真菌檢測技術(shù)研究進(jìn)展

王琿

摘要：隨著科技水平的不斷提高，越來越多的人開始重視真菌檢驗方面的相關(guān)技術(shù)?，F(xiàn)階段，相關(guān)人員主要使用三種方式對單一的真菌進(jìn)行檢測：薄層層析法以及高效液相色譜法還有酶聯(lián)免疫吸附法等。這篇文章主要對真菌的檢測進(jìn)行了仔細(xì)的討論，簡單的講述了一下近些年專業(yè)人士在這方面的新技術(shù)以及新動態(tài)。對有關(guān)真菌毒素方面的檢測指明了方向，為食品安全行業(yè)提供了參考性依據(jù)。

關(guān)鍵詞：真菌毒素;快速檢測;多組分檢測

前言：

真菌毒素屬于真菌的代謝性產(chǎn)物，嚴(yán)格意義上來說與真菌的生長發(fā)育都沒有太大關(guān)系。多數(shù)人認(rèn)為所有的代謝性產(chǎn)物都有毒，這個觀點是不正確的。真菌屬于一個異類，即可以一對多，也可以多對一。用通俗的話來講就是同一種真菌可以產(chǎn)生很多種的毒素，但是也有可能很多種真菌只產(chǎn)生一種毒素。每一個硬幣都有兩面，有很多真菌的毒素危害很大，比如說：黃曲霉毒素以及伏馬毒素還有麥角類的生物堿。據(jù)實驗證明，在天然形成的物質(zhì)中黃曲霉毒素的致癌性是最強的。在農(nóng)產(chǎn)品中最容易被污染的毒素也是黃曲霉毒素。據(jù)不完全統(tǒng)計，全世界每一年受黃曲霉毒素污染的谷物有25%。這些谷物雖然不會直接流入我們的餐桌，但是這些谷物會被作為飼料喂養(yǎng)動物，間接性的流入我們的餐桌，使我們有致癌的危險。為此，我們需要對真菌的毒素進(jìn)行測驗，保證我們的健康。

1真菌毒素常規(guī)檢測技術(shù)

隨著科技不斷的發(fā)展，有關(guān)真菌毒素方面的檢驗方法越來越多，主要包括以下三點：薄層層析法以及高效液相色譜法還有酶聯(lián)免疫吸附法、培養(yǎng)檢查法等，這些檢查方式主要針對單一真菌。

1.1薄層層析法

薄層層析法這種方式早在1960年的時候就已經(jīng)發(fā)展起來了，它屬于一種平面的色譜技術(shù)。薄層層析法主要用于分辨不一樣的樣品，這種方式是通過有機的溶劑將真菌中的毒素進(jìn)行提取，經(jīng)過精準(zhǔn)的溶劑純化之后將真菌進(jìn)行層析以及分離。部分真菌的毒性與普通的真菌不同，它具有熒光的特殊性質(zhì)，需要先與標(biāo)準(zhǔn)的物質(zhì)進(jìn)行定量后才能進(jìn)行下一步操作。我國將薄層層析法這種方法作為實驗中的第一方法的原因有很多，舉例說明：薄層層析法以經(jīng)濟實惠，對有關(guān)人員的操作水平低等特點廣受喜愛。薄層層析法具有非常高的精準(zhǔn)度還有分離的效率，兩者隨著掃描儀的發(fā)展進(jìn)一步提高。所以，在很多的歐美國家薄層層析法這種檢驗方法都是檢驗熒光毒物的主要方法。

1.2酶聯(lián)免疫吸附法

檢驗單一真菌還可以使用酶聯(lián)免疫吸附法。到目前為止，酶聯(lián)的免疫吸附這種方法已經(jīng)發(fā)展到比較成熟的階段。酶聯(lián)免疫吸附法這種方式屬于以免疫酶為基礎(chǔ)的創(chuàng)新型檢驗技術(shù)。這種檢驗方法有很多的優(yōu)點：首先，酶聯(lián)免疫吸附法較其他的檢驗方法來說靈敏、對于工作人員來說操作簡單易上手。在實驗中使用酶聯(lián)免疫吸附法之前，只需要將樣品進(jìn)行小限度的凈化、就可以得到大量的處理樣品。除此之外，酶聯(lián)免疫吸附法還具有很高的特異性，只可以進(jìn)行單一的檢測。所以，使用酶聯(lián)免疫吸附法時可以在一定程度上提高物質(zhì)回收率、增強其敏感度，最大限度的減少實驗中的干擾因素。使實驗中的分析程序可以盡可能的簡化，進(jìn)一步降低成本。我們相信，如果解決的上述問題，酶聯(lián)免疫吸附這種方法一定會再上一個臺階。有關(guān)人員根據(jù)國家的標(biāo)準(zhǔn)將酶聯(lián)免疫吸附法作為實驗中的第二方法。這種方法在很多國家已經(jīng)廣泛的運用，有關(guān)人員可以使用這項技術(shù)對糧油等食品進(jìn)行專業(yè)的真菌毒素測驗，保證我們的飲食健康。

1.3高效液相色譜法

有關(guān)人員在分析真菌毒素的過程中，經(jīng)常使用高效液相色譜法。高效液相色譜法不僅僅可以對于有關(guān)的毒素進(jìn)行定性，還可以在此基礎(chǔ)上對其進(jìn)行定量還有確證從測定真菌的毒素。在高效液相色譜法中，反相液相色譜是應(yīng)用最廣泛的。鑒于每一種真菌的性質(zhì)都不相同，實驗中還會有溫度以及濕度等很多的干擾因素對其進(jìn)行制約。所以，我們在對其進(jìn)行分析時需要根據(jù)實際情況綜合性的考慮，充分分析流動相以及色譜柱還有柱溫檢測器等條件，從而找到最合適的配比。對于一些自身發(fā)光的毒素我們可以直接進(jìn)行HPLC分析，自身不帶有熒光的毒素我們需要對其進(jìn)行柱前以及柱后的衍生還有改變真菌流動用來增加真菌的熒光信號，方便檢測。

到目前為止，我國已經(jīng)建立了有關(guān)黃曲霉毒素以及赭曲霉毒素還有伏馬毒素等真菌毒素的免疫親和標(biāo)準(zhǔn)還有凈化標(biāo)準(zhǔn)。上述兩種測定方式都屬于國際上比較常用的方式。隨著科技的不斷發(fā)展，在這些測定方式的基礎(chǔ)上對其進(jìn)行了一定的改進(jìn)。舉例說明：高效的薄層色譜固定相更改為改性硅膠還有纖維素。他們具有更細(xì)以及更均勻的優(yōu)點。改變吸附劑的疏水以及親水性質(zhì)。可以初步實現(xiàn)色譜的正相與反相分離，從而進(jìn)一步的提高選擇性。這種方式還可以與其他的檢驗方式聯(lián)合使用，使化合物測定的更加準(zhǔn)確。舉例說明：薄層色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方式。對于單孢化合物的測量來說，可以使用氣相色譜法。會用這種可以輕易的將羥基作為基礎(chǔ)進(jìn)行衍生，從而一定程度上增加其揮發(fā)性以及靈敏度。

1.4培養(yǎng)檢查法

大培養(yǎng)還有小培養(yǎng)都屬于培養(yǎng)檢查的方法。舉例說明：專業(yè)人員在對血液以及骨髓還有胸腹水等無菌部位的體液進(jìn)行培養(yǎng)時，應(yīng)選用大培養(yǎng)的方法。在對痰以及膿液還有組織等部位進(jìn)行培養(yǎng)時，應(yīng)選用小培養(yǎng)的方法。據(jù)報道，法國某專家在對念珠菌進(jìn)行顯色培養(yǎng)時，與普通的沙保弱培養(yǎng)基進(jìn)行仔細(xì)的對比發(fā)現(xiàn)，他們分離酵母的真菌陽性是相同的，抑菌性比起其他真菌來說，它對細(xì)菌的抑制效果更強，檢驗的時間更短，可以準(zhǔn)確檢驗出其中是否存在混合感染。我們在對其進(jìn)行鑒定的時候，也會面臨很多問題，舉例說明：臨床工作人員與實驗室的工作人員不能進(jìn)行及時的共同交流，不能夠準(zhǔn)確的將結(jié)果做出正確的判斷。在實驗過程中，有很多的程序不合理，缺乏統(tǒng)一性，沒有任何的標(biāo)準(zhǔn)化可言。少數(shù)的工作人員不能夠正視形態(tài)學(xué)的重要性，僅僅追求表面技術(shù)，不能根據(jù)實際情況進(jìn)行觀察。如果上述的問題不能夠進(jìn)行一步改善，會在一定程度上影響臨床研究。

2真菌毒素快速篩選檢測技術(shù)

為了我們的生命健康以及食品安全。有關(guān)方面的檢測技術(shù)需要更加的實行“四省政策”即準(zhǔn)確以及省時省力還有省成本。這些問題不僅僅是政府的有關(guān)管理部門以及生產(chǎn)食品的企業(yè)所要求的，更是有關(guān)銷售甚至國家安全監(jiān)管部門所制約的。由此見得，我國應(yīng)該建立一個簡單方便，成本低，效果顯著的檢驗方式。在最近幾年，對于真菌毒素的檢測方式在兩個方面有重大進(jìn)展。其一是有關(guān)免疫膠體方面的金層析技術(shù)，其二是有關(guān)近紅外方面的無損傷檢測技術(shù)。

2.1免疫膠體金層析技術(shù)

早在1980年的時候膠體金就已經(jīng)被研究人員進(jìn)行有關(guān)免疫學(xué)方面的檢測了，這種技術(shù)是以膠體金最示蹤標(biāo)記物進(jìn)行特異性的抗原抗體反應(yīng)。在1990年的時候，有關(guān)免疫膠體方面的金層被用于單克隆的抗體技術(shù)以及膠體金方面的免疫層析技術(shù)還有新材料方面的技術(shù)。近些年來，隨著科技的不斷發(fā)展，醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)在臨床中被廣泛的使用。醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)是將部分特異性的抗原抗體固定在醋酸的纖維素膜上。使用膠體金化學(xué)試劑可以將其牢牢的吸附于結(jié)合墊。將試品以同樣的方式加到樣品墊上，通過其自身的毛細(xì)作用向前移動。使結(jié)合墊上面標(biāo)記的膠體金化學(xué)試劑溶解，與之作用。移動到抗原抗體固定的區(qū)域，使待測物與金標(biāo)的復(fù)合物特異性的結(jié)合，截留并聚集到相關(guān)的檢測帶上，使實驗的結(jié)果可以很清晰的觀察到。

2.2近紅外檢測技術(shù)

在真菌毒性的檢驗過程中近紅外技術(shù)也很常見。近紅外是一種波長為700到2500納米之間的電磁波。紅外線的光譜以其獨特的優(yōu)勢廣受喜愛。它可以快速的對其進(jìn)行分析，具有高效率、低成本、使用方便的特點。在很過歐美國家，紅外線技術(shù)也被列入到標(biāo)準(zhǔn)方式中。

結(jié)束語

隨著科技的不斷發(fā)展，有關(guān)專業(yè)人士對真菌毒素的測評工作研究的更加深入，致力于探討速度快、成本低、高效率的檢測技術(shù)。薄層層析法以經(jīng)濟實惠，對有關(guān)人員的操作水平低等特點廣受喜愛。酶聯(lián)免疫吸附法較其他的檢驗方法來說靈敏、對于工作人員來說操作簡單易上手。高效液相色譜法可以初步實現(xiàn)色譜的正相與反相分離，從而進(jìn)一步的提高選擇性，與其他的檢驗方式聯(lián)合使用時可以使化合物測定的更加準(zhǔn)確。免疫膠體金層析技術(shù)還有近紅外檢測技術(shù)比起常規(guī)的方法更加的簡單方便，成本更加低廉，效果更加顯著。我們相信通過有關(guān)人員的不斷努力，檢測技術(shù)可以走上一個新的臺階，開啟檢測技術(shù)的新紀(jì)元。

參考文獻(xiàn)

[1]王君正，于長平.真菌實驗室檢查方法的新進(jìn)展[J].畜牧與飼料科學(xué). 2017（02）：41-42.

[2]馬云楓，鐘學(xué)良.真菌在目前醫(yī)療策略下使感染患者診療成為難點[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué). 2015（13）：155-156.

[3]冷萍，郭秀麗，婁紅祥.真菌耐藥的分子機制及新型抗真菌藥物[J].生理科學(xué)進(jìn)展. 2005（04）：69--70.

[4]劉靜媛，李紅賓，祈文瑾.真菌對抗真菌藥物耐藥機制的研究進(jìn)展[J].皮膚病與性病. 2016（01）：138-139.