青蒿素與二甲氧芐啶聯(lián)合抗雞球蟲(chóng)的試驗(yàn)研究

陳永亮，劉丹丹，汪飛燕

(1.徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 徐州 221006；2．揚(yáng)州大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009；3.江蘇省高校動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 揚(yáng)州，225009)

球蟲(chóng)病作為雞養(yǎng)殖尤其是平養(yǎng)或散養(yǎng)模式下一種常見(jiàn)的疾病，往往嚴(yán)重影響雞的生長(zhǎng)發(fā)育，并對(duì)養(yǎng)殖效益造成重大損失，需要在雞生產(chǎn)中予以重點(diǎn)防治。目前防治雞球蟲(chóng)病的主要藥物還是鹽霉素、馬杜霉菌、地克珠利等抗球藥，球蟲(chóng)已經(jīng)產(chǎn)生了一定的耐藥性，防治效果越來(lái)越差，而藥物殘留問(wèn)題則越來(lái)越受到人們的關(guān)注。

有研究發(fā)現(xiàn)，植物提取物——青蒿素(ART)能減少感染雞的糞便卵囊數(shù)，減輕腸道病變，且無(wú)明顯的殘留和毒副作用[1]，是一種可能替代抗球藥的綠色獸藥，而將抗菌增效劑三甲氧芐啶(TMP)與ART聯(lián)合使用，還具有良好的抗球蟲(chóng)感染增效作用[2]。

本試驗(yàn)以柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(Eimeriatenella)感染導(dǎo)致盲腸性球蟲(chóng)病為模型，觀察雞群發(fā)病和死亡情況，記錄相對(duì)增重率、存活率、卵囊值、病變記分、血便數(shù)，計(jì)算抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)，研究ART與另一種常見(jiàn)抗菌增效劑二甲氧芐啶(DVD)聯(lián)合應(yīng)用在抗球蟲(chóng)方面的協(xié)同效應(yīng)，以達(dá)到雞生產(chǎn)中防治球蟲(chóng)病時(shí)減少抗菌增效劑使用及其殘留的目的。

1 材料與方法

1.1 材料

青蒿素購(gòu)于梯希愛(ài)(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司，純度97%以上；二甲氧芐啶購(gòu)于武漢遠(yuǎn)成共創(chuàng)科技有限公司，醫(yī)藥級(jí)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

1日齡健康黃羽肉雞，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，飼養(yǎng)于經(jīng)嚴(yán)格消毒且無(wú)球蟲(chóng)污染的動(dòng)物房，同時(shí)飼喂無(wú)抗球蟲(chóng)藥的全價(jià)飼料，自由采食和飲水。

1.3 試驗(yàn)蟲(chóng)種

柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(Eimeriatenella)揚(yáng)州株孢子化卵囊為揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)學(xué)教研室經(jīng)單卵囊分離建株，經(jīng)無(wú)球蟲(chóng)污染雞傳代保存。

1.4 試驗(yàn)方法

13日齡稱(chēng)重分組，共分為5個(gè)組，每組15只雞，分組當(dāng)天即用藥，直至試驗(yàn)結(jié)束，具體分組情況和用藥程序見(jiàn)表1。14日齡，各試驗(yàn)組每只雞經(jīng)嗉囊接種8×104個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊。感染期間觀察各組雞群發(fā)病情況，包括飲食、飲水、精神以及糞便性狀等。感染84 h后，開(kāi)始觀察和記錄血便情況、雞只死亡情況，直至試驗(yàn)結(jié)束；感染114 h后，定時(shí)采集陽(yáng)性對(duì)照組糞樣檢查卵囊，有卵囊排出時(shí)收集各試驗(yàn)組糞便，采用麥克馬斯特法記錄卵囊排出量；感染后192 h，所有試驗(yàn)組雞只稱(chēng)重，剖殺，盲腸病變記分。試驗(yàn)期間，記錄雞只死亡情況，剖檢觀察病變。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組及用藥程序Table 1 Experiment design and drug usage

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS 18中的Duncan新復(fù)極差法對(duì)各試驗(yàn)組雞的平均增重與平均病變記分進(jìn)行顯著性分析。

1.6 判定標(biāo)準(zhǔn)

給藥、攻蟲(chóng)期間，記錄各試驗(yàn)組的相對(duì)增重率、存活率、卵囊值、病變記分、血便數(shù)，計(jì)算抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)。

ACI在180以上時(shí)為高效，在160～180之間為中效范圍，在120～160之間為低效。ACI=(存活率+相對(duì)增重率)-(病變值+卵囊值)。其中：

存活率(%)=存活雞數(shù)÷開(kāi)始雞數(shù)×100%。

相對(duì)增重率(%)=用藥組或感染不用藥組雞的平均增重÷不感染不用藥組雞的平均增重×100%。

血便記分：參照Morehouse和Baron(1970)[3]標(biāo)準(zhǔn)，自血便排出之日起，記錄各組的血便總數(shù)。

病變記分：按Johson和Reid(1970)[4]標(biāo)準(zhǔn)，記錄每組每只雞的盲腸病變得分，進(jìn)行SPSS分析，獲得組平均病變記分。

病變值：每組的平均病變記分×10。

每雞平均卵囊數(shù)：盲腸卵囊數(shù)按蔣金書(shū)等(1992)[5]的方法計(jì)算，根據(jù)每組的卵囊總數(shù)獲得每組每只雞的平均卵囊數(shù)。

卵囊值：按角田清(1983)[6]的方法計(jì)算，根據(jù)平均卵囊數(shù)獲得。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 血便計(jì)分

各組血便排出情況與血便記分見(jiàn)表2。陽(yáng)性對(duì)照組于感染后84 h開(kāi)始出現(xiàn)血便，此時(shí)開(kāi)始記錄各試驗(yàn)組的血便數(shù)，直至感染后168 h各組停排血便。ART+DVD組血便數(shù)多于DVD組，少于ART組和陽(yáng)性對(duì)照組。其中，DVD組血便數(shù)最少，其次為ART+DVD組、ART組、陽(yáng)性對(duì)照組。

表2 各組血便情況Table 2 Record of bloody feces in each group

2.2 存活率、平均增重與相對(duì)增重率

各組的成活率、平均增重與相對(duì)增重率見(jiàn)表3。在存活率方面，ART+DVD組的存活率均為93.3%，ART組的存活率86.7%，陽(yáng)性對(duì)照組的存活率為80%，DVD組和陰性對(duì)照組的存活率為100%。在平均增重方面，各用藥組與感染不給藥組相比均有差異；ART+DVD組的平均增重高于ART組，但差異不顯著(P>0.05)；ART+DVD組低于DVD組，差異不顯著(P>0.05)；ART組的平均增重低于DVD組，且差異顯著(P<0.05)，低于感染不給藥組，差異不顯著(P>0.05)。其中，DVD組的平均增重率最高。在相對(duì)增重率方面，感染不給藥組為81.41%，ART組、DVD組、ART+DVD組分別為72.41%、92.29%和77.87%。

2.3 病變記分與病變值

各組的平均病變記分與病變值見(jiàn)表4。ART組的平均病變記分與陽(yáng)性對(duì)照組的相近，約為3.2，病變值約為32；ART+DVD組的平均病變記分略高于DVD組，但差異不顯著(P>0.05)，低于ART組和陽(yáng)性對(duì)照組，差異不顯著(P>0.05)。

表3 各組存活率、平均增重與相對(duì)增重率Table 3 Mortality rate,average weight gain and relative weight gain of each group

注：同列數(shù)據(jù)上標(biāo)不同小寫(xiě)字母者表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Note:Different lowercase letter superscripts in the same column mean significant difference (P<0.05).The same below.

表4 試驗(yàn)各組平均病變記分與病變值Table 4 Pathological score and pathological value of each group

2.4 卵囊產(chǎn)量與卵囊值

各組每只雞的平均卵囊產(chǎn)量與卵囊值見(jiàn)表5。陽(yáng)性對(duì)照組每只雞的平均卵囊產(chǎn)量最高，為0.78×108個(gè)卵囊，卵囊值為40。其次為ART+DVD組、ART組和DVD組，平均卵囊產(chǎn)量分別為0.57×108，0.55×108，0.46×108，對(duì)應(yīng)卵囊值均為20。

2.5 抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)

各組的抗球蟲(chóng)指數(shù)見(jiàn)表6。DVD組的抗球蟲(chóng)指數(shù)為145.99，屬抗球蟲(chóng)低效。ART+DVD組和ART組的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為122.47和107.1。陽(yáng)性對(duì)照組的抗球蟲(chóng)指數(shù)僅為89.71。

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在感染球蟲(chóng)84 h后，陽(yáng)性組開(kāi)始出現(xiàn)血便，感染168 h以后各試驗(yàn)組血便消失，在此期間，ART組和陽(yáng)性對(duì)照組的食欲減退、精神萎靡，而其他組正常。其中ART+DVD組血便數(shù)高于DVD組，低于ART組和陽(yáng)性對(duì)照組。存活率、病變記分、平均增重等結(jié)果顯示，ART+DVD組低于DVD組，高于ART組。用藥組卵囊產(chǎn)量與卵囊值均低于陽(yáng)性對(duì)照組，但各用藥組之間的卵囊產(chǎn)量與卵囊值比較接近。

從抗球蟲(chóng)指數(shù)看出，DVD以300 mg/kg飼料拌料，用藥至試驗(yàn)結(jié)束，其抗球蟲(chóng)指數(shù)為145.99，具有低效抗球蟲(chóng)水平。而ART組(以300 mg/kg飼料拌料)和ART+DVD組(ART 150 mg/kg+DVD 150 mg/kg飼料拌料)的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為107.1和122.47，抗球蟲(chóng)效果較小。但較ART組，ART+DVD組在病變值、卵囊值、血便值等指標(biāo)效果較好，且更接近于DVD組。

研究結(jié)果表明，ART+DVD組的抗球蟲(chóng)效果高于ART組，低于DVD組；ART單獨(dú)使用時(shí)抗球蟲(chóng)效果一般，ART與DVD混用時(shí)，不僅增強(qiáng)了抗球蟲(chóng)效果，更可以降低DVD的用藥量，降低了藥物殘留的可能性。但ART無(wú)論是單獨(dú)使用或是與DVD聯(lián)合應(yīng)用，抗球蟲(chóng)指數(shù)均未達(dá)到高效作用，與有關(guān)研究有差異[7-8]，這可能與雞拌料中ART的添加比例有關(guān)。另外，為了切實(shí)發(fā)揮并進(jìn)一步增強(qiáng)ART聯(lián)合DVD在抗雞球蟲(chóng)病的效果，還需要在兩者配伍比例、使用方法等方面作深入研究。

表5 試驗(yàn)各組的卵囊產(chǎn)量(×108)與卵囊值Table 5 Oocysts production (×108) and oocysts value of each group

表6 試驗(yàn)各組的抗球蟲(chóng)指數(shù)Table 6 ACI value of each group