雄激素受體在浸潤性乳腺癌基于免疫組織化學(xué)的分子亞型中的表達及意義

陳艷宇 周揚帆 李亦明 鐘碧玲 王貴明

【摘要】 目的：探討雄激素受體在浸潤性乳腺癌基于免疫組織化學(xué)的分子亞型中的表達及意義。方法：選取2017年1月-2018年12月在廣東省第二人民醫(yī)院手術(shù)切除的浸潤性乳腺癌標本123例，運用免疫組織化學(xué)方法對雄激素受體（AR）的表達情況進行檢測，觀察AR、ER、PR、Ki-67、HER-2的陽性表達情況、AR與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系、AR與乳腺癌分子亞型的關(guān)系，并分析其臨床意義。結(jié)果：經(jīng)過免疫組織化學(xué)檢測后可知，AR的陽性表達率為82.93%;AR與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR、Ki-67均有密切關(guān)聯(lián)（P<0.05），AR與年齡、腫瘤大小、臨床分期、組織分級、HER-2均無關(guān)聯(lián)（P>0.05）;AR與Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達型、三陰性型均有密切關(guān)聯(lián)（P<0.05）。結(jié)論：AR在乳腺癌組織中具有較高的表達率，在不同的分子亞型中AR的陽性表達率具有較大差異;AR陽性表達與ER、PR、Ki-67及腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有密切關(guān)聯(lián);同時AR可能將成為治療乳腺癌的新一代靶向藥物。

【關(guān)鍵詞】 雄激素受體 浸潤性乳腺癌 免疫組織化學(xué) 分子亞型 表達 意義

[Abstract] Objective： To investigate the expression and significance of androgen receptor in immunohistochemical molecular subtypes of invasive breast cancer. Method： A total of 123 invasive breast cancer specimens were obtained from Guangdong Second Provincial General Hospital from January 2017 to December 2018. The expression of androgen receptor （AR） was measured by immunohistochemistry. The positive expression of AR， ER， PR， Ki-67， HER-2， the relationship between AR and clinicopathological features of breast cancer patients， and the relationship between AR and molecular typing of breast cancer were observed， and its clinical significance was analyzed. Result： After immunohistochemical examination， the positive expression rate of AR was 82.93%. AR were closely related to lymph node metastasis， ER， PR and Ki-67 （P<0.05）， there were no correlation between AR and age， tumor size， clinical stage， tissue grade， HER-2 （P>0.05）. AR were closely associated with Luminal A， Luminal B， HER-2 overexpression and triple negative （P<0.05）. Conclusion： AR has a high expression level in breast cancer tissues， and the positive expression rate of AR is different in different molecular subtypes. AR positive expression are closely related to ER， PR， Ki-67 and axillary lymph node metastasis. At the same time， AR may become a new generation of targeted drugs for the treatment of breast cancer.

乳腺癌是一種十分常見的婦科疾病，并且也是一類具有高度異質(zhì)性的激素依賴性腫瘤疾病，在病理組織學(xué)形態(tài)、分子遺傳學(xué)改變、臨床生物學(xué)行為等方面均有所不同[1]。2013年St Gallen指南將基于免疫組織化學(xué)的乳腺癌分子分型用于指導(dǎo)臨床決策，具體如下：ER陽性，PR陽性≥20%，HER-2陰性且Ki-67陽性指數(shù)<20%定義為Luminal A型;Luminal B型在臨床中包括兩種類型，即ER陰性與ER陽性[2];HER-2過表達型定義為ER及PR陰性，HER-2陽性;ER、PR及HER-2均陰性定義為三陰性型[3]。雄激素受體（AR）屬于核甾體激素受體家族，是信號通路的重要組成部分，同時作為重要的轉(zhuǎn)錄因子參與基因表達調(diào)控，其成員包括雌激素受體（ER）與孕激素受體（PR）[4]。目前諸多研究顯示，ER與PR的表達與乳腺癌較好的預(yù)后相關(guān)，但關(guān)于AR在乳腺癌不同分子亞型中的表達目前國內(nèi)研究較少，因此尚未能明確AR與乳腺癌患者臨床病理特征、乳腺癌分子亞型的關(guān)系[5-6]。本文將探討雄激素受體在浸潤性乳腺癌基于免疫組織化學(xué)的分子亞型中的表達及其意義，以期分析AR與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系，為乳腺癌個體化治療尋找潛在有效的治療靶點?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月-2018年12月在廣東省第二人民醫(yī)院手術(shù)切除的浸潤性乳腺癌標本123例。（1）納入標準：①均符合《乳腺腫瘤組織學(xué)分類》第四版中關(guān)于乳腺癌的臨床診斷標準[7];②入院前未接受過其他方式的治療。（2）排除標準：①無法配合完成研究;②患有其他惡性腫瘤疾病。該研究已經(jīng)倫理學(xué)委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 試劑選擇 AR（EP120，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），ER（SP1，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司），PR（PgR636，DAKO公司），HER-2（4B5，Roche Ventana公司），Ki-67（MIB1，DAKO公司）;DAB檢測試劑盒、蘇木素及返藍液均購自Roche公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色檢測 收集所有組織標本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、浸蠟及包埋，3 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)蘇木精-伊紅染色后光鏡下觀察腫瘤組織學(xué)類型、分級等。免疫組織化學(xué)染色使用Ventana Benchmark XT全自動免疫組化機（Roche公司）進行檢測，所有的免疫組化玻片右側(cè)均貼有組織芯片，用已知陽性/陰性組織設(shè)立陽性/陰性對照。

1.2.3 結(jié)果判定 經(jīng)過檢測可知，共檢測出四個分子亞型，主要包括Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達型與三陰性型。ER與PR陽性標準為≥1%的腫瘤細胞核陽性染色。AR陽性標準為≥10%的腫瘤細胞核陽性染色。HER-2陽性定義為IHC3+或FISH+。

1.3 觀察指標 觀察AR、ER、PR、Ki-67、HER-2的陽性表達情況，AR與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，AR與乳腺癌分子亞型的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗及Fisher確切概率法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 123例患者基本情況 123例患者，年齡30～78歲，平均（54.1±4.9）歲;>50歲78例，≤50歲45例;組織學(xué)類型：浸潤性導(dǎo)管癌115例，浸潤性小葉癌2例，髓樣癌2例，篩狀癌2例，黏液癌2例;分子分型：Luminal A型15例，Luminal B型68例，HER-2過表達型22例，三陰性型18例;組織分級：Ⅰ級27例，Ⅱ級67例，Ⅲ級29例;臨床分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期75例，Ⅲ期28例;腫瘤大?。篢1 18例，T2 54例，T3 30例，T4 21例。

2.2 AR、ER、PR、Ki-67、HER-2的陽性表達情況 在123例患者中，AR陽性患者共102例，占82.93%;ER陽性患者共84例，占68.29%;PR陽性患者共59例，占47.97%;Ki-67陽性患者共99例，占80.49%;HER-2陽性患者共32例，占26.02%。

2.3 AR與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 經(jīng)過臨床分析可知，AR與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR、Ki-67均有密切關(guān)聯(lián)（P<0.05），與年齡、腫瘤大小、臨床分期、組織分級、HER-2均無關(guān)聯(lián)（P>0.05），見表1。

2.4 AR與乳腺癌分子分型的關(guān)系情況 AR與乳腺癌分子亞型有密切關(guān)聯(lián)（字2=82.361，P=0.000），見表2。

3 討論

浸潤性乳腺癌起源于乳腺實質(zhì)上皮細胞，是嚴重危害女性健康的最常見惡性腫瘤之一[8];由于個體化精準醫(yī)療模式需要，僅評估乳腺癌傳統(tǒng)指標，已不能全面充分地反映乳腺癌的生物學(xué)特征及預(yù)后轉(zhuǎn)歸[9]。隨著研究的不斷深入與檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，目前臨床已開始對浸潤性乳腺癌的分子分型進行研究，以便對乳腺癌的發(fā)病機制進行有效的明確，從而能夠予以良好的治療[10]。

依據(jù)國外學(xué)者的一項研究表明，乳腺癌的基因表達譜在同一腫瘤中具有穩(wěn)定的表達特點，而在不同腫瘤之間則具有不同的表達特點，從而得出在不同腫瘤之間具有明顯差異表達的“固有基因亞群”的結(jié)論[11]。因此，臨床中將乳腺癌分為ER陽性組與ER陰性組，對于ER表達陽性乳腺癌，其基因表達具有與乳腺腔上皮細胞較為相似的表達特點，此種類型被稱為腔上皮型乳腺癌（Luminal型），并且隨著研究的不斷深入，Luminal型又被細化為Luminal A型（ER陽性/HER-2陰性）與Luminal B型（ER陽性/HER-2陽性）[12];對于ER表達陰性乳腺癌，則主要分為HER-2陽性型與三陰性型[13]，這成為乳腺癌分子分型的基礎(chǔ)。近年來，采用2013年St Gallen國際共識推薦的免疫組織化學(xué)替代分型，令臨床研究工作更加實用、經(jīng)濟。

乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，其發(fā)病機制中多種激素共同參與，并且各因素之間具有緊密關(guān)聯(lián)[14]。ER與PR表達已成為乳腺癌患者的常規(guī)檢測項目，而雄激素與AR在乳腺癌中的生物學(xué)作用尚未明確。近幾年相關(guān)報道顯示，伴隨著雄激素水平的增高，乳腺癌的發(fā)病率不斷增加，兩者之間具有顯著的關(guān)聯(lián)[15]。在乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展過程中，雄激素不僅具有協(xié)同作用，同時還能間接轉(zhuǎn)化為雌激素，從而參與疾病的發(fā)展[16]。除此之外，相關(guān)研究顯示，AR在ER陽性乳腺癌中的表達可能是另外一種激素反應(yīng)標志物，而在ER陰性乳腺癌中的表達則可能是一種治療靶分子[17]。

本研究結(jié)果顯示，HER-2在乳腺癌組織中的陽性率達26.02%，HER-2陰性與陽性乳腺癌中，AR的陽性率無差異（P>0.05），與目前的臨床研究結(jié)果相似[18]。國外學(xué)者的研究表明，在ER陰性乳腺癌中AR表達與HER-2過表達密切關(guān)聯(lián)，而在ER陽性乳腺癌中AR表達并未與HER-2具有關(guān)聯(lián)性?；诖?，AR是否為預(yù)后因素或治療的分子靶點，以及AR與HER-2在這些特殊亞群信號通路的相關(guān)性尚未有統(tǒng)一的定論[19]。

本研究結(jié)果顯示，AR的陽性表達率在三陰性型最低。眾所周知，三陰性乳腺癌患者復(fù)發(fā)率和病死率較高，目前尚無有效的內(nèi)分泌、靶向治療藥物，仍以化療為主要的輔助治療方法。依據(jù)相關(guān)的臨床研究顯示，與AR陰性相比，AR陽性的三陰性乳腺癌患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡率均較低，有相對更好的預(yù)后[20]。因此，AR在三陰性乳腺癌中的表達，提示AR可能作為乳腺癌新的治療靶點，也可能是患者預(yù)后與轉(zhuǎn)歸的良好判斷指標。但也有國外學(xué)者研究顯示，AR的表達率與患者的生存無顯著關(guān)系。故AR在三陰性乳腺癌中的作用尚未有統(tǒng)一定論，仍然需要進行更加深入與前瞻性的研究，以進一步明確雄激素與AR在三陰性乳腺癌發(fā)病機制中所扮演的角色。

本研究結(jié)果顯示，AR與年齡、腫瘤大小、臨床分期與組織分級均無顯著關(guān)聯(lián)（P>0.05），與相關(guān)學(xué)者的研究結(jié)果相近，但由于樣本容量的局限，使得檢測結(jié)果仍然存在較大的差異。

綜上所述，AR在乳腺癌患者的陽性表達率較高，且AR與ER、PR、Ki-67、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移均有密切關(guān)聯(lián)，而與年齡、腫瘤大小、臨床分期與組織分級均無顯著關(guān)聯(lián)，但AR在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制尚未完全闡明，AR能否成為新一代的靶向治療藥物，但有待于進一步的深入研究。

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（收稿日期：2019-09-30） （本文編輯：程旭然）