康復(fù)新液對(duì)乙醇致大鼠急性胃潰瘍的保護(hù)作用

陶柱萍 郭銳 王雪雪 厲穎 劉衛(wèi)紅 高鵬飛

摘要?[目的]探討康復(fù)新液對(duì)無(wú)水乙醇致大鼠急性胃潰瘍的保護(hù)作用及機(jī)制。[方法]采用無(wú)水乙醇灌胃SD大鼠，制備急性胃潰瘍模型，將大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、模型組（無(wú)水乙醇10?g/kg）和康復(fù)新液給藥組（無(wú)水乙醇10?g/kg+康復(fù)新液6?mL/kg）。給藥后，觀察各組大鼠的胃黏膜形態(tài)學(xué)變化和潰瘍指數(shù)，測(cè)定大鼠胃組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）的含量。[結(jié)果]與空白組相比，模型組胃組織損傷嚴(yán)重，潰瘍指數(shù)、MDA水平明顯升高;SOD、GSH水平顯著降低（P<0.01）。與模型組相比，康復(fù)新液給藥組胃組織損傷程度減輕，潰瘍指數(shù)和MDA水平降低（P<0.05），SOD、GSH水平升高（P<0.01）。[結(jié)論]康復(fù)新液對(duì)無(wú)水乙醇引起的急性胃潰瘍有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減少氧自由基生成、促進(jìn)氧自由基清除和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、增加氧化應(yīng)激有關(guān)。

關(guān)鍵詞?康復(fù)新液;無(wú)水乙醇;急性胃潰瘍;抗氧化;保護(hù)作用

中圖分類(lèi)號(hào)?R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A

文章編號(hào)?0517-6611（2020）07-0190-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.07.054

Protective?Effect?of?Kangfuxin?Solution?on?Rats?with?Ethanolinduced?Acute?Gastric?Ulcer

TAO?Zhuping1，GUO?Rui2，WANG?Xuexue1?et?al?（1.School?of?Pharmacy，Dali?University，Dali，Yunnan?671000;2.Chongqing?Chemical?Industry?Vocational?College，Chongqing?400020）

Abstract?[Objective]?The?research?aimed?to?investigate?the?protective?effects?of?Kangfuxin?solution?on?ethanolinduced?acute?gastric?ulcer?in?rats.[Method]The?models?of?acute?gastric?ulcer?were?established?using?absolute?ethanol.The?rats?were?randomly?divided?into?control?group，model?group?（absolute?ethanol?10?g/kg），Kangfuxin?solution?group?（absolute?ethanol?10?g/kg+Kangfuxin?6?mL/kg）?according?to?its?body?weight.The?morphological?changes?of?gastric?mucosa?and?ulcer?index?were?observed，the?activity?of?superoxide?dismutase?（SOD）?and?the?contents?of?malondialdehyde?（MDA）?and?glutathione?（GSH）?in?gastric?tissue?of?rats?were?checked.[Result]Compared?with?normal?group，the?gastric?tissue?injury?was?serious，the?ulcer?index?and?and?the?contents?of?MDA?in?model?group?were?increased，whereas?the?level?of?SOD?and?GSH?were?decreased，which?presented?statistical?significant?differences?（P<0.01）.Compared?with?the?model?group，the?degree?of?gastric?tissue?injury?was?alleviated，the?ulcer?index?and?the?contents?of?MDA?was?reduced?significantly?（P<0.05），and?the?level?of?SOD?and?GSH?were?elevated?obviously?（P<0.01）?in?the?Kangxin?solution?group?（P<0.01）.[Conclusion]Kangfuxin?solution?has?protective?effect?on?ethanolinduced?acute?gastric?ulcer，which?may?be?related?to?reducing?the?production?of?oxygen?free?radicals，promoting?the?scavenging?of?oxygen?free?radicals，inhibiting?lipid?peroxide?and?increasing?oxidative?stress.

Key?words?Kangfuxin?solution;Ethanol;Acute?gastric?ulcer;Antioxidation;Protective?effect

基金項(xiàng)目?國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81260676，81960712）;云南省地方本科高校（部分）基礎(chǔ)研究聯(lián)合專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目（2018FH001-097）;云南省教育廳科學(xué)研究基金重點(diǎn)項(xiàng)目（2013Z154）。

作者簡(jiǎn)介?陶柱萍（1994—），女，云南宣威人，碩士研究生，研究方向：代謝組學(xué)。通信作者，副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事代謝組學(xué)研究。

收稿日期?2019-12-01

隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展，帶來(lái)生活節(jié)奏加快、社會(huì)交往增多、生活壓力增大等情況，導(dǎo)致人們胃潰瘍的發(fā)病率日益升高，尤其是飲酒所引起的急性胃潰瘍?cè)谂R床日益常見(jiàn);據(jù)有關(guān)資料，我國(guó)部分地區(qū)胃潰瘍發(fā)病率高達(dá)6.07%，復(fù)發(fā)率為60%～80%[1-2]。乙醇對(duì)胃黏膜損害很大，通過(guò)消耗黏液和碳酸氫鹽而破壞黏膜保護(hù)層;也可通過(guò)微粒體氧化酶在醇代謝過(guò)程中產(chǎn)生乙醛，導(dǎo)致抗氧化酶活性受損，加劇胃黏膜損傷[3]。胃黏膜損傷導(dǎo)致氧自由基清除率降低、胃黏膜中的氧自由基增加，進(jìn)而引起脂質(zhì)過(guò)氧化增加，損傷細(xì)胞和細(xì)胞膜及影響?zhàn)つす┭?，從而進(jìn)一步加劇潰瘍的形成[4]。

康復(fù)新液由美洲大蠊干燥蟲(chóng)體的提取物制成，具有改善局部微循環(huán)、抗炎消腫、促進(jìn)表皮細(xì)胞生長(zhǎng)和肉芽組織的增生、加速壞死組織脫落、修復(fù)各種潰瘍和創(chuàng)面的作用[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，康復(fù)新液對(duì)急性乙醇性胃潰瘍有一定的保護(hù)作用[5]，但其作用機(jī)制尚不清楚。該試驗(yàn)通過(guò)觀察大鼠的胃黏膜形態(tài)學(xué)變化和胃潰瘍指數(shù)，檢測(cè)胃組織中超氧化物歧化酶（SOD）、還原型谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）的水平，探討康復(fù)新液對(duì)乙醇致大鼠急性胃潰瘍的影響及可能的作用機(jī)制，為康復(fù)新液的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

1.1.1?藥品及試劑。

康復(fù)新液（昆明賽諾制藥股份有限公司）;氯化鈉（天津市福晨化學(xué)試劑廠）;無(wú)水乙醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司）;SOD、GSH、MDA生化指標(biāo)試劑盒均購(gòu)自卡邁舒生物科技有限公司。

1.1.2?儀器。

METTLER?AE240分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;SIGMA?3-15低溫高速離心機(jī)，西格瑪實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)公司;MICCRA?D-1組織破碎儀，邁卡萊客（廣州）工業(yè)技術(shù)有限公司;VORTEX-5渦旋儀，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司。

1.1.3?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

SPF級(jí)雄性SD大鼠，體重220～250?g，購(gòu)自昆明楚商科技有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（滇）K2012-0002，所有大鼠在清潔級(jí)環(huán)境中常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2?試驗(yàn)方法

1.2.1?動(dòng)物分組與給藥。

將18只SD大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)7?d后，隨機(jī)按體質(zhì)量分為3組，即空白組、模型組、康復(fù)新液給藥組。在禁食不禁水12?h后，模型組和康復(fù)新液給藥組一次性灌胃無(wú)水乙醇（10?g/kg）建立胃損傷模型;造模后1?h，給藥組一次性給予康復(fù)新液（6?mL/kg）進(jìn)行治療;給藥后1?h處死大鼠。

1.2.2?樣本的收集和處理。

1.2.2.1?潰瘍指數(shù)的計(jì)算。

將大鼠胃組織取出后，進(jìn)行拍照評(píng)分，并計(jì)算潰瘍指數(shù)。胃損傷指數(shù)評(píng)定參照文獻(xiàn)[6]，標(biāo)準(zhǔn)為：黏膜皺褶消失（0、1、2、3）;出血性區(qū)域（0、1、2、3）;潰瘍（0、2、4、6）;穿孔（0、10）;潰瘍指數(shù)是所有病變的分?jǐn)?shù)之和。

1.2.2.2?胃組織生化指標(biāo)的檢測(cè)。取3份胃組織0.1?g，分別加入預(yù)冷的生理鹽水勻漿，制成勻漿液。將勻漿液離心后，取上清于-80?℃保存，用于SOD、GSH、MDA生化指標(biāo)檢測(cè)。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?所測(cè)得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS?17.0軟件進(jìn)行分析和處理，處理后的試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±S）的方式表示，用隨機(jī)單因素的方差分析ANOVA，各組之間的比較用LSD（least?significant?difference）法。以P<0.05表示各組間結(jié)果具有顯著性差異。

2?結(jié)果與分析

2.1?大鼠胃黏膜組織形態(tài)觀察比較

如圖1所示，空白組大鼠胃壁完整、未見(jiàn)到明顯損傷，模型組大鼠胃部可以看到明顯的充血腫脹，而康復(fù)新液給藥組大鼠相對(duì)模型組損傷程度明顯減輕。

2.2?潰瘍指數(shù)

從圖2可以看出，與空白組比較，模型組的潰瘍指數(shù)具有顯著差異（P<0.01）;與模型組相比，康復(fù)新液給藥組潰瘍指數(shù)明顯減少（P<0.05），表明康復(fù)新液可以減輕急性胃潰瘍癥狀，有一定的保護(hù)作用。

2.3?胃組織生化指標(biāo)

采用試劑盒測(cè)定大鼠胃組織勻漿中SOD、GSH與MDA，結(jié)果如圖3所示。與空白組相比，模型組大鼠的SOD活性和GSH含量明顯降低（P<0.01），MDA含量顯著升高（P<0.01）。與模型組相比，康復(fù)新液給藥組大鼠的SOD活性、GSH含量均顯著升高（P<0.01），而MDA含量明顯降低（P<0.05）。

3?討論與結(jié)論

該試驗(yàn)選用無(wú)水乙醇灌胃致急性胃潰瘍的動(dòng)物模型，灌入的乙醇直接破壞胃表面的保護(hù)屏障，導(dǎo)致胃壁血液循環(huán)障礙，胃黏膜損傷;其病理特點(diǎn)與人胃黏膜損傷相似，且具有操作簡(jiǎn)便、成模速度快、試驗(yàn)重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)[2]。急性乙醇性胃潰瘍的發(fā)生與胃黏膜血流量減少及氧自由基增加誘發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)有關(guān)，其中氧自由基的增多是重要因素[7];機(jī)體通過(guò)酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，并由此形成脂質(zhì)過(guò)氧化物[8]。

SOD是機(jī)體內(nèi)一種重要的內(nèi)源性氧自由基清除劑，在抗氧化方面起著重要作用，能有效地清除氧自由基，中斷氧自由基的連鎖反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，其活性的高低也間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力[4，9-10]。SOD可以將超氧化物（O2-）還原為過(guò)氧化氫（H2O2），然后過(guò)氧化氫酶將過(guò)氧化氫轉(zhuǎn)化為水，并具有修復(fù)細(xì)胞的功能[11]。胃黏膜受到損傷時(shí)，胃黏膜及血液中的氧自由基增多，促使體內(nèi)SOD被大量消耗[12]。經(jīng)康復(fù)新液給藥治療后，胃組織中的SOD活性明顯升高，可清除機(jī)體過(guò)多的自由基，從而減輕機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷，并能穩(wěn)定細(xì)胞膜，起到保護(hù)胃黏膜的作用。

GSH是細(xì)胞抗氧化防御系統(tǒng)中最重要的物質(zhì)之一，可以保護(hù)胃黏膜組織免受自由基物質(zhì)的損害;其作用承接SOD，能將胃組織氧化產(chǎn)生的過(guò)氧化物轉(zhuǎn)化為低毒無(wú)害的物質(zhì)。GSH主要在谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的作用下與H2O2反應(yīng)，消除H2O2生成H2O，自身則轉(zhuǎn)化為氧化型谷胱甘肽（GSSG），而GSSG則可在谷胱甘肽還原酶的作用下還原成GSH;此外，GSH還可在谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶的作用下，與許多有害化合物及其活性代謝物的結(jié)合，從而分解有害的內(nèi)源性、外源性化合物，并促進(jìn)這些化合物的分解[13]。GSH的降低會(huì)使細(xì)胞面臨氧化損傷的風(fēng)險(xiǎn)。在該試驗(yàn)中，給予無(wú)水乙醇后大鼠胃組織中GSH水平顯著降低，說(shuō)明在無(wú)水乙醇的作用下胃組織產(chǎn)生了嚴(yán)重的氧化損傷，并可能產(chǎn)生了一些相應(yīng)的有害化合物;給藥后GSH水平有恢復(fù)正常的趨勢(shì)，提示康復(fù)新液具有抗胃潰瘍的作用。

MDA是多不飽和脂肪酸過(guò)氧化的主要產(chǎn)物，也是氧化應(yīng)激的生物標(biāo)志物，可以破壞核酸、蛋白等生物大分子，造成機(jī)體損傷和疾病的發(fā)生，其產(chǎn)生還可以破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，加劇膜的損傷，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹壞死;其含量是反映機(jī)體內(nèi)氧自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化代謝的重要指標(biāo)，可間接反映出細(xì)胞受損的程度[3，14-15]。乙醇致急性胃潰瘍的胃組織中SOD活性的降低，可促使氧自由基在胃黏膜中積聚，從而引發(fā)鏈?zhǔn)街|(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，使MDA含量升高，進(jìn)一步加重胃黏膜的損傷[10]。試驗(yàn)結(jié)果顯示，康復(fù)新液給藥，降低了無(wú)水乙醇造成的MDA升高，進(jìn)一步表明康復(fù)新液能降低脂質(zhì)過(guò)氧化，增加機(jī)體氧化應(yīng)激能力，抑制胃黏膜損傷的發(fā)生和發(fā)展，從而對(duì)乙醇引起的胃黏膜損傷進(jìn)行保護(hù)。

綜上所述，康復(fù)新液能降低乙醇誘導(dǎo)的潰瘍損傷指數(shù)和胃組織中MDA含量的增加，升高SOD活性和GSH含量，

從而改善胃黏膜損傷。其機(jī)制可能與減少氧自由基生成、

促進(jìn)氧自由基清除和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用、增加氧化應(yīng)激有關(guān)。

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