宜昌白山羊超數(shù)排卵效果的研究

種玉晴 朱芳賢 沈洪學(xué)

摘要：以宜昌白山羊為研究對象，探索了促卵泡素（FSH）不同劑量的超排效果。結(jié)果表明，CIDR+FSH+PG法處理宜昌白山羊，同期發(fā)情率100%，隨著FSH劑量的增加，超排處理的宜昌白山羊黃體、回收胚胎和可用胚的數(shù)量增多。當(dāng)FSH注射劑量為18 AU/只時，6月齡宜昌白山羊平均排卵點為18.60個、回收胚胎15.60枚，其中可用胚14.20枚;12月齡羊平均排卵點為20.00個、回收胚胎16.25枚，其中可用胚14.00枚。因此宜昌白山羊超排處理的適宜FSH劑量為18 AU/只。FSH劑量為18 AU/只時，6月齡羊的超排效果與12月齡羊之間沒有明顯差異，說明宜昌白山羊性成熟即可進(jìn)行超排處理，該研究結(jié)果可為同期發(fā)情、超數(shù)排卵在宜昌白山羊產(chǎn)業(yè)化中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：同期發(fā)情;超數(shù)排卵;FSH劑量;年齡;宜昌白山羊

中圖分類號：S826 ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2020）01-0110-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.01.024 ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Abstract： Yichang white goats were selected to study the effects of different FSH dosages on superovulation. The results showed that the rate of synchronization estrus was 100% and the number of corpus luteum， collected embryo and effectiveembryo increased with the increment of FSH dosage. When injected 18 AU FSH per goat， the corpus luteum， collected embryos and effective embryos of 6-month-old goats was 18.60， 15.60 and 14.20， respectively while of the 12-month-old goats was 20.00， 16.25 and 14.00， respectively. And the superovulation effects had no significant difference between 6-month- and 12-month- goats. It suggested that the Yichang white goat could be treated superovulation at 6-month-old and the suitable FSH dosage of superovulation for 6- and 12-months old goat was 18 AU/head.

Key words： synchronization estrus; superovulation; FSH dosage; age; Yichang white goat

宜昌白山羊是中國優(yōu)良的地方山羊品種資源，具有皮薄、肉嫩、適應(yīng)性強(qiáng)、耐粗飼等特點，先后被列入《湖北省家畜家禽品種志》《中國羊品種志》和《中國畜禽遺傳資源志 ?羊志》。宜昌市先后引入波爾山羊等進(jìn)行雜交肉羊生產(chǎn)，因此存在品種質(zhì)量退化、數(shù)量減少等對品種資源不利的影響[1]。超數(shù)排卵是上世紀(jì)發(fā)展起來的一項繁殖新技術(shù)，即用各種外源性促性腺激素誘發(fā)動物卵巢的多個卵泡發(fā)育并排出具有受精能力卵子，是胚胎移植的重要技術(shù)環(huán)節(jié)。對宜昌白山羊超數(shù)排卵的系統(tǒng)研究鮮見報道，因此本試驗對同期發(fā)情、超數(shù)排卵等胚胎移植關(guān)鍵技術(shù)在宜昌白山羊中的應(yīng)用進(jìn)行了研究，主要分析促卵泡素（FSH）劑量對超數(shù)排卵的影響， 以期建立一套適合于宜昌白山羊產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的同期發(fā)情和超數(shù)排卵方案，為進(jìn)行規(guī)?；咛ヒ浦蔡峁┳銐蚩捎玫呐咛?，也可為宜昌白山羊繁殖生產(chǎn)、品種保存、良種擴(kuò)繁等提供技術(shù)支撐和保障。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗藥品

山羊孕酮陰道栓（CIDR）由新西蘭DEC國際有限公司生產(chǎn)（每個含1.9 g孕酮），促卵泡素（FSH）為日本進(jìn)口產(chǎn)品，促排3號（LHRH-A3）來自寧波市三生藥業(yè)有限公司，氯前列烯醇（PG）為上海市計劃生育科學(xué)研究所生產(chǎn)，維生素ADE注射液為北京立時達(dá)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 ?試驗羊的選擇和飼養(yǎng)管理

選擇13只6月齡和14只12月齡健康的宜昌白山羊為試驗對象。試驗羊體質(zhì)健康、無繁殖障礙，健康無病，膘情中等以上，體格大小相近，發(fā)情周期正常，無明顯生殖道疾病。所選山羊在試驗前1個月集中進(jìn)行體內(nèi)外驅(qū)蟲和常規(guī)免疫，采用舍飼方式飼養(yǎng)，根據(jù)營養(yǎng)需要配制日糧，按每只0.2～0.3 kg/d早晚補(bǔ)飼。

1.3 ?試驗方法

將6月齡和12月齡宜昌白山羊隨機(jī)分為3組，注射FSH的劑量分別為13、16、18 AU/只，進(jìn)行超數(shù)排卵處理，選擇16只2～3歲成年健康的宜昌白山羊公羊配種。參照羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程（NY/T 1571—2007）采用孕酮陰道栓和前列腺素對宜昌白山羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，用FSH和促黃體素對試驗?zāi)秆蜻M(jìn)行超排處理。即母羊陰道放入CIDR， 放入當(dāng)天記為第0天，從第九天下午開始采用遞減法在4 d內(nèi)分7～8次分別注射FSH 13、16、18 AU/只，第一次注射FSH時肌注維生素ADE注射液3 mL。第十一天下午注射PG 0.2 mg。第十二天下午撤栓并用公羊試情，發(fā)情母羊不再注射FSH，改注促排3號15 μg，未發(fā)情羊繼續(xù)注射FSH。第十三天繼續(xù)試情，發(fā)情母羊不再注射FSH，改注促排3號15 μg，未發(fā)情羊繼續(xù)注射最后1針FSH。

用公羊試情法鑒定母羊發(fā)情。將戴有試情布的公羊放置母羊圈，從第十二天下午開始每天早、晚各試情1次，有發(fā)情征兆并接受試情公羊爬跨的判定為發(fā)情母羊，撤栓后72 h內(nèi)發(fā)情視為同期發(fā)情處理有效。發(fā)情后8～12 h采用本交配種并注射維生素ADE注射液3 mL，配種2～3次，配種間隔8～12 h。與配公羊外貌符合品種特征，精神旺盛，體質(zhì)健壯，外生殖器官健康。

在放栓之日起第十九天禁食禁水，第二十天用手術(shù)法回收胚胎，方法參照文獻(xiàn)[2]進(jìn)行。發(fā)情母羊空腹24 h，經(jīng)麻醉處理后保定于手術(shù)架，對創(chuàng)口刮毛和滅菌，在乳腺根部兩乳靜脈之間切開腹中線，將子宮及卵巢拉出體外， 記錄處理羊卵巢上的黃體數(shù)。沖卵管一端在輸卵管傘部插入，另一端接集卵平皿，然后將套管針經(jīng)宮管連接部刺入，注射沖胚液沖胚。按ELDSEN等的分級標(biāo)準(zhǔn)，在顯微鏡下鑒定胚胎發(fā)育時期及胚胎狀態(tài)，根據(jù)形態(tài)特征將胚胎分為A、B、C、D等級[3]，其中A、B級胚胎為合格胚，可用于移植或冷凍。記錄胚胎數(shù)量、合格胚（桑椹胚和囊胚）數(shù)、退化胚數(shù)和未受精卵的數(shù)量。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?宜昌白山羊的同期發(fā)情效果

本試驗采用孕酮陰道栓和前列腺素進(jìn)行同期發(fā)情處理，結(jié)果表明，6月齡和12月齡宜昌白山羊母羊經(jīng)同期發(fā)情處理可在撤栓后72 h內(nèi)發(fā)情，發(fā)情集中在撤栓后48 h內(nèi)，發(fā)情率為100%，說明CIDR+FSH+PG處理宜昌白山羊可較好地實現(xiàn)同期發(fā)情。

2.2 ?FSH不同劑量對6月齡宜昌白山羊超數(shù)排卵效果的影響

不同劑量FSH對6月齡宜昌白山羊的超排效果的影響見表1。由表1可見，用13 AU/只的FSH處理3只6月齡宜昌白山羊，獲33個排卵點，胚胎回收率66.7%，其中1只羊僅獲3個排卵點且未獲受精卵、1只羊獲11個排卵點且只獲2枚可用胚，僅1只羊獲18枚可用胚。用16 AU/只的FSH處理5只6月齡宜昌白山羊，獲50個排卵點，胚胎回收率90%，其中有2只羊共獲3個排卵點且沒有回收到胚胎、1只羊獲8個排卵點并回收6枚胚胎、另2只羊獲得39個排卵點和37枚可用胚胎。用18 AU/只的FSH處理5只6月齡宜昌白山羊，獲93個排卵點，胚胎回收率83.9%，其中1只羊獲16個排卵點和8枚可用胚胎，其余4只羊分別可回收11～24枚可用胚。從FSH不同劑量對6月齡宜昌白山羊的超排效果來看，隨著FSH用量的增加，6月齡宜昌白山羊超排的回收胚胎和可用胚胎的數(shù)量逐漸增加，超排效果越來越好，其中18 AU/只的FSH劑量組超排效果最好。

2.3 ?FSH不同劑量對12月齡宜昌白山羊超數(shù)排卵效果的影響

不同劑量FSH對12月齡宜昌白山羊的超排效果的影響見表1。由表1可見，用13 AU/只的FSH處理5只12月齡宜昌白山羊，獲65個排卵點，胚胎回收率83.1%，其中1只羊獲9個排卵點但未回收到胚胎，1只羊獲9個排卵點且只獲1枚可用胚，另外3只羊共獲47個排卵點和35枚可用胚。用16 AU/只的FSH處理5只12月齡宜昌白山羊，獲78個排卵點，胚胎回收率83.3%，每只羊獲8～25個排卵點和6～17枚可用胚。用18 AU/只的FSH處理4只12月齡宜昌白山羊，獲80個排卵點，胚胎回收率81.3%，有9枚退化胚胎，其中有1只羊有12個排卵點但未回收到胚胎，其余3只羊每只回收到17～21枚可用胚。從FSH不同劑量對12月齡宜昌白山羊的超排效果來看，隨著FSH劑量的增加，12月齡宜昌白山羊超排的回收胚胎和可用胚的數(shù)量逐漸增加，其中18 AU/只的FSH劑量組和16 AU/只的FSH劑量組超排效果相當(dāng)，但18 AU/只劑量組退化胚胎數(shù)多，因此控制好發(fā)情和收集胚胎時間，用18 AU/只的FSH劑量超排效果最佳。

2.4 ?年齡對宜昌白山羊超數(shù)排卵效果的影響

用各劑量FSH處理6月齡和12月齡宜昌白山羊的超排效果見表2。由表2可見，當(dāng)FSH劑量為13 AU/只和16 AU/只時，12月齡羊獲得的黃體、回收胚、可用胚和A級胚的數(shù)量都遠(yuǎn)高于6月齡羊。而當(dāng)FSH劑量為18 AU/只時，12月齡羊的超排效果與6月齡羊差異不明顯，其中A級胚數(shù)量12月齡羊還低于6月齡羊。

3 ?小結(jié)與討論

3.1 ?宜昌白山羊的同期發(fā)情

同期發(fā)情是指利用生殖激素制劑人為地控制并調(diào)整空懷母畜的發(fā)情周期，對母羊的發(fā)情周期進(jìn)行同期化處理，從而使母羊群在短時間內(nèi)集中發(fā)情和排卵，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于舍飼養(yǎng)羊生產(chǎn)[4]。在規(guī)?；s化羊場使用此項技術(shù)有利于母羊發(fā)情、配種、妊娠、分娩、羔羊培育、育肥和出欄等同期化，節(jié)省大量人力和時間，降低飼養(yǎng)管理成本，也便于人工授精技術(shù)的實施與廣泛應(yīng)用，充分有效地發(fā)揮優(yōu)良種公畜的作用，還可以有效縮短母畜的空懷期，節(jié)省飼料成本，增加產(chǎn)羔收入，提高養(yǎng)羊經(jīng)濟(jì)效益[5]。羊胚胎移植供受體的同期發(fā)情處理效果直接影響胚胎移植利用率和受胎率[6]，因此同期發(fā)情技術(shù)也是家畜胚胎移植技術(shù)中的一個重要配套技術(shù)環(huán)節(jié)，對提高優(yōu)良家畜繁殖率具有重要意義。同期發(fā)情的處理方法有孕酮陰道栓法（CIDR）、前列腺素法（PG）、促性腺激素（FSH或PMSG）法及其組合法。前列腺素法可溶解黃體，促進(jìn)母羊黃體退化，使母羊卵巢中的卵泡同時發(fā)育，促進(jìn)母羊在預(yù)定時間內(nèi)發(fā)情[7];陰道栓中孕酮的持續(xù)釋放，在母羊體內(nèi)形成人工黃體期與自然黃體期并存的狀態(tài)，通過選擇撤栓時間，促使母羊同期發(fā)情;促性腺激素則促進(jìn)卵泡發(fā)育、成熟和排卵。單一激素處理山羊的同期發(fā)情效果不穩(wěn)定，因此人們采用激素組合法，其中CIDR+FSH+PG法的同期發(fā)情率、排卵率、受胎率都優(yōu)于CIDR+PMSG+PG法[8-10]。在自然條件下，宜昌白山羊四季發(fā)情，但春季和秋季發(fā)情較多[1]，若常年配種，一年四季連續(xù)產(chǎn)羔，不利于進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)和管理。而目前由于養(yǎng)羊業(yè)的快速發(fā)展，宜昌白山羊的養(yǎng)殖模式也逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)楦阌诠芾?、效率更高的舍飼養(yǎng)殖，同期發(fā)情作為高效養(yǎng)殖的技術(shù)手段在宜昌白山羊中還鮮見相關(guān)使用報道。本試驗采用CIDR+FSH+PG法對宜昌白山羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，6月齡和12月齡母羊的發(fā)情率均為100%，說明此法適用于對宜昌白山羊進(jìn)行同期發(fā)情處理。本試驗同期發(fā)情措施也為超排與胚胎移植等先進(jìn)繁殖技術(shù)在宜昌白山羊的本品種選育與提純改良中的應(yīng)用提供了技術(shù)支持。

3.2 ?宜昌白山羊的超數(shù)排卵

超數(shù)排卵（簡稱超排）是在母畜發(fā)情周期的適當(dāng)時期注射外源性的促性腺激素，提高血液中促性腺激素的濃度，減少卵巢中閉鎖卵泡數(shù)量，從而使較多的卵泡發(fā)育并排卵[11]。超數(shù)排卵和同期發(fā)情是胚胎移植等胚胎生物技術(shù)的核心技術(shù)環(huán)節(jié)。在家畜胚胎移植技術(shù)中，超數(shù)排卵在單胎或雙胎動物胚胎移植中具有十分重要的作用，可以讓優(yōu)良母畜排出比正常多幾倍甚至幾十倍的卵子，從而最大限度地利用其優(yōu)良品質(zhì)[12]。超數(shù)排卵所用激素主要有FSH、PMSG和促排卵素，前列腺素和孕激素是超排的輔助激素。PMSG激素的效果比較平緩，卵巢體積不會劇烈增大，處理后的卵巢容易恢復(fù)正常，排卵效率高，排卵比較整齊。但其半衰期較長，容易引發(fā)卵巢囊腫和大卵泡的存在，從而引起供體體內(nèi)雌激素水平增高，進(jìn)而對卵子成熟、受精和胚胎的發(fā)育產(chǎn)生不利影響，導(dǎo)致回收胚胎的質(zhì)量下降。在排卵率、受精率和高質(zhì)量胚胎產(chǎn)量方面，F(xiàn)SH的超排效果比PMSG好[13]，因此FSH是目前牛、羊超排中最常用的促性腺激素。影響山羊超排效果的因素很多，如品種、年齡、季節(jié)、個體差異、激素種類、產(chǎn)地、劑量、重復(fù)超排等[14]。宜昌白山羊性成熟早，在正常飼養(yǎng)管理條件下，公、母羊3月齡就有性表現(xiàn)，母羊5月齡左右性成熟，初配年齡為6～8月齡[1]。本試驗用不同劑量FSH對6月齡和12月齡宜昌白山羊進(jìn)行超數(shù)排卵處理，比較分析超排效果，確定適合宜昌白山羊有效的超數(shù)排卵方法，為進(jìn)行規(guī)?；咛ヒ浦蔡峁┳銐蚩捎玫呐咛?。結(jié)果表明，用低劑量FSH處理兩個年齡段宜昌白山羊都存在回收不到胚胎的情況，劑量越大則排卵點越多且所獲可用胚越多，該結(jié)果表明FSH的劑量影響山羊的超排效果。不同品種個體對FSH的應(yīng)答反應(yīng)不同，有其最合適的FSH劑量[15，16]，本研究發(fā)現(xiàn)對宜昌白山羊進(jìn)行超排的適宜FSH劑量為18 AU/只。超排是一個復(fù)雜的生理過程，受多種因素影響，年齡顯著影響超排效果[13]。本試驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)FSH劑量為18 AU/只時，6月齡羊的超排效果與12月齡羊之間沒有差異，說明宜昌白山羊性成熟即可進(jìn)行超排處理。本試驗還發(fā)現(xiàn)超排處理后有的個體有大量排卵點但卻沒有回收到胚胎，如12月齡羊按18 AU/只的FSH劑量處理時，有1只羊有12個黃體但未回收到胚胎，其余個體都可回收20枚以上胚胎。FSH劑量越低則越易出現(xiàn)回收不到胚胎現(xiàn)象，說明宜昌白山羊個體間對激素的應(yīng)答反應(yīng)時間有差異，今后應(yīng)在注射促排卵激素時間點上進(jìn)行調(diào)整，以便獲得更多的回收胚胎。

超數(shù)排卵技術(shù)廣泛應(yīng)用于山羊品種保存、良種擴(kuò)繁和胚胎移植，超排處理酉州烏羊[14]、崇明白山羊[15]、隴東黑山羊[16]、阿爾巴斯白絨山羊[17]、波爾山羊[18]、重慶板角山羊[19]、紅骨山羊[20]、徐淮山羊[21]獲黃體12.60～23.50個、回收胚胎7.18～15.57枚、可用胚6.32～13.95枚。本試驗用18 AU/只的FSH劑量超排處理宜昌白山羊，6月齡羊和12月齡羊的超排效果無明顯差異，平均黃體數(shù)19.22個、回收胚胎15.89枚、可用胚數(shù)14.10枚，這些指標(biāo)都高于其他山羊品種的超排處理，說明本試驗采用CIDR+FSH+PG的超排處理方案適合宜昌白山羊。

4 ?結(jié)論

用CIDR+FSH+PG處理宜昌白山羊，同期發(fā)情率100%，超排處理的最佳FSH劑量為18 AU/只，且性成熟即可進(jìn)行超排處理，研究結(jié)果可為同期發(fā)情、超數(shù)排卵在宜昌白山羊產(chǎn)業(yè)化中的應(yīng)用提供參考。

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