量各孔吸光值。設(shè)定對(duì)照組細(xì)胞存活率為100%，根據(jù)下列公式計(jì)算各組細(xì)胞存活率。

細(xì)胞存活率（%）=（處理組OD 平均值/對(duì)照組OD平均值）×100%

1.4.4 與氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)MDA、LDH、SOD 和GSH-Px測定

將鵝小腸上皮細(xì)胞以每孔2×105個(gè)細(xì)胞接種于6孔板中，按1.4.2.3分組及藥物處理后，收集細(xì)胞培養(yǎng)液，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液用于測定LDH 活性。取細(xì)胞，用0.05%胰蛋白酶-EDTA 消化細(xì)胞，收集細(xì)胞懸浮液，1 000 r·min-1離心10 min，棄上清后加入PBS配制細(xì)胞懸液，細(xì)胞破碎儀破碎細(xì)胞，測定MDA 含量及SOD 和GSH-Px 活性。MDA、LDH、SOD 和GSH-Px 測定依據(jù)南京建成生物工程研究所提供試劑盒說明書操作。采用微板法測定LDH 活性、TBA 法測定MDA 含量、黃嘌呤氧化酶法測定SOD 活性、比色法測定GSH-Px活性。

1.5 統(tǒng)計(jì)與分析

使用GraphPad Prism 5.0軟件統(tǒng)計(jì)學(xué)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)并作圖。通過單向ANOVA評(píng)估比較平均值，采用Tukey檢驗(yàn)組間多重比較。數(shù)據(jù)均用“mean±SD”表示。不同字母代表組間差異顯著（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 鵝小腸上皮細(xì)胞分離、純化及鑒定

成功建立鵝小腸上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，用混合酶（0.01 mg·mL-1膠原酶XI+0.1 mg·mL-1中性蛋白酶）消化法分離得到鵝小腸上皮細(xì)胞（見圖1a 和1b）。用相差貼壁法分離純化腸上皮細(xì)胞（見圖1c和1d），并以每孔0.5～2×104個(gè)細(xì)胞作為后續(xù)試驗(yàn)中細(xì)胞接種濃度。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示（見圖1e和1f），分離得到細(xì)胞呈卵圓形或多角形，單層貼壁生長，邊緣清晰緊密相連；且獲得較多具有增殖活性的腸隱窩集團(tuán)。此外，試驗(yàn)選用上皮組織中特異性抗原（細(xì)胞角蛋白18 單克隆抗體）對(duì)傳至第二代細(xì)胞免疫組化染色，發(fā)現(xiàn)90%以上細(xì)胞染色結(jié)果呈陽性（見圖1h），說明獲得的細(xì)胞為腸上皮細(xì)胞，可用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.2 茶多酚干預(yù)鵝小腸上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型建立

2.2.1 H2O2對(duì)鵝小腸上皮細(xì)胞存活率的影響

由表1可見，與對(duì)照組相比，H2O2處理組細(xì)胞存活率隨著H2O2濃度增加而顯著降低（P＜0.05）。100 μmol·L-1組存活率均在80%左右，細(xì)胞損傷較小；400 μmol·L-1組處理細(xì)胞4 h 后，細(xì)胞存活率低于50%，而2 h組細(xì)胞存活率相對(duì)于對(duì)照組顯著降低至71.46%（P＜0.05），符合建立氧化應(yīng)激模型條件；800 和1 600 μmol·L-1組存活率進(jìn)一步降至40%以下，細(xì)胞存活率較低。

2.2.2 H2O2作用2 h對(duì)鵝小腸上皮細(xì)胞形態(tài)的影響

由圖2可見，不同濃度H2O2處理鵝小腸上皮細(xì)胞2 h 后，對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)正常，貼壁情況良好，細(xì)胞連接緊密無明顯間隙；100 μmol·L-1組細(xì)胞形態(tài)無明顯變化；200 μmol·L-1組僅少量細(xì)胞脫落；400 μmol·L-1組細(xì)胞體積縮小、脫落，局部出現(xiàn)細(xì)胞間隙變大，少量細(xì)胞變圓死亡；800 和1 600 μmol·L-1組細(xì)胞體積縮小變圓，細(xì)胞脫落嚴(yán)重且出現(xiàn)大面積空隙，細(xì)胞核突出，產(chǎn)生DNA損傷。

表1 H2O2對(duì)鵝小腸上皮細(xì)胞存活率的影響（n=6）Table 1 Effect of H2O2on the survival rate of small intestinal epithelial cells in goose embryo（n=6）

2.2.3 TP對(duì)鵝小腸上皮細(xì)胞存活率的影響

為確定TP 作用于腸上皮細(xì)胞安全劑量范圍，將不同濃度TP加入腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)基中，檢測TP對(duì)腸上皮細(xì)胞存活率的影響。結(jié)果如圖3a 所示，與空白對(duì)照組相比，12.5～200 μg·mL-1TP處理上皮細(xì)胞后，在12 h 內(nèi)，隨TP 濃度增大，細(xì)胞存活率上升且差異顯著（P＜0.05）。研究表明，TP可提高正常腸上皮細(xì)胞存活率，且具有一定劑量效應(yīng)。但100 和200 μg·mL-1濃度TP 對(duì)細(xì)胞存活率的影響差異不顯著（P＞0.05），因此本研究選取100 μg·mL-1濃度TP 用于后續(xù)試驗(yàn)。圖3b 顯示，與對(duì)照組相比，腸上皮細(xì)胞經(jīng)H2O2處理后存活率（74.8%）顯著下降（P＜0.05），而經(jīng)TP 預(yù)處理10 h 后腸上皮細(xì)胞經(jīng)H2O2處理后存活率為117.94%。研究表明，TP對(duì)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，可逆轉(zhuǎn)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。

2.3 TP 對(duì)H2O2 誘導(dǎo)鵝腸上皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化（MDA）和乳酸脫氫酶（LDH）的影響

MDA 為脂質(zhì)過氧化物重要降解產(chǎn)物之一，由圖4a可知，與對(duì)照組相比，H2O2組細(xì)胞MDA 含量顯著增加（P＜0.05）。與H2O2組相比，TP 與H2O2聯(lián)合處理（即用TP 預(yù)處理細(xì)胞10 h）可顯著降低H2O2導(dǎo)致的鵝小腸上皮細(xì)胞MDA 產(chǎn)生。當(dāng)脂質(zhì)過氧化物大量增加時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷，而LDH 漏出率可反映細(xì)胞膜完整程度。圖4b 可知，與對(duì)照組相比，H2O2組細(xì)胞LDH 含量顯著增加（P＜0.05），而TP 組細(xì)胞LDH 含量明顯下降（P＜0.05）。與H2O2組相比，TP 與H2O2聯(lián)合處理可顯著降低H2O2導(dǎo)致的鵝小腸上皮細(xì)胞中LDH 產(chǎn)生。研究結(jié)果表明，在鵝腸上皮細(xì)胞中，TP 可抑制H2O2引起的細(xì)胞脂質(zhì)過氧化發(fā)生和細(xì)胞膜通透性提高。

2.4 TP 對(duì)H2O2 誘導(dǎo)的鵝腸上皮細(xì)胞抗氧化酶SOD和GSH-Px的影響

由圖5可知，在鵝小腸上皮細(xì)胞中，與對(duì)照組相比，H2O2可顯著降低細(xì)胞SOD 和GSH-Px 活性（P＜0.05），TP組可顯著增加細(xì)胞SOD和GSH-Px活性（P＜0.05）。與H2O2模型組細(xì)胞相比，TP 預(yù)處理組也可顯著增加細(xì)胞SOD 和GSH-Px 活性（P＜0.05）。以上結(jié)果提示TP通過提高抗氧化酶系活性減輕H2O2所致的氧化應(yīng)激損傷。

3 討論與結(jié)論

小腸上皮細(xì)胞為機(jī)體更新速度最快的一類細(xì)胞，其結(jié)構(gòu)和功能完整性對(duì)動(dòng)物健康具有重要作用。因此，體外培養(yǎng)小腸上皮細(xì)胞可進(jìn)一步了解和模擬腸道生物學(xué)功能。本研究成功分離得到原代鵝小腸上皮細(xì)胞，為進(jìn)一步研究腸道功能提供有效的細(xì)胞模型。

鵝是以草食為主的水禽，可充分利用纖維含量較高的青綠飼料和粗飼料，其小腸液微堿性環(huán)境及小腸內(nèi)纖維素酶有助于對(duì)粗纖維的消化。因此，維持小腸正常生理功能對(duì)鵝的健康尤為必要[7]。本研究通過體外建立鵝小腸氧化應(yīng)激損傷模型，研究鵝腸道發(fā)生氧化損傷機(jī)制。H2O2為一種重要的活性氧物質(zhì)，可穿透細(xì)胞膜與細(xì)胞內(nèi)鐵離子反應(yīng)，生成具有高活性自由基，因其理化性質(zhì)穩(wěn)定容易獲得，現(xiàn)已成為建立細(xì)胞氧化損傷模型的重要工具[8]?？琢盥?lián)等采用200 μmol·L-1濃度H2O2作用奶牛小腸上皮細(xì)胞2 h，成功建立奶牛小腸上皮細(xì)胞氧化損傷模型[9]。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，選用濃度為400 μmol·L-1H2O2作用鵝小腸上皮細(xì)胞2 h，細(xì)胞存活率顯著降至71.4%，且此時(shí)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，說明細(xì)胞產(chǎn)生一定程度的氧化損傷，但不會(huì)直接造成細(xì)胞死亡，適宜的抗氧化劑干預(yù)，可能恢復(fù)損傷。因此，此濃度和作用時(shí)間可作為建立鵝小腸上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型的適宜濃度，與孔令聯(lián)等研究不同，可能為細(xì)胞結(jié)構(gòu)和耐受性不同所致[9]。

MDA 為脂質(zhì)過氧化的標(biāo)志性產(chǎn)物，可間接反映細(xì)胞氧化損傷程度[10]。LDH正常情況下存在于機(jī)體組織細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生氧化損傷時(shí)，細(xì)胞膜受損，LDH 由胞質(zhì)內(nèi)泄漏。LDH 在細(xì)胞培養(yǎng)液中含量反映細(xì)胞膜受損程度[11]。SOD被稱為自由基清除劑，為生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，可將超氧自由基轉(zhuǎn)化為H2O2，使細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷[12]。SOD 活力可間接反映機(jī)體清除自由基能力。GSH-Px可使機(jī)體內(nèi)有毒的過氧化物還原為無毒的羥基化合物，同時(shí)促進(jìn)H2O2分解成氧氣和水，保持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整性[13]。王振云研究結(jié)果顯示，奶牛乳腺上皮細(xì)胞在H2O2誘導(dǎo)的氧化損傷下，MDA 和LDH 含量顯著增高，SOD 活性下降[14]。吳建民研究結(jié)果表明，雞小腸上皮細(xì)胞發(fā)生急性氧化應(yīng)激損傷時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH 酶活性顯著升高，細(xì)胞抗氧化酶SOD和GSH-Px活力顯著降低[15]。以上研究結(jié)果表明，H2O2可誘導(dǎo)不同動(dòng)物上皮細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)H2O2誘導(dǎo)鵝小腸上皮細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH和MDA 含量升高，SOD 和GSH-Px 活性下降。表明鵝小腸上皮細(xì)胞在H2O2作用下發(fā)生氧化應(yīng)激損傷，不僅產(chǎn)生大量脂質(zhì)過氧化物，且細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變，即膜質(zhì)內(nèi)LDH 透過細(xì)胞膜釋，細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH 水平顯著升高。而抗氧化酶活性下降，表明鵝小腸上皮細(xì)胞抗氧化能力降低。

近年研究表明，天然植物及其主效成分對(duì)畜禽具有抗氧化、增強(qiáng)免疫力、促生長等作用，已作為功能性飼料添加劑在畜牧業(yè)中廣泛應(yīng)用[16]。TP為茶葉中多羥基酚類化合物總稱，結(jié)構(gòu)中的酚羥基可與機(jī)體自由基結(jié)合，使自由基活性下降，減輕自由基對(duì)機(jī)體損傷[17]。大量體內(nèi)、體外試驗(yàn)表明TP 不僅可提高正常組織細(xì)胞的抗氧化能力，對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞也具有保護(hù)作用，但對(duì)不同物種及其所處生物時(shí)期作用效果不同，發(fā)揮抗氧化能力有效劑量也不同。孫丹鳳研究表明，茶多酚可顯著降低肉鴨小腸黏膜中MDA 含量，顯著提高小腸黏膜中SOD、GSH-Px、二胺氧化酶（DAO）活性[18]。何夢曉等研究發(fā)現(xiàn)，TP 可提高感染雞球蟲肉仔雞生長性能和抗氧化能力，改善盲腸微生物組成[19]。Ma 等研究表明，TP 可通過激活NFE2L2/HMOX1 信號(hào)通路減緩奶牛乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生的氧化應(yīng)激損傷[20]；Zhao 等研究表明，TP 可通過提高小鼠肝細(xì)胞抗氧化能力緩解酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷[21]。Cai 等研究表明，TP 通過提高小鼠腸上皮細(xì)胞增殖率和降低脂質(zhì)過氧化程度保護(hù)小鼠腸道免受高脂飲食導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷[22]。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TP 不僅可提高正常腸上皮細(xì)胞增殖率和抗氧化能力，還可通過提高腸上皮細(xì)胞對(duì)氧自由基的清除能力，降低脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減輕氧自由基對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能損傷，實(shí)現(xiàn)對(duì)腸上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài)的保護(hù)作用。