兩種方法提取羅漢果中脂肪酸的比較分析

侯冬巖，回瑞華，李鐵純，刁全平，漆玉琴

(鞍山師范學院 化學與生命科學學院,遼寧 鞍山 114007)

羅漢果系葫蘆科多年生藤本植物的果實，是我國特有的一種藥材.中國百分之九十羅漢果產于桂林永?？h和龍勝縣，是桂林名貴的土特產，也是國家首批批準的藥食兩用的食材[1,2].

羅漢果營養(yǎng)豐富，主要含有三萜類化合物、黃酮類化合物、糖類、氨基酸、脂肪酸、甘露醇等.現(xiàn)代科學研究表明，羅漢果可以預防呼吸道感染，對感冒引起的咽喉腫痛或咳嗽不止具有良好的治療作用.此外，羅漢果還可以防治因霧天吸入污濁空氣引起的咽部瘙癢，有潤肺的良好功效.羅漢果甜度高、熱量低，是糖尿病患者良好的天然功能性甜味劑.羅漢果具有提高免疫功能﹑保護肝臟﹑抑菌﹑抗氧化等作用，具有廣泛的開發(fā)前景[3,4].國內外對羅漢果的研究多有報道，但主要集中在非糖類的甜味物質葫蘆素烷三萜類化合物的研究上，對其他成分的研究少有報道[5].

本文采用回流提取法和索氏提取法提取羅漢果中脂肪酸并進行比較分析，為羅漢果的開發(fā)利用提供實驗依據.

1 實驗部分

1.1 實驗材料

石油醚﹑乙醚﹑甲醇﹑氫氧化鉀(所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水)；樣品羅漢果：購于廣西桂林，粉碎后過0.6 mm篩，備用.

1.2 實驗儀器

HP 6890-5973型氣相色譜-質譜聯(lián)用儀(美國安捷倫公司)；KQ-250B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；RE-52CS旋轉蒸發(fā)器(上海亞榮盛華儀器廠)；索氏提取器(江蘇高郵市教研儀器廠).

1.3 回流提取法提取羅漢果中脂肪酸成分

1.3.1 羅漢果中脂肪油的提取 稱取10．00 g經粉碎、過篩的羅漢果樣品，置于圓底燒瓶中，加入石油醚 150 mL，加熱回流6 h，提取液經減壓旋轉蒸發(fā)回收溶劑，得油狀物.

1.3.2 脂肪油中脂肪酸的甲酯化 移取 0.5 mL羅漢果脂肪油于圓底燒瓶中，加入8 mL正己烷、0.5 mol/L的氫氧化鉀-甲醇溶液,經水浴回流 60 min，冷卻至室溫，將溶液移入離心試管內，加入10 mL水，超聲振蕩﹑離心，取上清液待做GC/MS分析.

1.4 索氏提取法提取羅漢果中脂肪酸成分

1.4.1 羅漢果中脂肪油的提取 稱取10.00 g經過粉碎、過篩的羅漢果樣品，置于索氏提取器中，加入石油醚150 mL，提取6 h，提取液減壓旋轉蒸發(fā)回收溶劑，得油狀物.

1.4.2 脂肪油中脂肪酸的甲酯化 移取0.5 mL羅漢果脂肪油于圓底燒瓶中.加入8 mL正己烷、0.5 mol/L的氫氧化鉀-甲醇溶液,經水浴回流 60 min，冷卻至室溫，將溶液移入離心試管內，加入10 mL水，超聲振蕩﹑離心，取上清液待做GC/MS分析.

1.5 氣相色譜/質譜法測定

氣相色譜條件:色譜柱HP-5,25 m×0.20 mm×0.20 μm彈性石英毛細管柱，進樣口溫度300 ℃，柱溫：以10 ℃/ min從60 ℃升溫到280 ℃，保持10 min；進樣量0.4 μL，分流比為20∶1，溶劑延遲3 min，載氣為He氣，流速為1 mL/min.

質譜條件：離子源為電子轟擊源，離子源溫度230 ℃，電離電壓70 eV，電子倍增器電壓1 345 V，發(fā)射電流34.6 μA；接口溫度230 ℃；質量范圍：m/z 20～500.

1.6 測定方法

取經酯化處理后的樣品0.4 μL進樣，由GC/MS所得的質譜信息進行GC/MS分析.

以G1701BA化學工作站檢索Nist98標準譜庫，結合人工解析核對，對酯化后的脂肪酸的化學成分進行鑒定，得到各組分在總組分中的相對百分含量，兩種方法提取羅漢果脂肪酸成分的總離子流圖如圖1和圖2所示.

2 結果與討論

2.1 實驗結果

由回流提取法和索氏提取法提取羅漢果中脂肪酸成分，GC/MS總離子流圖鑒定結果見表1.

由表1可知,經回流提取法提取羅漢果中的脂肪酸，共提取出12種脂肪酸，主要成分為：9，12-十八碳二烯酸(45.58%)，9，12，15-十八碳三烯酸 (亞麻酸)(9.25%)，14-甲基十五烷酸(8.94%)，十八烷酸為(6.52%).其中，飽和脂肪酸相對含量為16.26 %，不飽和脂肪酸相對含量為55.55%.

經索氏提取法提取羅漢果中的脂肪酸，共提取出7種脂肪酸，主要成分為：9，12-十八碳二烯酸(59.71%)，14-甲基十五烷酸(13.09%)，十八烷酸為(9.10%).其中，飽和脂肪酸相對含量為23.53 %，不飽和脂肪酸相對含量為60.31%.

2.2 結果討論

由實驗結果可知，通過回流提取法和索氏提取法提取羅漢果中脂肪酸成分，回流提取法鑒定出的成分為12種脂肪酸，索氏提取法鑒定出的成分為7種脂肪酸，回流提取法鑒定出的成分多于索氏提取法鑒定出的成分.回流提取法鑒定出的成分相對含量為71.81%，索氏提取法鑒定出的成分相對含量為83.84%，索氏提取法鑒定出的成分相對含量高于回流提取法鑒定出的成分相對含量值.

通過回流提取法鑒定出的9,12,15-十八碳三烯酸即亞麻酸占9.25%.亞麻酸是人體必須又不能自身合成的omega-3脂肪酸.人類身體幾乎所有的病變都是由細胞發(fā)炎引起，而omega-3是細胞膜的組成成分，它能修復細胞的完整、改善細胞間的流動性和信息傳遞.omega-3主要存在深海魚油中，加工提煉要求技術條件很高而且海洋資源遠不能滿足人類的需求.羅漢果是藥食兩用的食材，將羅漢果作為omega-3來源，可以大量種植開發(fā)，具有廣闊的應用前景.

圖1 回流提取法提取羅漢果中脂肪酸成分的總離子流圖

圖2 索氏提取法提取羅漢果中脂肪酸成分的總離子流圖

表1 兩種方法提取羅漢果中脂肪酸成分鑒定結果