飼料中添加不同海藻對刺參幼參生長、免疫、消化及營養(yǎng)組成的影響

白偉,吳香瑩,左然濤,常亞青

(大連海洋大學 農業(yè)農村部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室，遼寧 大連116023)

刺參ApostichopusjaponicusSelenka分布于西北太平洋沿岸國家，包括俄羅斯、日本和韓國等國家均有分布。在中國，刺參主要產于黃渤海沿岸的潮間帶區(qū)域，是北方沿海地區(qū)主要養(yǎng)殖經濟種類之一[1],其具有獨特的風味及較高的醫(yī)療保健功效[2-3]，自古就被譽為“海產八珍”、“海中人參”，是名貴的海珍品[4]。

體壁是刺參主要食用和藥用的部位，具有較高的營養(yǎng)價值[5]。干品刺參體壁營養(yǎng)成分主要包括蛋白質、脂質、多肽、多糖及糖苷等，蛋白質含量在34%～60%之間，其中人體必需氨基酸含量可占到30%～40%[5-7]。刺參脂質的主要成分是磷脂，約占總脂質的九成，膽固醇含量則較低，僅占1%[8]。其體壁中C20∶5n3(EPA)、C22∶6n3(DHA)等人體必需脂肪酸含量豐富[8]，不飽和脂肪酸在脂質中的含量多于飽和脂肪酸，其多不飽和脂肪酸含量超過三分之一[5,7]。多糖也刺參的一種重要的藥效成分，約占體壁干質量的6%[9]，對抗病毒、抗癌、抑菌消炎、促進代謝機能及提高機體免疫力均有較為顯著的效果[2-3,10]。

近年來，隨著刺參養(yǎng)殖規(guī)模的逐漸擴大及集約化高密度養(yǎng)殖模式的不斷發(fā)展，一些飼料問題也逐漸暴露出來，其中之一就是鼠尾藻、馬尾藻等傳統飼料原料的短缺[11]。這兩種藻類主要由于其營養(yǎng)結構適宜、藻膠含量較低、不易污染水質，一直被認為是刺參養(yǎng)殖最佳的天然藻類飼料來源，但由于養(yǎng)殖業(yè)對其資源的大量需求，加之在開采過程中沒有施以得當的保護措施，導致其自然資源急劇下降，已遠遠不能滿足市場需求，其價格也隨之上漲，嚴重影響刺參養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展[12-13]。為此，一些學者開始嘗試人工培育鼠尾藻，雖然獲得了一定的突破，但由于人力物力等多方面因素的影響，還不足以形成規(guī)模化的生產模式，難以滿足養(yǎng)殖業(yè)的實際需求[14-15]。大部分研究集中在傳統飼料的替代物上。到目前為止，還沒有對相關飼料的原料及營養(yǎng)配比達成一個統一的標準[16]。因此，尋求儲備豐富、價格相對低廉的新型藻類飼料，對推動刺參養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)發(fā)展有著非常積極的作用。越南大葉菜、印尼大葉菜、菲律賓大葉菜3種大型藻類原料來源于熱帶及亞熱帶海域，資源豐富、價格低廉，是潛在的刺參飼料原料替代品。已有研究表明，通過對室內養(yǎng)殖刺參幼體進行食源分析,得出以大葉菜貢獻率最高[17]。滸苔及石莼早已被應用到食品及飼料加工當中，其產量大、來源廣、儲備資源豐富，是很容易獲得的飼料資源，在刺參飼料方面也有應用[13,18]。郭娜[14]比較了幾種大型藻對刺參的培育效果后認為，投喂鼠尾藻、滸苔對刺參的生長性能有更明顯的促進作用，培育效果優(yōu)于海帶粉組。朱建新等[19]使用石莼替代鼠尾藻干粉培育刺參獲得了更好的效果。廖梅杰等[20]研究表明，滸苔與海泥按3∶7的比例混合制成的飼料可替代傳統藻類飼料鼠尾藻。

為此，本試驗中將馬尾藻、石莼、滸苔及3種產自熱帶及亞熱帶海域的大葉菜分別與配合飼料按比例混合制成6種幼參配合飼料，并通過研究各藻類飼料的投喂對幼參生長、存活、消化生理、免疫性能及營養(yǎng)組成的影響，評價這些藻類飼料對幼參階段刺參的培育效果及可行性，為刺參幼參的培育和飼料開發(fā)提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用幼參購自大連鑫玉龍海洋生物種業(yè)科技股份有限公司(大連市普蘭店區(qū))。產脘假絲酵母購自鄭州百益寶生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗飼料的制備 試驗以馬尾藻、石莼、滸苔、越南大葉菜、菲律賓大葉菜、印尼大葉菜為藻類原料(營養(yǎng)成分見表1和表2)，將上述藻粉分別加入一定比例的產脘假絲酵母、配合飼料和海泥，采用逐級混合法配制成試驗用幼參飼料，分別記為M、S、H、YC、FC和NC(表3)，制備好的飼料裝入自封袋中并保存于-20 ℃冰箱中待用。試驗飼料在投喂前經發(fā)酵處理，將適量飼料與滅菌純凈水(質量比1∶2)在100 mL塑料燒杯中混合，用自封袋密封后置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱發(fā)酵3 d。配合飼料的原料配比為：魚粉40%、蝦粉20%、豆粕30%、牡蠣殼粉8%、復合維生素2%。

表1 藻粉飼料的營養(yǎng)成分

Tab.1 Nutritional composition of the experimental diets containing algal powderw/%

組別group粗蛋白質crudeprotein粗脂肪crudelipid粗灰分crudeash磷P鈣CaM8.713.9555.470.09961.417S22.5012.6078.950.14860.534H23.809.2175.810.23650.744YC6.615.0954.390.071911.780FC6.994.4267.730.08692.340NC6.518.6162.060.07945.365

表2 藻粉飼料的氨基酸組成

Tab.2 Amino composition of the experimental algal powder g/kg

氨基酸aminoacidMSHYCFCNC天冬氨酸Asp10.4421.5122.67.099.959.37谷氨酸Glu5.9116.3918.534.765.494.42胱氨酸Cys3.088.787.969.732.653.60絲氨酸Ser2.358.428.462.062.442.40甘氨酸Gly2.7510.1310.62.122.942.65組氨酸His0.962.592.670.940.900.90精氨酸Arg2.469.6010.052.722.252.22蘇氨酸Thr1.696.126.261.841.701.60丙氨酸Ala2.7411.4911.612.672.582.34脯氨酸Pro1.945.736.351.831.861.72酪氨酸Tyr3.077.477.463.533.073.06纈氨酸Val2.789.339.933.042.682.58蛋氨酸Met2.033.363.892.341.542.30異亮氨酸Ile2.356.036.482.662.422.25亮氨酸Leu4.8011.5512.445.334.784.58苯丙氨酸Phe2.718.2810.122.912.622.42賴氨酸Lys2.415.927.372.562.572.08

1.2.2 試驗設計及飼養(yǎng)管理 選取體長為(3.0±0.5)cm、體質量為(1.0±0.2)g的幼參暫養(yǎng)于500 L水槽中，在水溫(22±1)℃、鹽度33±1、pH 7.9～8.1、溶氧9.5～10.0 mg/L且用1 μm過濾的自然海水中馴化一周。期間正常充氣，隔日換水1/2，每日投喂一次，并根據其攝食情況適當調整投喂量。正式試驗開始前，挑選發(fā)育良好、體型勻稱、健康無病的幼參個體270頭，隨機分配至18個70 L的方形塑料試驗水槽中，每個水槽放入15頭幼參。每種飼料隨機投喂3組海參，每天兩次(8:00和18:00)進行表觀飽食投喂，并于投喂24 h后吸底1次，每3 d全量換水1次。試驗期間，溫度為13～21 ℃，鹽度為33±1，pH為8.0±0.1，溶氧為9.95～10.05 mg/L，氨氮和亞硝酸鹽含量均低于0.1 mg/L。養(yǎng)殖試驗周期為60 d。

表3 試驗飼料配比及營養(yǎng)成分(干質量)

1.2.3 樣品的制備 試驗前將幼參置于干凈毛巾上靜置30 s，待其體腔內的水盡量排空后用精確度為0.01 g的電子秤進行稱重[6,21]。試驗結束后將幼參停食饑餓36 h，以排空其腸道內的糞便。將刺參置于干凈毛巾上靜置30 s，待其體腔內的水盡量排空后用精確度0.01 g的電子秤進行稱重。在冰盤上解剖幼參，將體腔液收集至1.5 mL離心管并置于液氮中保存。用精確度為0.01 g的電子秤稱量體壁質量，然后裝入自封袋放入冰盒中。在冰盤上將腸道和呼吸樹分離，將腸道拉伸測量腸長，用電子秤稱量腸質量，然后將腸道樣品收集至1.5 mL離心管置于液氮中保存[14]。取樣結束后，將幼參體壁、體腔液及腸的樣品置于-80 ℃下保存，用于相關指標的測定。

1.2.4 生長指標的測定與計算 幼參生長指標的計算公式為

增重率WGR=(Wt-W0)/W0×100%，

臟壁比R=WI/WB×100%，

比腸重RGM=WI/Wt×100%，

比腸長RGL=LI/L×100%，

特定生長率SGR=(lnWt-lnW0)/t。

其中:Wt、W0分別為試驗幼參的終末體質量和初始體質量(g)；t為試驗時間(d)；WI為腸質量(g)；WB為體壁質量(g)；LI為腸長(cm);L為體長(cm)。

1.2.5 免疫性能及消化酶活性的測定 幼參體腔液中4種免疫性能指標包括超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT)和總抗氧化能力(T-AOC)，腸道4種消化生理指標包括脂肪酶(LPS)、胃蛋白酶(PP)、淀粉酶(AMS)和纖維素酶(CL)，均采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒測定。

1.2.6 常規(guī)營養(yǎng)成分的測定 采用ISO—5983 118(2005)、GB/T 14772—2008、GB/T 6438—2007、GB/5009.3—2010中的方法測定幼參體壁和飼料樣品的粗蛋白質、粗脂肪、灰分和水分含量。試驗用各大型藻類飼料的鈣、磷含量送至青島科創(chuàng)質量檢測有限公司進行檢測。

1.2.7 氨基酸組成分析 將幼參體壁和飼料樣品用MillRock-BT48型冷凍干燥機凍干處理至恒重，再用研磨棒將樣品磨至粉狀。稱取35～40 mg樣品至20 mL安瓿瓶，記錄樣品質量。加入10 mL 6 mol/L鹽酸混勻置于4 ℃冰箱，5 min后取出放到SE812型吹氮儀上吹氮15 min。吹氮完畢后立即用酒精噴燈封口，然后移入110 ℃烘箱消解22 h。取0.2 μm濾膜過濾消解液0.2 mL，經60 ℃氮氣吹干，用0.02 mol/L鹽酸定容至1 mL，移入L-8900型氨基酸自動分析儀進行分析。

樣品氨基酸含量(mg/g)=[各種氨基酸含量(nmol)×氨基酸分子量(g/mol))×進樣樣品體積1 mL×消解液體積10 mL]/[進樣體積20 μL×消解后干燥用氨基酸體積0.2 mL×物質質量(mg)]。

2 結果與分析

2.1 不同飼料組幼參生長指標的變化

從表4可見：各飼料組幼參的初始體質量無顯著性差異(P>0.05)；M組幼參終末體質量與增重率最高且顯著高于S和H組(P<0.05)，但與YC、FC和NC組無顯著性差異(P>0.05)；各試驗組幼參的體壁質量均無顯著性差異(P>0.05)。

2.2 不同飼料組幼參消化道性狀指數的變化

從表5可見：各飼料組幼參的腸長和比腸長均無顯著性差異(P>0.05)；YC組的腸質量、比腸重和臟壁比均最高，且顯著高于H組的腸質量(P<0.05)和NC組的比腸重(P<0.05)，其余各組均無顯著性差異(P>0.05)；FC組與YC組的臟壁比相近(P>0.05)，但均顯著高于其他組(P<0.05)。

表4 不同藻類飼料對幼參生長指標的影響

Tab.4 Growth related indices of juvenile sea cucumberApostichopusjaponicusfed diets containing different algae

組別group初始體質量/ginitialbodyweight終末體質量/gfinalbodyweight體壁質量/gbodywall增重率/%WGRM0.97±0.223.01±0.42a1.59±0.44218.22±50.00aS1.01±0.302.12±0.34bc1.42±0.64120.49±65.59abH0.90±0.041.93±0.48c1.40±0.31112.47±50.40bYC1.13±0.252.92±0.65ab1.51±0.10165.31±74.45abFC0.94±0.132.58±0.51abc1.48±0.27172.73±27.72abNC0.94±0.102.76±0.23abc1.51±0.08195.16±7.34ab

注：同列中標有不同字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05)，標有相同字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05)，下同

Note:The means with different letters within the same column are significantly different in the groups at the 0.05 probability level, and the means with the same letters within the same column are not significant differences, et sequentia

表5 不同藻類飼料對幼參消化道性狀指數的影響

Tab.5 Digestive tract characteristic indices of juvenile sea cucumberApostichopusjaponicusfed diets containing different algae

組別group腸長/cmgutlength腸質量/ggutweight比腸長/%RGL比腸重/%RGM臟壁比/%RM9.99±1.010.22±0.039ab2.59±0.129.58±0.99ab14.10±2.25bcS9.62±2.680.18±0.073ab2.96±0.689.79±0.79ab11.94±1.12cdH9.46±1.260.16±0.041b2.69±0.269.38±1.10ab11.29±0.76dYC9.90±1.380.25±0.016a2.69±0.2311.96±2.59a18.11±1.92aFC10.38±1.850.24±0.047ab2.75±0.4310.80±1.04ab17.53±0.70aNC11.39±0.300.22±0.013ab2.67±0.069.27±0.30b14.57±0.77b

2.3 不同飼料組幼參免疫及消化生理指標的變化

從表6可見：H組幼參腸道胃蛋白酶活性最高，其次是S組，兩組之間無顯著性差異(P>0.05)，但均顯著高于M、YC、NC組(P<0.05)；M組與NC組幼參脂肪酶活性相近(P>0.05)，均顯著高于其他各組(P<0.05)；H組幼參淀粉酶活性最高且顯著高于其余各組(P<0.05)；FC組幼參纖維素酶活性最高且顯著高于YC組和H組(P<0.05)。

從表7可見：M組幼參體腔液超氧化物歧化酶活性最高，其次是S組，兩組均顯著高于其余各組(P<0.05)；NC組幼參丙二醛含量最高且顯著高于YC組和FC組(P<0.05)；FC組幼參過氧化氫酶活性最高且顯著高于其余各組(P<0.05)，其次為YC、H和S組，均明顯高于NC組和M組(P<0.05)；S組幼參體腔液總抗氧化能力與M組相近，均顯著高于H、FC、NC 組(P<0.05)。

表6 不同藻類飼料對幼參腸道4種消化酶活性的影響

Tab.6 Activities of 4 kinds of digestive enzymes in juvenile sea cucumberApostichopusjaponicusfed diets containing different algae

組別group胃蛋白酶/(U·mg-1prot)PP脂肪酶/(U·g-1prot)LPS淀粉酶/(U·mg-1prot)AMS纖維素酶/(U·mg-1prot)CLM2.24±0.21d18.50±0.68a0.95±0.00d7.09±0.78abS3.22±0.13ab16.96±0.70b0.93±0.02d7.18±0.38abH3.47±0.17a12.41±0.59e1.21±0.02a4.75±0.83cYC2.71±0.12c13.58±0.65d1.03±0.01b6.11±0.86bFC3.11±0.20b15.67±0.67c0.79±0.03e7.37±0.34aNC2.04±0.18d18.13±0.30a1.00±0.01c6.17±0.37ab

表7 不同藻類飼料對幼參體腔液4種免疫酶活性的影響

Tab.7 Activities of 4 kinds of immune enzymes in coelomic fluid of juvenile sea cucumberApostichopusjaponicusfed diets containing different algae

組別group超氧化物歧化酶/(U·mL-1)SOD丙二醛/(nmol·mL-1)MDA過氧化氫酶/(U·mL-1)CAT總抗氧化能力/(nmol·mL-1)T-AOCM65.79±2.57a2.15±0.27ab0.63±0.045c0.069±0.006aS61.83±0.69b2.33±0.15ab0.77±0.045b0.070±0.005aH59.00±0.27c2.02±0.25ab0.83±0.052b0.052±0.005bcYC58.79±0.92c1.91±0.18b0.84±0.026b0.063±0.006abFC56.83±0.62c1.94±0.27b0.96±0.069a0.053±0.011bcNC51.75±0.36d2.51±0.39a0.66±0.069c0.046±0.004c

2.4 不同飼料組幼參體壁營養(yǎng)成分的變化

從表8可見：各飼料組幼參體壁粗蛋白質和水分含量均無顯著性差異(P>0.05)，其中，NC組幼參體壁粗蛋白質含量最高，FC組最低；H組幼參體壁水分含量最高，YC組最低；YC組幼參體壁粗脂肪含量最高且顯著高于其余各組(P<0.05)，其次為M組和S組，H組粗脂肪含量最低。

從表9可見：各飼料組幼參體壁中的總必需氨基酸含量無明顯變化(P>0.05)；YC組幼參體壁中總氨基酸含量最高且顯著高于FC組(P<0.05)，其中，YC組纈氨酸和異亮氨酸含量顯著高于M組(P<0.05)，蘇氨酸含量顯著高于FC組(P<0.05)；各組的藥效氨基酸含量無顯著性差異(P>0.05)；在各組的呈味氨基酸中，YC 組的甘氨酸和丙氨酸含量均顯著高于H組(P<0.05)，其余各組氨基酸含量均無明顯變化(P>0.05)。

表8 不同藻類飼料對幼參體壁體成分的影響

Tab.8 Proximate composition in body wall of juvenile sea cucumberApostichopusjaponicusfed diets containing different algaew/%

組別group粗蛋白質crudeprotein粗脂肪crudefat水分moistureM43.25±4.117.35±0.34b91.70±0.53S44.69±5.247.35±0.76b91.99±0.81H42.06±0.275.27±0.68c92.42±0.43YC45.23±3.889.59±1.00a91.36±0.81FC41.88±1.255.97±0.71bc92.15±0.56NC45.96±6.906.35±0.96bc92.25±0.34

3 討論

3.1 不同藻類飼料對幼參生長的影響

本試驗中，從各藻類飼料組幼參生長指標可以看出，馬尾藻為傳統的藻類飼料有其優(yōu)勢，投喂馬尾藻的幼參終末體質量、體壁質量及增重率均為各組最高，對于幼參生長及增重效果優(yōu)于其他藻類飼料，這與吳國均等[21]的結論相似。本試驗中，3種大葉菜在幼參生長和增重方面的培育效果不盡相同，與傳統飼料馬尾藻相比存在較小的差距，可以一定程度的代替馬尾藻。石莼和滸苔雖較早地被使用到水產飼料當中，并在刺參飼料研究中有所應用，但本試驗結果顯示，石莼和滸苔單獨投喂刺參幼參的增重效果不及3種大葉菜及馬尾藻且差距較為明顯，其原因可能是石莼和滸苔中鈣含量較低，幼參難以從飼料中獲取足夠的鈣以滿足其生理需求[19]。

表9 各試驗組幼參體壁的氨基酸組成

Tab.9 Amino acid composition in body wall of juvenile sea cucumberApostichopusjaponicusin each experimental group mg/g

氨基酸aminoacidMSHYCFCNC牛磺酸Tau0.38±0.11ab0.25±0.08b0.27±0.055b0.43±0.08a0.32±0.068ab0.38±0.042ab天冬氨酸Asp△#38.75±2.3639.57±0.5338.63±0.4240.48±1.0738.27±0.8138.85±1.31蘇氨酸Thr?19.92±1.23ab20.65±0.42ab19.97±0.26ab21.00±0.33a19.70±0.27b20.03±0.48ab絲氨酸Ser17.72±1.0217.72±0.5517.32±0.3118.23±0.1717.35±0.1317.69±0.43谷氨酸Glu△#54.69±3.3555.36±0.7654.24±0.4556.79±1.2754.25±0.8955.36±1.85甘氨酸Gly#40.37±2.54ab39.36±0.78bc37.85±0.50c42.41±0.90a38.55±0.48bc38.98±1.21bc丙氨酸Ala#21.00±1.42ab21.05±0.43ab20.63±0.11b22.09±0.35a20.76±0.13b21.10±0.56ab半胱氨酸Cys2.59±0.282.92±0.122.88±0.042.94±0.112.86±0.152.75±0.39纈氨酸Val?△17.15±1.03b18.02±0.18ab17.67±0.25ab18.39±0.68a17.50±0.27ab17.60±0.68ab甲硫氨酸Met?6.44±0.577.03±0.046.56±0.087.19±0.276.76±0.346.36±0.89異亮氨酸Ile?△15.73±1.09b16.54±0.32ab16.11±0.04ab16.87±0.36a16.06±0.05ab16.18±0.48ab亮氨酸Leu?△21.89±1.3922.77±0.4222.29±0.0523.05±0.4122.28±0.1222.54±0.63酪氨酸Tyr#12.35±1.2012.94±0.5712.73±0.3513.17±0.3812.78±0.2213.01±0.30苯丙氨酸Phe?#13.83±1.1814.89±0.3614.88±0.2615.28±0.3614.02±0.7114.34±1.13賴氨酸Lys?△18.46±1.7018.50±1.6418.33±1.4818.44±0.8117.62±1.1718.93±1.23組氨酸His6.44±0.336.56±0.196.50±0.276.77±0.186.20±0.346.52±0.49精氨酸Arg△26.07±1.6526.29±0.4025.70±0.2127.27±0.5225.73±0.1625.97±0.85總氨基酸TAA364.59±22.87ab371.41±7.97ab362.75±2.09ab383.08±5.88a361.22±1.06b368.78±9.38ab總必需氨基酸TEAA113.42±7.38118.40±3.21115.80±1.32120.22±0.70113.93±0.84115.98±4.40呈味氨基酸FAA181.00±11.52ab183.17±3.35ab178.95±1.06b190.22±3.16a178.64±1.54b181.64±6.08ab藥效氨基酸DEAA192.74±11.67197.05±4.11192.97±1.19201.30±3.48191.70±1.05195.44±5.68

注：*為必需氨基酸；△為藥效氨基酸；#為呈味氨基酸。同行中標有不同字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05)，標有相同字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05)

Note: *,the essential amino acid; △,the effective amino acid;#,flavor amino acid.The means with different letters within the same line are significantly different in the groups at the 0.05 probability level, and the means with the same letters within the same line are not significant differences

3.2 不同藻類飼料對幼參消化道性狀指數的影響

刺參消化系統分化水平較低，主要包括口、咽、胃囊、腸道及泄殖腔五個部分[22]。其中，食管和胃囊較短，黏膜層主要由假復柱狀上皮構成，肌肉較為發(fā)達，其功能包括運輸及機械處理食物，食管幾乎不參與消化酶的分泌[22]。腸道是刺參進行食物消化及消化酶分泌的主要場所，其表面黏膜層向內凹陷形成褶皺可有效增大與食物接觸面積，胃腸黏膜上皮的單細胞腺體可分泌消化酶，幫助食物消化[22-23]。腸道皮下覆蓋著豐富的血竇，可有效地運輸和吸收營養(yǎng)物質。消化道性狀指數也是評價飼料培育效果的有效指標，在刺參營養(yǎng)與飼料研究中也有所應用[24]。本試驗結果顯示，各飼料組幼參的腸長和比腸長均未表現出顯著差異，但在腸質量、比腸重及臟壁比上呈現一定差異，說明不同藻類飼料的投喂對刺參幼參消化道性狀指數存在一定影響。本試驗中，用越南大葉菜培育的幼參比腸重最高，優(yōu)于傳統飼料馬尾藻及其他試驗飼料，表明可以在幼參飼料中加入適量的越南大葉菜。但飼喂石莼和滸苔的幼參臟壁比均較低，且各飼料組幼參的臟壁比與各試驗藻類的蛋白質含量成反比，因此，推測幼參的臟壁比主要受飼料蛋白質含量影響，已有研究表明，飼料中較高的蛋白質含量可有效降低刺參的臟壁比[24]。

3.3 不同藻類飼料對幼參免疫機制及消化生理的影響

刺參屬于棘皮動物，與其他無脊椎動物一樣，缺乏特異性免疫系統，其免疫應答主要通過體腔細胞的吞噬作用及免疫因子的分泌實現的，其主要作用是識別、清除異物及修復傷口[25]。影響刺參免疫的因素有很多，主要包括養(yǎng)殖溫度、鹽度、溶氧、飼料營養(yǎng)結構等[26]。刺參各組織中體腔液的免疫酶活性最高，對刺參的免疫功能起著非常重要的作用，因此，本試驗中選取體腔液用于評價各飼料組刺參的免疫性能。本試驗結果顯示，滸苔的超氧化物歧化酶和總抗氧化能力均低于馬尾藻，說明馬尾藻促進刺參非特異性免疫的能力優(yōu)于滸苔，這與楊星愿等[27]的研究結果一致；李旭等[28]研究表明，石莼有利于刺參體內蛋白質合成代謝，而其他飼料則能維持刺參較好的免疫能力，在本試驗結果中石莼的總抗氧化能力最高，可能是因為石莼會產生較高的丙二醛，從而影響幼參本身的抗氧化能力；投喂越南大葉菜的幼參丙二醛含量最低，超氧化物歧化酶和過氧化氫酶也相對低于馬尾藻組，且總抗氧化能力僅次于馬尾藻和石莼組，這表明，投喂越南大葉菜對刺參的免疫能力的提高有較強的作用，菲律賓大葉菜總抗氧化能力僅次越南大葉菜，而印尼大葉菜的總抗氧化能力最低，說明不同地區(qū)的大葉菜對提高幼參的免疫能力不同，菲律賓和越南大葉菜優(yōu)于印尼大葉菜。

刺參的消化系統分化較低，缺少特定的消化腺體，腸道可以分泌消化液起到消化腺的作用，因此，其腸道消化酶的活性可以側面反映刺參對營養(yǎng)物質的消化吸收能力[4,16]。本試驗中選取腸道胃蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶及纖維素酶4種消化酶作為評價各組藻類飼料對幼參消化生理的影響。試驗藻類飼料中滸苔和石莼的蛋白質含量最高，均達到其他4種飼料的3倍左右，飼喂?jié)G苔和石莼的幼參胃蛋白酶活力也相對較高，可能是受飼料蛋白質含量的影響。飼料中添加菲律賓大葉菜投喂的幼參蛋白酶活性僅次于滸苔和石莼，說明菲律賓大葉菜也可增加幼參胃蛋白酶的活性，促進幼參對蛋白質的消化。與蛋白酶一樣，脂肪酶也是內源性消化酶，但刺參食性可能以植物性食物為主[29]，因此，對糖類有較強的消化能力，而對脂肪的消化能力則較弱，且在其他海參科動物的研究中也發(fā)現脂肪酶主要在海參的后腸部分才發(fā)揮作用[30]。普遍認為，由于刺參腸道pH與脂肪酶的最適pH存在差異，影響了脂肪酶的活性[31]，但本研究中投喂印尼大葉菜的幼參脂肪酶活性僅次于投喂馬尾藻的幼參且明顯高于投喂其他飼料，說明飼料中添加適量印尼大葉菜可使幼參腸道內的脂肪酶活性增強，提高對飼料中脂肪的消化能力。淀粉酶也是刺參腸道中一種重要的消化酶，根據分解特性主要分為α-淀粉酶和β-淀粉酶兩種，分別表現為耐熱不耐酸和耐酸不耐熱的特性[32]，其活力較蛋白酶弱[31]。已有研究表明，淀粉酶活性會影響刺參生長。本試驗結果表明，幼參飼料中適當添加滸苔對幼參腸道內淀粉酶的活性有較好的提高作用，這與楊寧等[33]的結論一致。纖維素酶是由多種可催化分解纖維素的水解酶所組成的一個復雜酶系，在中性或中性偏酸性條件下活性較好且受季節(jié)變化影響很小[31]。本試驗中投喂?jié)G苔的幼參腸道纖維素酶活性最低，這一結果與楊星愿等[27]的研究結果存在差異，原因可能與飼料來源有關，不同品種、采集時間和生長地點及投喂前對滸苔的處理情況的差異均會影響刺參對其的利用，從而影響腸道中的纖維素酶的活力。

3.4 不同藻類飼料對幼參體壁營養(yǎng)成分的影響

刺參體壁具有較高的食用和藥用價值，其蛋白質含量豐富，脂肪和膽固醇含量較低，具有增強免疫力、延緩衰老等多種健體功效，其所特有的海參多糖、海參皂苷、海參多肽等生物活性物質在抗炎、抗癌及疾病預防等多個方面也都有較好的效果[10]。本試驗結果顯示，幼參階段，各飼料組刺參體壁蛋白質含量無顯著性差異，這與王長云等[34]和李丹彤等[5]的結果相似，說明6種不同海藻飼料對刺參發(fā)育過程中體壁蛋白質含量影響不明顯。各飼料組在幼參體壁脂肪含量有明顯的差異，但總體較其他研究者的結果偏高[2-3,5]，這可能是因為試驗中刺參的生長階段不同，隨著其生長發(fā)育體壁脂肪含量會有一個逐漸下降的過程。

刺參蛋白質的營養(yǎng)價值本質是氨基酸的構成及比例，研究表明，刺參體壁蛋白質中的氨基酸種類豐富，可與雞蛋蛋白媲美[3,5]。幼參體壁中含量較高的氨基酸包括谷氨酸、甘氨酸和天冬氨酸，與李丹彤等[5]、李春燕等[3]及王長云等[34]的研究結果相一致。各飼料組幼參體壁的總氨基酸含量有明顯差異，其中越南大葉菜組顯著高于菲律賓大葉菜組，說明在幼參飼料中適當添加越南大葉菜可提高幼參體壁中氨基酸的含量，但各飼料組幼參體壁的總必需氨基酸含量無顯著性變化。越南大葉菜組幼參體壁呈味氨基酸含量最高，與菲律賓大葉菜組及滸苔組有顯著性差異，說明幼參階段，投喂越南大葉菜對提高刺參的口感有所幫助。與必需氨基酸含量類似，各飼料組幼參體壁藥效氨基酸含量無顯著性差異，說明從氨基酸組成的角度看，這6種藻類飼料對刺參幼參體壁藥用價值無明顯的影響。

4 結論

越南大葉菜對幼參的生長與傳統飼料馬尾藻無明顯差異，但比腸重、臟壁比、胃蛋白酶及淀粉酶活性等方面均優(yōu)于馬尾藻，越南大葉菜對幼參總抗氧化能力也較強，對幼參的免疫也有提高作用，且幼參體壁中粗脂肪含量、必需氨基酸及呈味氨基酸含量明顯優(yōu)于其他飼料，但在胃蛋白酶和纖維素酶活性等方面不如石莼。因此，越南大葉菜可代替部分馬尾藻作為幼參配合飼料的主成分，能更好地滿足幼參的生長營養(yǎng)需求，石莼可作為輔助性成分原料，有助于增加幼參飼料中蛋白質含量，提高幼參腸道中胃蛋白酶和纖維素酶活力，同時也為幼參的飼料配制提供更加廣泛的原料資源。