毛細(xì)支氣管炎患兒胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素的表達(dá)水平與復(fù)發(fā)性喘息的相關(guān)性分析

歐婉婷 雷克競(jìng) 唐國(guó)紅 張本金

毛細(xì)支氣管炎是嬰幼兒最常見的下呼吸道感染，主要由冬季病毒季節(jié)期間嬰兒的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial viral, RSV)引起，其病理特征是急性炎癥，小氣道上皮細(xì)胞的水腫和壞死，黏液產(chǎn)生增加和支氣管痙攣，以鼻炎，呼吸急促，喘息，咳嗽等呼吸改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)[1-4]。目前研究已經(jīng)確定年齡較小、合并先天性心臟病等是與細(xì)支氣管炎住院相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素[5]。而細(xì)支氣管炎的嬰兒經(jīng)常發(fā)生復(fù)發(fā)性喘息和哮喘[6]。此外，嬰兒毛細(xì)支氣管炎已被證明與兒童哮喘的發(fā)展有很強(qiáng)的因果關(guān)系[7]。胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(thymic stromal lymphopoietin, TSLP)是一種上皮細(xì)胞來源的細(xì)胞因子，研究證實(shí)其是過敏性氣道反應(yīng)的關(guān)鍵引發(fā)劑[8]。研究表明TSLP表達(dá)與Th2相關(guān)效應(yīng)細(xì)胞因子間關(guān)系密切，相關(guān)研究認(rèn)為TSLP在過敏性哮喘及其他呼吸道病毒感染的過程中起到重要作用[9-10]。現(xiàn)對(duì)TSLP表達(dá)水平與毛細(xì)支氣管炎患兒發(fā)生復(fù)發(fā)性喘息的相關(guān)性報(bào)道如下。

資料及方法

一、一般資料

將2015年月至2017年1月我院收治的151例毛細(xì)支氣管炎患兒根據(jù)治療后1年內(nèi)是否發(fā)生復(fù)發(fā)性喘息分為復(fù)發(fā)性喘息組45例，及對(duì)照組106例。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第八版《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》制定[11]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合毛細(xì)支氣管炎診斷的患兒；②年齡在6歲以下的患兒；③病史資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并免疫缺陷、哮喘、繼發(fā)肺結(jié)核等其他肺部疾病患兒；②合并慢性炎癥性疾病患兒；③合并心、腦、腎等器官嚴(yán)重病變患兒；④嚴(yán)重精神-神經(jīng)系統(tǒng)疾病，不能配合者；⑤病史資料不完整者。

二、研究方法

對(duì)患兒治療后1年內(nèi)通過門診、電話及微信進(jìn)行隨訪，統(tǒng)計(jì)其復(fù)發(fā)性喘息發(fā)生情況，并對(duì)患者的一般資料及相關(guān)理化檢查進(jìn)行比較，采用Cox回歸分析對(duì)其進(jìn)行分析，確定其獨(dú)立危險(xiǎn)因素，并應(yīng)用ROC曲線評(píng)估其診斷價(jià)值及診斷效能。

三、觀察指標(biāo)

對(duì)兩組患者的年齡、性別、出生體重等一般資料進(jìn)行比較。并比較兩組患者的RDAI評(píng)分、脈氧飽和度、ICAM-1、尿LTE4、血ECP及TSLP水平，采用COX多因素分析對(duì)上述影響復(fù)發(fā)性喘息的危險(xiǎn)因素進(jìn)行相關(guān)性分析，并應(yīng)用受試者工作曲線(receiver operating characteristic curve, ROC曲線)評(píng)估相關(guān)危險(xiǎn)因素預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性喘息的診斷價(jià)值及診斷效能。

1. RDAI評(píng)分[12]： 呼吸窘迫評(píng)估工具(respiratory distress assessment instrument, RDAI)，根據(jù)吼喘出現(xiàn)的呼吸相所得分值及各部位胸廓凹陷明顯程度得分之和構(gòu)成，分值為0～17分，分值越高代表病情越重，具有較高的可靠性。

2. 脈氧飽和度： 能快速、可靠的反應(yīng)患者低氧血癥，且有相關(guān)研究認(rèn)為入院時(shí)的低氧飽和度預(yù)示著長(zhǎng)住院時(shí)間及較重的病情。所有患兒均于入院當(dāng)天檢測(cè)指脈氧飽和度，血氧飽和度檢測(cè)儀為魚躍YX303型產(chǎn)品[13]。

3. 細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1, ICAM-1)： 所有患兒均于入院次日抽取空腹靜脈血，待其凝固后，3 000轉(zhuǎn)/min 離心5 min，取血清置入Eppendorf管中，放置于-70 ℃冰箱備用，采用自動(dòng)酶標(biāo)儀定量法檢測(cè)患兒血清中ICAM-1 水平，儀器及試劑盒購自武漢默沙克生物技術(shù)有限公司，操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

4. 尿白細(xì)胞三烯E4(leukotriene E4, LTE4)： 所有患兒均于入院次日留取清潔中段尿，2 000轉(zhuǎn)/min 離心20 min，取上清液備用，使用自動(dòng)酶標(biāo)儀定量檢測(cè)白三烯E4，試劑及儀器均為上海西唐生物公司產(chǎn)品(HBS-1096A)，操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

5. 血嗜酸性細(xì)胞陽離子蛋白(eosinophil cationic protein, ECP)： 所有患兒均于入院次日抽取空腹靜脈血室溫下自然凝固后，2 000轉(zhuǎn)/min 離心20 min，取血清備用，使用自動(dòng)酶標(biāo)儀定量檢測(cè)嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白，試劑及儀器均為上海西唐生物公司產(chǎn)品(HBS-1096A)，操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

6. TSLP： 所有患兒均于入院次日抽取空腹靜脈血3 ml，3 000轉(zhuǎn)/min 離心10 min留取上清液，置于-20 ℃?zhèn)溆茫褂蒙锼仉p抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)患兒血清中的TSLP水平，儀器為瑞士帝肯公司(Rain-bow產(chǎn)品)，試劑盒為美國(guó)R&D公司產(chǎn)品，操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、兩組患者一般資料比較

兩組患者性別比較無明顯差異(χ2=0.103，P=0.748)；復(fù)發(fā)性喘息組患者的年齡、出生體重明顯低于對(duì)照組，住院天數(shù)及合并先天性心臟病患者的人數(shù)明顯高于對(duì)照組(均P<0.05)，見表1。

二、 兩組患者相關(guān)指標(biāo)比較

復(fù)發(fā)性喘息組患者的RDAI評(píng)分、ICAM-1、尿LTE4、血ECP及TSLP均明顯高于對(duì)照組，脈氧飽和度明顯低于對(duì)照組(均P<0.05)，見表2。

三、影響復(fù)發(fā)性喘息相關(guān)因素的Cox分析

對(duì)年齡、RDAI評(píng)分、脈氧飽和度、等影響影響復(fù)發(fā)性喘息的相關(guān)因素進(jìn)行Cox回歸分析，結(jié)果表明高RDAI評(píng)分及高ICAM-1、尿LTE4、血ECP、TSLP水平是復(fù)發(fā)性喘息的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(HR=1.323, 1.008，1.003，1.051，1.125；均P<0.05)，而未合并先天性心臟病是保護(hù)因素(HR=0.117，P<0.05)，見表3。

四、不同指標(biāo)預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性喘息的診斷效能

ROC曲線顯示，TSLP在預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性喘息方面具有較高的診斷效能(AUC=0.844)，明顯高于ECP、ICAM-1、尿LTE4、RDAI評(píng)分及合并先心病(Z=3.143，2.683，3.173，3.251，5.532，均P<0.05), 其中，TSLP診斷的最佳截點(diǎn)為>54，此時(shí)其預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性喘息的敏感性為75.6%，特異性為84.0%，見圖1。

表1 兩組患者一般資料的比較

表2 兩組患者相關(guān)指標(biāo)的比較

表3 影響復(fù)發(fā)性喘息相關(guān)因素的Cox分析

圖1 不同指標(biāo)預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性喘息的ROC曲線

討 論

毛細(xì)支氣管炎起病較急，僅見于2歲以下嬰幼兒，且多發(fā)生于6個(gè)月以下的患兒，其臨床癥狀與肺炎相似，但以患兒出現(xiàn)憋悶、喘息為主要臨床表現(xiàn)，其感染病原體主要包括呼吸道合胞病毒、腺病毒及肺炎支原體等，當(dāng)上述病原體侵襲患兒機(jī)體后，患兒氣道上皮細(xì)胞壞死、脫落，引起炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、黏膜水腫，使氣道纖毛運(yùn)動(dòng)減弱，從而誘發(fā)喘息、憋悶、持續(xù)性干咳及發(fā)熱等臨床表現(xiàn)[14-15]。且當(dāng)上皮細(xì)胞損傷后，其抵抗變應(yīng)原能力下降，從而可使呼吸道敏感性上升，若患兒毛細(xì)支氣管反復(fù)感染，則可使氣道處于氣道高反應(yīng)狀態(tài)，從而誘發(fā)哮喘[16]。

本文通過對(duì)兩組患兒的一般資料及相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行比較，結(jié)果表明RDAI評(píng)分、ICAM-1、尿LTE4、血ECP、TSLP及合并先天性心臟病是復(fù)發(fā)性喘息的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；對(duì)上述因素進(jìn)行ROC分析，結(jié)果顯示TSLP在預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性喘息方面具有較高的診斷效能，且TSLP診斷的最佳截點(diǎn)為>54 ng/ml，此時(shí)其預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性喘息敏感性為75.6%，特異性為84.0%。

ICAM-1是免疫球蛋白基因超家族成員之一，可使氣道微環(huán)境處于穩(wěn)定狀態(tài)，可介導(dǎo)參與上皮細(xì)胞募集、激活免疫及炎癥細(xì)胞的過程，與多種非及氣道疾病發(fā)病的重要機(jī)制[17-18]。研究表明ICAM-1參與了毛細(xì)支氣管炎的發(fā)生、發(fā)展過程，與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，且毛細(xì)支氣管炎患兒體內(nèi)升高的ICAM-1可能與其日后發(fā)生氣道高反應(yīng)性、反復(fù)喘息，甚至出現(xiàn)哮喘等癥狀相關(guān)[19]。

ECP及LTE4是最常見的炎性細(xì)胞及炎性介質(zhì)，ECP為特異性炎癥介質(zhì)，參與了氣道炎癥反應(yīng)的過程，與氣道高反應(yīng)及通氣功能損傷存在一定相關(guān)性，ECP水平升高標(biāo)志嗜酸粒細(xì)胞激活增加，是判斷喘息發(fā)作的特異性指標(biāo)[20-22]。LTE4是可介導(dǎo)一系列炎癥反應(yīng)，從而使毛細(xì)支氣管周圍產(chǎn)生炎癥，引起黏膜水腫、黏膜上皮細(xì)胞壞死及黏液分泌增加，引起咳嗽、憋悶、喘息等癥狀，根據(jù)相關(guān)研究結(jié)果顯示，出現(xiàn)喘息癥狀的毛細(xì)支氣管炎患兒尿LTE4水平明顯高于無喘息患兒，提示LTE4可有效反應(yīng)毛細(xì)支氣管炎患兒的病情及預(yù)后[23]。

TSLP是一種類IL-7細(xì)胞因子，廣泛存在于支氣管上皮細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞及肥大細(xì)胞中。TSLP可促進(jìn)CD4+淋巴細(xì)胞分化，促進(jìn)白細(xì)胞介素-4等炎癥介質(zhì)細(xì)胞釋放，是啟動(dòng)哮喘的關(guān)鍵炎癥因子，研究證實(shí)支氣管哮喘患者支氣管上皮細(xì)胞的的屏障功能受損明顯[24]。研究表明，患者在感染毛細(xì)支氣管炎常見變應(yīng)原呼吸道合胞病毒后，人體支氣管上皮細(xì)胞合成TSLP的水平升高，且隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)其濃度逐漸升高，提示TSLP可能是引起呼吸道合胞病毒性急性喘息的重要炎性介質(zhì)。支氣管哮喘患者支氣管上皮細(xì)胞的TSLP mRNA表達(dá)程度增加，提示毛細(xì)支氣管炎患兒體內(nèi)的TSLP升高與其發(fā)生支氣管哮喘間存在聯(lián)系[25]。

本文結(jié)果表明，與未出現(xiàn)復(fù)發(fā)性喘息的患兒相比，復(fù)發(fā)性喘息組患兒的血ICAM-1、ECP、LTE4及TSLP水平均明顯升高，提示上述指標(biāo)與患兒預(yù)后相關(guān)，與患兒是否出現(xiàn)復(fù)發(fā)性喘息存在一定關(guān)系。

本文結(jié)果僅對(duì)我院部分患兒進(jìn)行相關(guān)分析，且僅對(duì)影響患兒出現(xiàn)復(fù)發(fā)性喘息的部分影響因素進(jìn)行分析，因此應(yīng)進(jìn)一步行多中心、大樣本、多因素的研究以分析引起毛細(xì)支氣管炎患兒復(fù)發(fā)性喘息的影響因素，并對(duì)其預(yù)測(cè)的診斷價(jià)值及診斷效能進(jìn)一步分析，以便臨床動(dòng)態(tài)觀察患兒的臨床癥狀及預(yù)后。