枸杞多糖對(duì)衰老小鼠皮膚組織總抗氧化能力及脂褐質(zhì)的影響

王彩霞

寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，寧夏 銀川 750004

枸杞屬茄科落葉灌木，是我國(guó)傳統(tǒng)的“藥食同源”中藥材，含有多種營(yíng)養(yǎng)成分和微量元素[1]?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》曾記載：“枸杞久服，堅(jiān)筋骨，輕身不老[2]”。枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharde，LBP)是從枸杞中提取出來(lái)的一種多糖，是枸杞發(fā)揮藥效的主要成分之一[1]，因其具有多種生物活性越來(lái)越受到人們的關(guān)注。研究表明，枸杞多糖具有降血脂、降血糖、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抑制細(xì)胞凋亡及延緩衰老等廣泛的藥理學(xué)作用[3]。本研究觀察衰老模型小鼠皮膚組織中T-AOC活性和LF含量，從而探究枸杞多糖對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老小鼠皮膚衰老程度的影響。

1 儀器與材料

1.1 動(dòng)物 KM 小鼠50只，雌性，體重(20±2)g，級(jí)別：SPF。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均購(gòu)自寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，分籠飼養(yǎng)，自由飲食，規(guī)律光照，無(wú)不良影響因素，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.2 材料 D-半乳糖(銀川祺寶生物有限公司)，枸杞多糖(銀川市農(nóng)科院提供)，總抗氧化能力(T-AOC)、脂褐質(zhì)(LF)試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 ELx808全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)佰騰)，DY89-Ⅱ電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(上海將來(lái)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，TDL-5-A型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，測(cè)定儀器為722分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)，DK-420S型三用恒溫水箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，BLG10電子秤(上海精科天美科學(xué)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組、造模及給藥 50只小鼠隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組、模型組、枸杞多糖低、中、高劑量組，每組10只。模型組及給藥組每日頸背部皮下注射D-半乳糖(1000 mg/kg)，建立亞急性衰老模型?？瞻讓?duì)照組頸背部皮下注射等量生理鹽水。低、中、高劑量組在注射 D-半乳糖的同時(shí)灌服枸杞多糖5 mg/kg/d、10 mg/kg/d、20 mg/kg/d，給藥容積20 mL/kg。模型組、正常組灌服等量生理鹽水。以上操作1次/d，連續(xù)42 d。

2.2 取材及指標(biāo)檢測(cè) 連續(xù)給藥42 d后，小鼠斷頸處死，速取小鼠背部?jī)杉珉尾恐g脫毛區(qū)域的皮膚，面積為3 cm×3 cm，并迅速將取下的皮膚冰凍保存，待用。取脫毛后背部皮膚組織塊0.5 g左右，量筒量取該組織塊9倍重量的預(yù)冷生理鹽水勻漿，漿液以3500 r/min的速度離心20 min，取其上清液分別按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定小鼠總抗氧化能力(T-AOC)及脂褐質(zhì)(LF)含量。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，各組實(shí)驗(yàn)參數(shù)以表示，組間比較按方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠皮膚組織T-AOC活性明顯降低(P<0.01)，LF含量明顯升高(P<0.01)。相對(duì)于模型組，枸杞多糖低、中、高劑量組小鼠皮膚T-AOC活性均顯著升高(P<0.05，P<0.05，P<0.01)，LF含量明顯降低(P<0.05，P<0.01，P<0.01)。表明枸杞多糖低、中、高劑量均能提高衰老模型組小鼠皮膚組織T-AOC活性，降低LF含量。詳見(jiàn)表1。

組別nT-AOC/活力單位LF /μg/g空白對(duì)照組1045.17±2.340.685±0.287模型組1021.83±1.58▲0.930±0.325▲枸杞多糖低劑量組1030.07±3.75*0.879±0.268*枸杞多糖中劑量組1032.36±1.82*0.731±0.145**枸杞多糖高劑量組1036.65±2.69**0.697±0.136**

注：與空白對(duì)照組比較,▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4 討論

衰老是生命過(guò)程中正常而又復(fù)雜的生理現(xiàn)象，皮膚作為人體最大的器官，其衰老是人類生命歷程中不可抗拒的規(guī)律[4]。皮膚老化分為時(shí)呈老化與光老化，前者是內(nèi)源性因素所致，是衰老的根本，受遺傳、內(nèi)分泌等生理進(jìn)化因素影響；后者是外源性因素所致，是皮膚衰老的重要影響條件，受紫外線、季節(jié)、生活壓力、生活習(xí)慣、疾病等影響。皮膚衰老是內(nèi)源性因素與外源性因素共同作用的結(jié)果。其顯著特征是皮膚出現(xiàn)松弛及皺紋，暴露處皮膚粗糙、彈性降低、血管擴(kuò)張、色素沉著、表皮角化不良等[5]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)衰老的解釋有不同學(xué)說(shuō)，其中較為公認(rèn)并得到廣泛認(rèn)可的是自由基學(xué)說(shuō)，它認(rèn)為皮膚衰老是自由基產(chǎn)生和消除發(fā)生障礙的結(jié)果。機(jī)體每天代謝時(shí)產(chǎn)生的自由基在正常情況下可被清除，但隨著年齡的增長(zhǎng)，氧自由基加速形成。自由基形成后，不斷攻擊細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸，形成過(guò)氧化脂質(zhì)(Lipide Peroxide，LPO)，后者則與膜脂、膜蛋白聚合，交聯(lián)形成脂褐質(zhì)(LF)并沉積于組織中，造成細(xì)胞功能障礙，加速細(xì)胞衰老[7]。因此，LF含量的高低間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基損傷的嚴(yán)重程度。健康生物體內(nèi)有抗氧化的酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)，其中酶系統(tǒng)包括超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)等，非酶系統(tǒng)有VitE，生育酚，β胡蘿卜素，谷胱甘肽，白蛋白等，這些物質(zhì)均可及時(shí)處理氧自由基。因此，抗氧化力的測(cè)定引起人們的廣泛關(guān)注。而總抗氧化能力(T-AOC)是一個(gè)全面反映皮膚組織抗氧化能力的良好指標(biāo)，它的活力高低可全面反映皮膚組織中酶與非酶全部的抗氧化物。

研究結(jié)果顯示，模型組小鼠皮膚細(xì)胞損傷，代謝紊亂，皮膚T-AOC活性明顯降低，LF含量顯著升高。枸杞多糖低、中、高劑量均可明顯提高D-半乳糖致亞急性衰老模型小鼠皮膚組織T-AOC活性，降低皮膚組織LF含量，提示枸杞多糖能從一定程度上提高抗氧化能力，清除體內(nèi)自由基，減輕或抑制脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，從而起到延緩衰老的作用。