腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性探討

郭錦全　陳芳　何麗萍

[摘要] 目的 探討腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性。 方法 選取2015年1月～2017年1月我院收治的89例乳腺癌患者腫瘤組織切片和資料，在顯微鏡下對乳腺癌臨床病理特征觀察，同時分析腫瘤浸潤淋巴細胞與患者預后相關性。 結(jié)果 乳腺癌臨床病理特征與人類表皮生長因子受體2、年齡、Ki67和腫瘤大小沒有相關性，脈管癌栓侵襲、淋巴結(jié)陽性、組織學分級高與乳腺癌臨床病理特征存在相關性;乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈反比關系，腫瘤出芽數(shù)量越多，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越低，腫瘤出芽數(shù)量越少，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越高;經(jīng)隨訪，高腫瘤出芽組無病生存率為90%，低腫瘤出芽組無病生存率為98%，兩組生存率存在明顯差異，患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平存在相關性。 結(jié)論 乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈負相關，乳腺癌腫瘤惡性程度與出芽水平存在相關性，與惡性程度高的臨床病理指標密切相關，可對患者預后產(chǎn)生影響。對腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性探討，可為患者臨床治療提供更有效理論依據(jù)和重要基礎。

[關鍵詞] 腫瘤出芽;乳腺癌;病理特征;腫瘤浸潤淋巴細胞;相關性

[中圖分類號] R737.9? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）05-0030-04

Correlation between tumor budding and clinicopathological features of breast cancer， tumor infiltrating lymphocytes and patient prognosis

GUO Jinquan1? ?CHEN Fang2? ?HE Liping3

1.Department of Breast and Thyroid Surgery， Guangzhou Panyu Central Hospital， Guangzhou? ?511400， China; 2.Department of Pathology， Guangzhou Panyu Central Hospital， Guangzhou? ?511400， China; 3.Statistics Office， Guangzhou Panyu Central Hospital， Guangzhou? ?511400，China

[Abstract] Objective To explore the correlation between tumor budding and the clinicopathological features of breast cancer， tumor infiltrating lymphocytes and patient prognosis. Methods The tumor tissue sections and data of 89 breast cancer patients treated in our hospital from January 2015 to January 2017 were selected， and the clinical and pathological characteristics of breast cancer were observed under a microscope. The correlation between tumor infiltrating lymphocytes and patient prognosis was also analyzed. Results The clinical characteristics of breast cancer were not related to human epidermal growth factor receptor 2 （HER-2）， age， Ki67 and tumor size. There was a correlation between vascular tumor thrombus invasion， lymph node position， tissue high grades and clinical characteristics of breast cancer. The level of breast cancer tumor infiltrating lymphocytes had an inverse relationship with the budding status. The more tumor buds， the lower the level of breast cancer tumor infiltrating lymphocytes. The lower the number of tumor buds， and the higher the level of cancer infiltrating lymphocytes. After follow-up， the disease-free survival rate of the high tumor budding group was 90%， and the disease-free survival rate of the low tumor budding group was 98%. There was a significant difference in survival rates between the two groups. There was a correlation between patient prognosis and breast cancer tumor budding level. Conclusion? The level of infiltrating lymphocytes of breast cancer is inversely related to the budding status. There is a correlation between the malignant degree of breast cancer tumors and the budding level， and it is closely related to the clinicopathological indicators of high malignancy， which can affect the prognosis of patients. The study of the correlation between tumor budding and the clinicopathological characteristics of breast cancer， tumor infiltrating lymphocytes and patient prognosis can provide more effective theoretical basis and important foundation for clinical treatment of patients.

[Key words] Tumor budding; Breast cancer; Pathological features; Tumor infiltrating lymphocytes; Correlation

乳腺癌是臨床上發(fā)病率非常高的惡性腫瘤，對患者身體健康產(chǎn)生嚴重威脅，影響了患者正常生活[15]。相關報道表明，該病發(fā)病率出現(xiàn)逐年上升趨勢，且發(fā)病年齡趨于年輕化。所以，需對該病發(fā)病因素進行積極探究，隨著醫(yī)學水平不斷進步和發(fā)展，分析方法越來越多。當前，可通過分子指導與臨床病例指標對治療方案的制定和對患者預后進行判斷。因為乳腺癌存在異質(zhì)性，上述指標不能對患者預后進行準確判斷[2]。所以，應對新的生物學指標進行探討，旨在為患者提供更有效治療，從而改善患者預后，提高患者生活質(zhì)量[3]。腫瘤出芽指在腫瘤浸潤最深處在間質(zhì)內(nèi)分布低于5個癌細胞或單個孤立癌細胞構(gòu)成的癌巢，具有腫瘤肝細胞和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化特性，是早期腫瘤轉(zhuǎn)移階段，嚴重影響腫瘤轉(zhuǎn)移、進展和復發(fā)[4]。本研究主要圍繞腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性進行探討，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月～2017年1月我院收治的89例乳腺癌患者腫瘤組織切片和資料。納入標準[5]：①臨床資料完善;②經(jīng)過相關診斷，確診為乳腺癌患者;③符合乳腺癌臨床診斷標準患者;④認知功能正常和依從性高患者。排除標準[6]：①不愿參與本次研究或臨床數(shù)據(jù)不完善的患者;②伴有心絞痛或急性心肌梗死的患者;③凝血和肝腎功能異?；颊?④妊娠期和哺乳期患者;⑤認知功能障礙和依從性低患者。本研究89例患者，年齡27～60歲，平均（43.39±8.39）歲。

1.2 方法

1.2.1 患者一般資料收集? 對患者一般資料進行收集，主要包括淋巴轉(zhuǎn)移狀況、患者年齡、分子類型、腫瘤大小和組織學分級等[7]。

1.2.2 判讀腫瘤出芽? 依據(jù)過往文獻報道，腫瘤浸潤最深的間質(zhì)內(nèi)低于5個癌細胞或單個孤立癌細胞卵巢組成為腫瘤出芽[8]。無出芽表示間質(zhì)最深處沒有單個卵巢或癌細胞出芽。并在顯微鏡下，密集出芽視野進行選取，對腫瘤出芽狀況進行分析，單個視野最多出芽個數(shù)表示腫瘤出芽數(shù)[9]。

1.2.3 腫瘤浸潤淋巴細胞判讀及水平檢測標準? 應用福爾馬林對全部腫瘤組織進行固定，石蠟常規(guī)包埋對蠟塊進行制作，在進行連續(xù)4 μm切片后，使用蘇木素-伊紅（HE）進行染色，由病理科醫(yī)師對切片染色進行評價。在低倍顯微鏡視野下對代表性切片進行選擇，并對腫瘤浸潤淋巴細胞數(shù)目進行評估[10]。其水平以在浸潤性乳腺癌邊界處細胞占比進行分析，對遠離正常乳腺小葉、腫瘤邊界和原位癌漿細胞和淋巴細胞不進行計數(shù)。

1.3 觀察指標

分析乳腺癌腫瘤出芽狀況與TILs水平與臨床病理特征關系，包括年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)狀態(tài)、脈管癌栓侵襲、激素受體狀態(tài)、Ki67、人類表皮生長因子受體 2、組織學分級等。同時對腫瘤浸潤淋巴細胞與腫瘤出芽關系和患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平進行分析，對患者隨訪6個月。腫瘤出芽低高和腫瘤浸潤淋巴細胞低高評價標準：根據(jù)Hida等的方法將TILs的浸潤程度分級[11]，在顯微鏡低倍視野下選定有代表性的切片，評估TILs所占腫瘤細胞及周圍間質(zhì)細胞的比例。

1.4 統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)資料應用 SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用Spearman相關分析腫瘤出芽情況與臨床病理特征和 TILs間的關系，組間差異采用 Log-rank 檢驗分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 分析乳腺癌腫瘤出芽狀況與TILs水平和臨床病理特征關系

乳腺癌臨床病理特征與人類表皮生長因子受體2、年齡、Ki67和腫瘤大小沒有相關性，脈管癌栓侵襲、淋巴結(jié)陽性、組織學分級高與乳腺癌臨床病理特征存在相關性，見表1。

2.2 分析腫瘤浸潤淋巴細胞與腫瘤出芽關系

乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈現(xiàn)反比關系，腫瘤出芽數(shù)量越多，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越低，腫瘤出芽數(shù)量越少，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越高，見表2。

2.3 分析患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平關系

隨訪2年后，低腫瘤出芽組中有3例疾病進展（其中骨轉(zhuǎn)移2例，肝轉(zhuǎn)移1例），高腫瘤出芽組中有6例疾病進展（其中骨轉(zhuǎn)移2例，肝轉(zhuǎn)移2例，肺轉(zhuǎn)移1例，腦轉(zhuǎn)移1例）。應用Kaplan-Merier生存分析發(fā)現(xiàn)，高腫瘤出芽組無病生存36例，生存率為90%，低腫瘤出芽組無病生存48例，無病生存率為98%，兩組生存率比較存在明顯差異，患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平存在相關性（r=0.694，P<0.05）。

3 討論

本研究對腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征及患者預后的相關性進行探討[12]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌腫瘤出芽越多，遠處轉(zhuǎn)移較多，淋巴結(jié)分級高，脈管癌栓浸潤較多，組織學分級高，對患者預后產(chǎn)生嚴重影響[13]。另外，本研究對免疫微環(huán)境中腫瘤浸潤淋巴細胞與腫瘤出芽關系探究，效果理想[14]。

腫瘤出芽是分布在腫瘤間質(zhì)內(nèi)小于5個腫瘤細胞組成的癌巢或單個腫瘤細胞。臨床研究證實，腫瘤出芽與膀胱癌、結(jié)直腸癌、鼻咽癌預后相關。腫瘤出芽是上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化早期階段，且具有侵襲和遷移特征，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中具有非常重要作用。而轉(zhuǎn)移是由多種信號通路和細胞因子協(xié)同、多個環(huán)節(jié)參與及細胞內(nèi)外微環(huán)境共同作用的復雜過程。曾在研究中證實，在腫瘤浸潤淋巴細胞陽性乳腺患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與腫瘤出芽存在相關性。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌臨床病理特征與人類表皮生長因子受體2、年齡、Ki67和腫瘤大小沒有相關性等無關，脈管癌栓侵襲、淋巴結(jié)陽性、組織學分級高與乳腺癌臨床病理特征存在相關性。本次研究與臨床研究結(jié)果具有一致性，本研究結(jié)果進一步表明腫瘤免疫微環(huán)境與腫瘤出芽可產(chǎn)生相互作用，對患者預后產(chǎn)生嚴重影響，可依據(jù)腫瘤出芽與乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平、臨床病理特征進行有效治療[11]。腫瘤出芽具有侵襲性和遷移性，在腫瘤轉(zhuǎn)移方面具有很重要作用。因為信號通路和多種細胞因子會對轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響，所以此過程為細胞外和細胞內(nèi)微環(huán)境共同作用過程[15]。

乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈反比關系，腫瘤出芽數(shù)量越多，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越低，腫瘤出芽數(shù)量越少，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平越高;經(jīng)隨訪，高腫瘤出芽組無病生存率為90%，低腫瘤出芽組無病生存率為98%，兩組生存率存在明顯差異，結(jié)果表明，患者預后與乳腺癌腫瘤出芽水平存在相關性，并且會對患者預后產(chǎn)生嚴重影響。近年來，在抗腫瘤治療中，免疫治療及腫瘤免疫微環(huán)境潛在作用受到越來越多關注。其中，腫瘤免疫微環(huán)境中的重要成分為間質(zhì)內(nèi)腫瘤浸潤淋巴細胞，為誘導腫瘤免疫應答和機體應對腫瘤細胞重要機制，TILs數(shù)量可在一定程度對機體對抗腫瘤的能力反應。相關學者表明，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽過程，會出現(xiàn)微環(huán)境改變，如免疫應答細胞因子產(chǎn)生。

綜上所述，乳腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞水平與出芽狀況呈負相關，乳腺癌腫瘤惡性程度與出芽水平存在相關性，與惡性程度高的臨床病理指標密切相關，可對患者預后產(chǎn)生影響。對腫瘤出芽與乳腺癌臨床病理特征、腫瘤浸潤淋巴細胞及患者預后的相關性探討，可為患者臨床治療提供更有效理論依據(jù)和重要基礎。

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（收稿日期：2019-09-30）