• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    出芽短梗霉發(fā)酵液中聚蘋果酸定量近紅外模型的建立與應(yīng)用

    2020-04-25 05:37:34張英昊薛照陽趙廷彬殷海松喬長晟
    食品科學(xué) 2020年8期
    關(guān)鍵詞:蘋果酸發(fā)酵液校正

    張英昊,薛照陽,趙廷彬,殷海松,喬長晟,,4,

    (1.天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院,天津 300457;2.天津慧智百川生物工程有限公司,天津 300457;3.天津現(xiàn)代職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院,天津 300350;4.天津市食品綠色制造及安全校企協(xié)同創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室,天津 300457)

    聚蘋果酸是一種水溶性脂肪族聚酯,由蘋果酸單體以酯基聚合而成[1],在食品、藥品、化妝品、生物醫(yī)學(xué)材料、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用前景。微生物發(fā)酵法現(xiàn)已成為生產(chǎn)聚蘋果酸的主要方式,其中出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)由于產(chǎn)量相對其他微生物高且具有胞外分泌的優(yōu)勢逐步成為了主要生產(chǎn)菌種[2-6]。

    發(fā)酵液中聚蘋果酸的傳統(tǒng)測量方法是利用高溫酸水解的方式先將聚蘋果酸水解成L-蘋果酸單體,然后對單體進(jìn)行測量。常用的測量方法有Goodban比色法[7]、酶試劑盒法[8]和液相色譜法,其中液相色譜法是目前最成熟的測量方式[9-10]。酸水解過程具有高能耗、高污染的缺陷;Goodban法副反應(yīng)嚴(yán)重,影響測量精度;酶方法所需的酶試劑盒價(jià)格較貴,不易保存,對操作環(huán)境要求也較高;液相色譜法雖然是最成熟的方式,但是具有測量耗時(shí)、對樣品具有破壞性、儀器設(shè)備昂貴笨重等缺陷。因此有必要開發(fā)新的檢測技術(shù)。

    近紅外檢測分析技術(shù)主要利用有機(jī)物中含氫化學(xué)鍵,如C—H、N—H、O—H、S—H等的倍頻與合頻吸收,對特定組分以快速無損、不需要化學(xué)試劑的方式進(jìn)行定量分析或定性判別[11]。近紅外光譜具有峰形嚴(yán)重重疊,峰強(qiáng)度較弱,信息冗余、雜峰多等特征,因此原始光譜難以用肉眼直接分析,需要以計(jì)算機(jī)軟件為工具對光譜進(jìn)行預(yù)處理,使用化學(xué)計(jì)量學(xué)方法建立數(shù)學(xué)模型計(jì)算待測物質(zhì)濃度,而偏最小二乘回歸(partial least square regression,PLSR)算法由于其良好的擬合精度,優(yōu)秀的泛化能力和相對而言較小的運(yùn)算量逐漸成為最常用的近紅外檢測數(shù)學(xué)建模算法,并在發(fā)酵制品的測量中得到廣泛應(yīng)用。例如董芹[12]利用近紅外檢測發(fā)酵液中透明質(zhì)酸的濃度和分子質(zhì)量;張樹明等[13]利用近紅外檢測葡萄酒發(fā)酵過程中的常用參數(shù);郭宇飛等[14]建立利用近紅外測量發(fā)酵液中L-色氨酸濃度的模型;Li Mengyao等[15]建立近紅外檢測生物反應(yīng)器培養(yǎng)CHO細(xì)胞過程中抗體濃度,細(xì)胞密度以及營養(yǎng)物質(zhì)濃度的模型。

    鑒于聚蘋果酸的價(jià)值以及近紅外檢測技術(shù)的優(yōu)勢,本實(shí)驗(yàn)選擇利用PLSR方法建立出芽短梗霉發(fā)酵液中聚蘋果酸濃度的近紅外定量模型,并進(jìn)一步驗(yàn)證此模型在單因素培養(yǎng)基優(yōu)化和誘變菌種篩選2 類實(shí)際應(yīng)用情景中對發(fā)酵液樣品的預(yù)測精度,以期為近紅外檢測模型在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 菌種

    出芽短梗霉CGMCC No.3337,保藏于天津北洋百川生物技術(shù)有限公司。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    斜面保藏使用標(biāo)準(zhǔn)PDA固體培養(yǎng)基。種子培養(yǎng)基:蔗糖140 g/L、酵母粉3 g/L、丁二酸2 g/L、硫酸銨1 g/L、碳酸鉀0.4 g/L、磷酸二氫鉀0.1 g/L、硫酸鎂0.1 g/L、硫酸鋅0.05 g/L、碳酸鈣20 g/L(單獨(dú)滅菌)、玉米漿1 mL/L?;A(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基:蔗糖180 g/L、蛋白胨35 g/L、硝酸鈉2 g/L、硫酸鎂0.3 g/L、氯化鉀0.5 g/L、磷酸二氫鉀0.1 g/L、硫酸錳0.05 g/L、碳酸鈣20 g/L(單獨(dú)滅菌)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Antaris II傅里葉變換中近紅外光譜分析儀 美國賽默飛世爾科技有限公司;1100高效液相色譜分析儀 美國安捷倫科技有限公司;Sky2102搖床 上海蘇坤實(shí)業(yè)有限公司;YJ-875S醫(yī)用超凈臺(tái) 蘇州凈化設(shè)備廠;SPK-250B-Z生化培養(yǎng)箱 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;LD5-10高速離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠。

    1.3 方法

    1.3.1 培養(yǎng)條件

    搖瓶發(fā)酵:從PDA斜面挑取菌體接種于種子培養(yǎng)基中,在25 ℃、200 r/min條件下振蕩培養(yǎng)40 h,然后將種子液按體積分?jǐn)?shù)10%的比例接種于基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中,在25 ℃、200 r/min條件下振蕩培養(yǎng)144 h,期間每隔12 h取一次樣以產(chǎn)生不同的聚蘋果酸濃度。

    1.3.2 誘變篩選步驟

    按照文獻(xiàn)[16]的方法進(jìn)行紫外誘變菌種篩選,經(jīng)搖瓶培養(yǎng)120 h后取樣做相關(guān)測量。

    1.3.3 聚蘋果酸濃度的測定

    取10 mL發(fā)酵液,15 000 r/min離心10 min,收集上清液,吸取1 mL上清液于水解反應(yīng)釜中,加入4 mL水與5 mL濃度2 mol/L的硫酸溶液,于110 ℃水解7 h,將聚蘋果酸完全水解為L-蘋果酸。高效液相色譜法測定水解前后的L-蘋果酸含量并依據(jù)稀釋倍數(shù)換算為發(fā)酵液原液中的濃度,兩者之差即為發(fā)酵液聚蘋果酸含量。

    高效液相色譜檢測條件:J&K C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相:25 mmol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5);柱溫25 ℃;恒定流速1 mL/min;進(jìn)樣量3 μL;紫外檢測器波長210 nm。

    1.3.4 發(fā)酵液近紅外光譜掃描

    應(yīng)用透射光譜模塊,以空氣作為掃描背景,室溫下每個(gè)樣品做3 次光譜采集,求平均光譜,每次采集掃描32次,掃描波長范圍4 000~10 000 cm-1,采樣間隔設(shè)置為2 cm-1。測試樣品為不同批次不同培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)取樣的發(fā)酵離心上清液。

    1.3.5 數(shù)據(jù)分析與建模

    1.3.5.1 樣本劃分

    建模共涉及109 個(gè)樣本,利用Kennard-Stone方法[17]劃分校正集和內(nèi)部驗(yàn)證集,其中校正集82 個(gè),內(nèi)部驗(yàn)證集27 個(gè),另用完全未參與建模的發(fā)酵液樣品50 個(gè)作外部驗(yàn)證集,驗(yàn)證模型對完全未知樣品的預(yù)測精度。

    分別取單因素優(yōu)化培養(yǎng)基樣品14 個(gè)以及紫外誘變菌株樣品集27 個(gè)作為外部驗(yàn)證集,驗(yàn)證模型在培養(yǎng)基優(yōu)化和誘變篩菌兩類應(yīng)用中的預(yù)測精度。其中單因素優(yōu)化樣品使用初始菌株,在基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中額外添加了2~10 g/L的硝酸鈉后經(jīng)搖瓶獲得樣品;誘變菌株樣品集使用誘變菌株接種培養(yǎng),在基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中經(jīng)搖瓶獲得樣品。

    1.3.5.2 特征波段的選擇

    分別以間隔偏最小二乘回歸(interval-partial least square regression,i-PLSR)法和移動(dòng)窗口偏最小二乘回歸(moving window-PLSR,mw-PLSR)法選擇特征波段[18-19],以交叉驗(yàn)證均方根誤差(root mean square error of cross validation,RMSECV)作為波段選擇依據(jù),對應(yīng)于最小的RMSECV的波段為最佳擬合波段。交叉驗(yàn)證的計(jì)算方法參考文獻(xiàn)[20]。本研究所有交叉驗(yàn)證均使用留一法。

    1.3.5.3 光譜預(yù)處理與聚蘋果酸定量建模

    光譜的一階導(dǎo)數(shù)、二階導(dǎo)數(shù)、多元散射校正(multiplicative scatter correlation,MSC)、標(biāo)準(zhǔn)正規(guī)變換(standard normal variation,SNV)等原理和計(jì)算公式參考文獻(xiàn)[21]。具體的實(shí)現(xiàn)方式,MSC依照其數(shù)學(xué)原理用R軟件自行編程,其他的處理利用R軟件prospectr包進(jìn)行[17];PLSR由R軟件PLS包實(shí)現(xiàn)[22],以RMSECV值作為PLSR算法中因子數(shù)選擇的標(biāo)準(zhǔn),對應(yīng)于最小RMSECV值的因子數(shù)具有最佳擬合精度。以內(nèi)部和外部驗(yàn)證集的均方根誤差(root mean square error of prediction set,RMSEP),以及液相色譜測量值與模型計(jì)算值間的相關(guān)系數(shù)R作為模型質(zhì)量的評價(jià)指標(biāo),RMSEP值越小且R越接近于1說明模型的定量擬合效果越好。RMSEP和R的計(jì)算公式如下,n為驗(yàn)證集中的樣本數(shù)。

    1.3.5.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    使用SPSS軟件對校正集、內(nèi)部驗(yàn)證集和全部的外部驗(yàn)證集作配對t檢驗(yàn)以驗(yàn)證液相色譜測量值與模型計(jì)算值之間差異的顯著性,并計(jì)算測量值、模型預(yù)測值間的誤差置信區(qū)間;從外部驗(yàn)證集中挑選10 個(gè)樣本,分別以每個(gè)樣品掃描的3 次光譜平行代入模型算出濃度后進(jìn)行單樣本t檢驗(yàn),以驗(yàn)證模型對同一樣品測量的穩(wěn)定性。

    1.3.5.5 校正集樣品光譜代表性評價(jià)

    全部樣品集,對其特征波段范圍內(nèi)的近紅外光譜進(jìn)行主成分分析,并選擇方差貢獻(xiàn)率最大的前2 位主成分,作出主成分得分圖。主成分分析由R軟件內(nèi)置基本函數(shù)計(jì)算。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 液相色譜測定結(jié)果

    如圖1所示,保留時(shí)間4.4 min左右的峰為L-蘋果酸單體,樣品中的L-蘋果酸單體峰分離良好,可以基本實(shí)現(xiàn)精確的測量。對于近紅外定量建模,校正集測量結(jié)果的準(zhǔn)確性是實(shí)現(xiàn)模型精度的基本前提。

    圖 1 L-蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品(a)和酸水解發(fā)酵液上清液(b)液相色譜圖Fig. 1 HPLC chromatograms of L-malic acid (a) and the acid hydrolysate of the fermentation supernatant (b)

    2.2 校正集原始近紅外光譜

    圖 2 校正集的原始近紅外光譜Fig. 2 Raw near-infrared spectra of calibration set

    如圖2所示,芽短梗霉發(fā)酵液的近紅外光譜部分波段噪聲非常大,會(huì)嚴(yán)重影響定量精度,需要避開。而且出芽短梗霉發(fā)酵液成分高度復(fù)雜,除聚蘋果酸外,多糖和蛋白質(zhì)也會(huì)作為副產(chǎn)物被分泌至胞外[23-24]。因此根據(jù)聚蘋果酸的結(jié)構(gòu)特征查近紅外吸收表確定建模波段的方法不可靠,需要用計(jì)算的方式確定建模波段。

    2.3 建模波段選擇

    表 1 i-PLSR法選擇波段結(jié)果Table 1 Results of waveband selection using i-PLSR method

    表 2 mw-PLSR法選擇波段結(jié)果Table 2 Results of waveband selection using mw-PLSR method

    依次采用i-PLSR與mw-PLSR方法尋找特征波段,如表1、2所示。利用i-PLSR法先在全波段上粗略定位特征波段所在的大致范圍,再用mw-PLSR法進(jìn)一步精確定位,RMSECV越小則說明波段的預(yù)測精度越高。綜合表1、2結(jié)果可知,5 638~6 024 cm-1波段范圍對應(yīng)于最佳的擬合精度,為特征波段。依據(jù)常見化合物近紅外區(qū)段倍頻吸收表[25],該波段主要對應(yīng)于亞甲基和次甲基中的碳?xì)滏I的二倍頻吸收,是聚蘋果酸分子中存在的結(jié)構(gòu)。因此該波段可以對聚蘋果酸進(jìn)行定量。

    2.4 光譜預(yù)處理方式選擇

    表 3 不同預(yù)處理后的RMSECV值Table 3 RMSECV values with different pre-processing methods

    預(yù)處理通常能夠消除輸入光譜中的隨機(jī)誤差或基線漂移等不利因素,對建模往往有積極影響。如表3所示,每種組合條件下交叉驗(yàn)證過程中的PLSR運(yùn)算的因子數(shù)為對應(yīng)于最小的RMSECV值的因子數(shù)。RMSECV值越小,說明對應(yīng)的預(yù)處理?xiàng)l件能使模型預(yù)測精度最高。由表3可以看出,MSC+SNV+Savitzky-Golay 55點(diǎn)平滑+一級導(dǎo)數(shù)光譜的預(yù)處理組合能使模型預(yù)測精度最佳。

    圖 3 經(jīng)過波段選擇和光譜預(yù)處理后的校正集輸入光譜波形Fig. 3 Input spectra of calibration set with selected waveband and pre-processing method

    圖3 為5 638~6 024 cm-1特征波段在經(jīng)過MSC、SNV和Savitzky-Golay 55點(diǎn)平滑一級求導(dǎo)后的波形。該波形數(shù)據(jù)直接輸入PLSR模型用于聚蘋果酸的定量。

    2.5 模型的建立與質(zhì)量評價(jià)

    欠擬合與過擬合是數(shù)學(xué)建模中2 種常見的缺陷。其中欠擬合指的是模型輸入數(shù)據(jù)中與待測組分關(guān)聯(lián)的信息利用不充分,過擬合則是輸入數(shù)據(jù)中與待測組分無關(guān)的信息也被引入模型中。2 種情況均會(huì)使模型的精度下降。PLSR算法中不同的建模因子數(shù)目代表對原始數(shù)據(jù)不同程度的信息提取,故進(jìn)行建模前要確認(rèn)合適的建模因子數(shù)以平衡欠擬合與過擬合。從圖4可以看出,前5維因子對應(yīng)的RMSECV值均最低,說明此時(shí)模型預(yù)測狀態(tài)最佳。

    圖 4 PLS因子數(shù)目選擇結(jié)果Fig. 4 Selection of the number of partial least square factors

    圖 5 模型算法對校正集、內(nèi)部驗(yàn)證集和外部驗(yàn)證集樣品的預(yù)測結(jié)果Fig. 5 Model prediction results of samples in calibration set, internal test set and external test set

    以前5維因子進(jìn)行PLSR建模并分別驗(yàn)證模型對校正集和內(nèi)部驗(yàn)證集的預(yù)測精度,結(jié)果如圖5所示。其中RMSEC為1.619,Rc為0.983 3,內(nèi)部驗(yàn)證集預(yù)測均方根誤差(root mean square error of prediction,RMSEP)為1.553,Rp為0.970 0;外部驗(yàn)證集RMSEP為1.378,Rp為0.992 4。從RMSEP值,相關(guān)系數(shù)R值以及散點(diǎn)的直觀分布來看,模型預(yù)測效果基本滿意。

    2.6 模型在單因素培養(yǎng)基優(yōu)化和誘變篩菌中的應(yīng)用效果

    分別以單因素培養(yǎng)基優(yōu)化組和紫外誘變菌種篩選組的樣品經(jīng)搖瓶培養(yǎng)后的樣品,作為完全未知的外部驗(yàn)證集,用模型進(jìn)行聚蘋果酸濃度預(yù)測,結(jié)果如圖6所示。單因素培養(yǎng)基優(yōu)化樣品集的RMSEP為1.670,Rp為0.984 2;紫外誘變菌株樣品集的RMSEP為1.416,Rp為0.920 3。直觀上看這2 種情況下模型均具有尚可的預(yù)測效果。

    圖 6 模型對培養(yǎng)基單因素優(yōu)化組和誘變菌株組的預(yù)測結(jié)果Fig. 6 Model prediction results for medium composition optimization and mutant screening

    2.7 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)結(jié)果

    以配對t檢驗(yàn)的方法分別檢驗(yàn)校正集、內(nèi)部驗(yàn)證集、外部驗(yàn)證集、單因素培養(yǎng)基優(yōu)化組和誘變菌株組的聚蘋果酸液相色譜測量值與模型預(yù)測值間的差異顯著性,并計(jì)算在95%置信度下誤差的置信區(qū)間,結(jié)果如表4所示。其中校正集、內(nèi)部驗(yàn)證集和外部驗(yàn)證集的液相色譜值和計(jì)算值間無顯著差異,而培養(yǎng)基單因素優(yōu)化組和誘變菌株篩選組則存在顯著差異,表明模型不適合在這2 類應(yīng)用中對質(zhì)量濃度進(jìn)行測量,尤其單因素培養(yǎng)基優(yōu)化組,其95%置信度下的最大誤差能達(dá)到3.8 g/L,相對于液相色譜值的范圍來說過大。內(nèi)部、外部驗(yàn)證集的測量值液相色譜值間無顯著差異,且偏差相對于液相色譜值而言小于最大值的5%,表明這種誤差是可以接受的。

    表 4 配對t檢驗(yàn)的結(jié)果Table 4 Result of paired t-test

    進(jìn)行培養(yǎng)基優(yōu)化或誘變篩菌時(shí),待測組分質(zhì)量濃度的相對大小往往比實(shí)際質(zhì)量濃度更受關(guān)注。根據(jù)單因素優(yōu)化組和誘變菌株組誤差的置信區(qū)間結(jié)果,結(jié)合置信區(qū)間的定義,可以得出2 個(gè)樣本模型計(jì)算值間的“最小差值”的計(jì)算公式,即置信區(qū)間上、下邊界之差的絕對值。2 個(gè)樣本在光譜計(jì)算結(jié)果偏差大于“最小差值”,即證明2 個(gè)樣本在給定置信度下在液相色譜值有顯著差異。因此在95%的置信水平上,單因素優(yōu)化組和誘變菌株組在模型計(jì)算值上的“最小差值”必須分別至少大于3.19 g/L和1.436 g/L才能以模型計(jì)算值的大小判斷液相色譜值,結(jié)合圖6結(jié)果,測量值與模型值間的線性較好,因此可以在滿足最小差值的條件下較可靠地由定量模型比較出組分大小。如表5所示,從外部驗(yàn)證集中抽出的10 個(gè)樣本,分別由各自同一樣品的3 個(gè)平行光譜計(jì)算質(zhì)量濃度值并進(jìn)行單樣本t檢驗(yàn),以驗(yàn)證3 次平行光譜的穩(wěn)定性。由結(jié)果可知每個(gè)樣本3 次平行經(jīng)t檢驗(yàn)的顯著性均顯著大于0.05,說明沒有差異,表明模型對同一個(gè)樣品的預(yù)測值具有很高的穩(wěn)定性。

    表 5 模型穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果Table 5 Results of model stability test

    2.8 校正樣品光譜代表性評價(jià)

    圖 7 全體涉及樣本光譜代表性評價(jià)結(jié)果Fig. 7 Representativeness evaluation of all the samples

    對特征波段范圍的近紅外光譜進(jìn)行主成分分析評價(jià)樣品集光譜代表性,結(jié)果如圖7所示。校正集樣品的散點(diǎn)完全覆蓋了內(nèi)部和外部驗(yàn)證集,并且基本分布均勻,沒有明顯的離群點(diǎn)。內(nèi)部與外部驗(yàn)證集中也均沒有出現(xiàn)明顯偏離校正集范圍的樣本點(diǎn)。該結(jié)果說明樣品集的光譜具備代表性,可以在一定程度上代表實(shí)際運(yùn)用中常見的情況。

    3 討 論

    本實(shí)驗(yàn)雖然建立近紅外聚蘋果酸定量模型,但模型對部分樣品的預(yù)測結(jié)果相對于液相色譜測量值仍有較大誤差。因此有必要分析近紅外模型中誤差的來源。

    近紅外光譜具有信息高度重疊的特征,很難將背景組分對應(yīng)的光譜信息完全從目的組分的信息中排除,這表明近紅外檢測相對于中紅外等傳統(tǒng)光譜分析技術(shù)的外推性能較差,定量模型的精度高度受背景組分的影響。因此近紅外模型的校正集樣品要盡可能地包含各種可能出現(xiàn)的背景信息,即具備“代表性”[25]?!按硇浴钡谋憩F(xiàn)形式,即校正集樣品在光譜的主成分空間上應(yīng)該能覆蓋未知樣品,不能有明顯偏離,否則模型精度有可能降低。此時(shí)需要不斷輸入新的校正集樣品擴(kuò)大校正集的代表性,然后全體校正集樣本重新建模[25]以改善定量模型的精度(也可按照文獻(xiàn)[26]中所述方法先在主成分空間上進(jìn)行聚類,每一小類再分別建模并對類內(nèi)的未知樣品進(jìn)行預(yù)測,從而改善模型精度)。結(jié)合圖7結(jié)果看,校正集是具備代表性的。但是隨著未知樣品測量的增多,仍然需要適當(dāng)補(bǔ)充新的校正樣本。

    本實(shí)驗(yàn)所用PLSR本質(zhì)上是一種線性算法(即光譜矩陣可以經(jīng)歷一系列線性變換,或者乘上一個(gè)或幾個(gè)矩陣后得出質(zhì)量濃度矩陣)[27],用以描述光譜與質(zhì)量濃度間的換算關(guān)系;而在樣品存在散射干擾的情況下二者間的線性關(guān)系會(huì)發(fā)生偏離使預(yù)測精度不佳[28]。表3的光譜預(yù)處理方法最終確定了MSC+SNV+Savitzky-Golay 55點(diǎn)平滑+一階導(dǎo)數(shù)的預(yù)處理方式,能夠最好地改善預(yù)測精度;然而MSC+SNV(有時(shí)要進(jìn)一步結(jié)合導(dǎo)數(shù)光譜)是一種常用的消除散射因素干擾的預(yù)處理方式[21],加之出芽短梗霉發(fā)酵液黏稠、渾濁的直觀特征,暗示了出芽短梗霉中存在散射效應(yīng),并干擾了光譜與濃度間的線性關(guān)系,從而增大了誤差。因此,采用非線性算法改進(jìn)定量模型,是一個(gè)努力方向。

    液相色譜測量值的精度同樣也會(huì)增大誤差。如圖1b所示,液相色譜值質(zhì)量濃度需要對L-蘋果酸峰求峰面積計(jì)算得出。然而由于發(fā)酵液是一種高度復(fù)雜的混合物,液相色譜不一定能完全將L-蘋果酸的峰分離開,這種情況下算出峰面積會(huì)偏離實(shí)際,并進(jìn)一步在聚蘋果酸質(zhì)量濃度液相色譜測量值中引入較大的系統(tǒng)誤差。這很可能是導(dǎo)致本實(shí)驗(yàn)中誘變菌株組和單因素優(yōu)化組樣品的液相色譜、計(jì)算值間出現(xiàn)較大誤差的原因。因此合適的液相色譜測量條件對于近紅外建模的精度同樣重要。

    最后,本實(shí)驗(yàn)配對t檢驗(yàn)的結(jié)論雖然表明近紅外模型在單因素優(yōu)化和誘變篩菌中的誤差較大不能進(jìn)行測量,但是可以在2 個(gè)計(jì)算值的偏差大于“最小差值”條件下,通過比較2 個(gè)計(jì)算值的大小實(shí)現(xiàn)比較的液相色譜測量值大小的目的,且能夠排除因近紅外模型的誤差、波動(dòng)導(dǎo)致的“假陽性”現(xiàn)象,證明了近紅外模型在快速篩菌和組分優(yōu)化技術(shù)的中的應(yīng)用價(jià)值。

    4 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)首先聯(lián)合使用i-PLSR法與mw-PLSR法,確定建模波段為5 638~6 024 cm-1;隨后經(jīng)一系列優(yōu)化后依次使用MSC+SNV+Savitzky-Golay 55點(diǎn)平滑+一階導(dǎo)數(shù)光譜+前5維因子PLSR建立定量模型,模型的校正集RMSEC為1.619,Rc為0.983 3,內(nèi)部驗(yàn)證集RMSEP為1.553,Rp為0.970 0,外部驗(yàn)證集的RMSEP為1.378,Rp為0.992 4。結(jié)合統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果表明測量值與模型計(jì)算值間無顯著差異,誤差可以接受,模型穩(wěn)定性良好,可用于對組分的測量。進(jìn)一步驗(yàn)證模型在單因素培養(yǎng)基優(yōu)化和誘變菌種篩選應(yīng)用中的精度,并結(jié)合配對t檢驗(yàn)的置信區(qū)間結(jié)果,證明了雖然在這這2 類應(yīng)用中模型對聚蘋果酸質(zhì)量濃度的誤差較大,但可以在模型計(jì)算值的差值分別滿足大于3.19 g/L和1.436 g/L的前提下以95%的置信度比較出不同樣品中聚蘋果酸濃度大小,因此近紅外模型有應(yīng)用于誘變篩菌和培養(yǎng)基組分優(yōu)化的價(jià)值。

    猜你喜歡
    蘋果酸發(fā)酵液校正
    劉光第《南旋記》校正
    國學(xué)(2020年1期)2020-06-29 15:15:30
    連翹內(nèi)生真菌的分離鑒定及其發(fā)酵液抑菌活性和HPLC測定
    桑黃纖孔菌發(fā)酵液化學(xué)成分的研究
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:03
    一類具有校正隔離率隨機(jī)SIQS模型的絕滅性與分布
    機(jī)內(nèi)校正
    一種基于eNode B的主動(dòng)式頻偏校正算法
    鴨心蘋果酸脫氫酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)
    HPLC與LC-MS/MS測定蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素的方法比較
    木瓜發(fā)酵液對小鼠四氯化碳誘發(fā)肝損傷的防護(hù)作用
    殼聚糖和氯化鈣處理對采后黃冠梨蘋果酸代謝酶和相關(guān)基因表達(dá)的影響
    国产一级毛片在线| 亚洲精品一区蜜桃| 免费少妇av软件| 黄色一级大片看看| 国产一区二区三区av在线| 欧美精品国产亚洲| videossex国产| 国产黄色视频一区二区在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 交换朋友夫妻互换小说| a级毛片免费高清观看在线播放| 日韩欧美精品免费久久| 国产视频内射| 99久久精品一区二区三区| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲怡红院男人天堂| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产美女午夜福利| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 欧美区成人在线视频| 91久久精品国产一区二区三区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 男的添女的下面高潮视频| 免费观看无遮挡的男女| 国产亚洲最大av| 大片电影免费在线观看免费| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲天堂av无毛| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲成人一二三区av| 亚洲国产色片| 精品久久久精品久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久精品国产亚洲网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 妹子高潮喷水视频| 日韩强制内射视频| 国产精品偷伦视频观看了| 中文欧美无线码| 亚洲av中文av极速乱| 国产亚洲5aaaaa淫片| 日韩av不卡免费在线播放| 国产乱人视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一级片'在线观看视频| 青青草视频在线视频观看| 久久久久久久精品精品| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久人人爽人人片av| 热re99久久精品国产66热6| 国产又色又爽无遮挡免| 深夜a级毛片| 久久久久人妻精品一区果冻| 特大巨黑吊av在线直播| 99视频精品全部免费 在线| 国产成人91sexporn| 欧美zozozo另类| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 精品久久久久久久久av| 丝袜脚勾引网站| 久热这里只有精品99| 精品人妻偷拍中文字幕| 青青草视频在线视频观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品一二三| 婷婷色麻豆天堂久久| 丰满迷人的少妇在线观看| 日本黄色片子视频| 成人免费观看视频高清| 日韩三级伦理在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 日日啪夜夜爽| 中文天堂在线官网| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 热re99久久精品国产66热6| 99re6热这里在线精品视频| 日本色播在线视频| 男男h啪啪无遮挡| 老熟女久久久| 在线看a的网站| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 视频中文字幕在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 久热这里只有精品99| 婷婷色麻豆天堂久久| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美3d第一页| av天堂中文字幕网| av又黄又爽大尺度在线免费看| 成年人午夜在线观看视频| av专区在线播放| 日韩人妻高清精品专区| 日韩强制内射视频| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 在现免费观看毛片| 午夜免费观看性视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美zozozo另类| av黄色大香蕉| 久久热精品热| 男女边吃奶边做爰视频| 韩国高清视频一区二区三区| 黑丝袜美女国产一区| 黑人高潮一二区| 亚洲四区av| 99热这里只有是精品50| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品三级大全| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 免费观看av网站的网址| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产 精品1| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 日本色播在线视频| 国产成人免费无遮挡视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲精品视频女| 国产精品精品国产色婷婷| 蜜桃在线观看..| 国产乱人视频| 国产精品久久久久久av不卡| 国产乱人偷精品视频| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲自偷自拍三级| 欧美成人一区二区免费高清观看| 人人妻人人看人人澡| 2022亚洲国产成人精品| 国产视频首页在线观看| 欧美3d第一页| 大话2 男鬼变身卡| 我要看日韩黄色一级片| 欧美成人午夜免费资源| 国产乱人视频| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲欧美精品专区久久| 国模一区二区三区四区视频| 国产成人精品一,二区| 中文字幕av成人在线电影| 成人漫画全彩无遮挡| 免费看av在线观看网站| 久久久久久久久久人人人人人人| 成人特级av手机在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 国产在线视频一区二区| 一边亲一边摸免费视频| 久久99热6这里只有精品| 麻豆成人av视频| 亚洲天堂av无毛| 99久久综合免费| 一级爰片在线观看| freevideosex欧美| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产黄频视频在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久久久久久久久久丰满| 一个人看视频在线观看www免费| 国产在线视频一区二区| 久久婷婷青草| 国产黄片美女视频| 日韩制服骚丝袜av| 久久99热这里只频精品6学生| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 午夜福利影视在线免费观看| 成年免费大片在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 久久97久久精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 下体分泌物呈黄色| 欧美成人午夜免费资源| 国产伦理片在线播放av一区| 九九在线视频观看精品| 欧美bdsm另类| 91久久精品国产一区二区三区| 国产免费视频播放在线视频| 少妇 在线观看| 精品视频人人做人人爽| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产黄频视频在线观看| 99久久综合免费| 精品视频人人做人人爽| 久久久成人免费电影| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 熟女人妻精品中文字幕| 成人亚洲欧美一区二区av| 高清av免费在线| 美女视频免费永久观看网站| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 中文字幕亚洲精品专区| 男女边摸边吃奶| 午夜福利视频精品| 亚洲性久久影院| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 一本一本综合久久| 三级经典国产精品| 成人影院久久| 国产色爽女视频免费观看| 日日啪夜夜撸| 99久久精品国产国产毛片| 少妇的逼水好多| 少妇人妻 视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 日韩三级伦理在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲av国产av综合av卡| 久久青草综合色| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 人体艺术视频欧美日本| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 成人免费观看视频高清| 青青草视频在线视频观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美xxⅹ黑人| 97热精品久久久久久| 观看免费一级毛片| 国产精品成人在线| 欧美xxxx性猛交bbbb| 欧美人与善性xxx| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产 精品1| 少妇高潮的动态图| 国产精品欧美亚洲77777| 中文字幕免费在线视频6| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久午夜福利片| 一级毛片aaaaaa免费看小| 身体一侧抽搐| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 日韩视频在线欧美| 人妻夜夜爽99麻豆av| 成人影院久久| 午夜免费观看性视频| 久久久成人免费电影| 国产69精品久久久久777片| 免费观看在线日韩| 我要看日韩黄色一级片| 国产免费又黄又爽又色| 视频区图区小说| 女性被躁到高潮视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 精品午夜福利在线看| 国产中年淑女户外野战色| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产精品精品国产色婷婷| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲不卡免费看| 婷婷色麻豆天堂久久| 春色校园在线视频观看| 久久av网站| 亚洲精品乱久久久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 天堂中文最新版在线下载| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日韩视频在线欧美| 99热网站在线观看| 人妻系列 视频| 色网站视频免费| 国产精品三级大全| 成人美女网站在线观看视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久午夜福利片| 尾随美女入室| 一边亲一边摸免费视频| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲天堂av无毛| 亚洲精品成人av观看孕妇| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久久久久精品精品| 亚洲,欧美,日韩| 一级片'在线观看视频| 日日啪夜夜爽| 亚洲国产精品专区欧美| 丝瓜视频免费看黄片| av播播在线观看一区| 人妻少妇偷人精品九色| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲精品国产成人久久av| 伊人久久国产一区二区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 看非洲黑人一级黄片| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久久久九九精品二区国产| 高清欧美精品videossex| h日本视频在线播放| 99九九线精品视频在线观看视频| 又爽又黄a免费视频| freevideosex欧美| 久久久久网色| 成人免费观看视频高清| 午夜福利视频精品| 成人免费观看视频高清| 美女福利国产在线 | 男女边吃奶边做爰视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产精品人妻久久久影院| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美bdsm另类| 久久久久久人妻| 观看av在线不卡| 国产视频内射| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产淫片久久久久久久久| 国产高清不卡午夜福利| 免费观看无遮挡的男女| 九草在线视频观看| 国产综合精华液| 少妇的逼水好多| 亚洲内射少妇av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 99热国产这里只有精品6| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 午夜激情福利司机影院| freevideosex欧美| 韩国高清视频一区二区三区| 日日啪夜夜撸| 少妇熟女欧美另类| 亚洲av欧美aⅴ国产| 美女cb高潮喷水在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 天天躁日日操中文字幕| av天堂中文字幕网| 亚洲精品国产av成人精品| 成人国产麻豆网| 最近的中文字幕免费完整| 日本免费在线观看一区| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美区成人在线视频| 一区二区三区免费毛片| 在线天堂最新版资源| 六月丁香七月| 国产毛片在线视频| 久久青草综合色| 亚洲欧美日韩东京热| 校园人妻丝袜中文字幕| 秋霞伦理黄片| 国产视频首页在线观看| 18+在线观看网站| 多毛熟女@视频| 精品视频人人做人人爽| 丰满乱子伦码专区| 尾随美女入室| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 99久久综合免费| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲高清免费不卡视频| 波野结衣二区三区在线| 国产精品免费大片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产毛片在线视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 插阴视频在线观看视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国模一区二区三区四区视频| av.在线天堂| 成人无遮挡网站| 国产男女超爽视频在线观看| 春色校园在线视频观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 女性被躁到高潮视频| 少妇高潮的动态图| 一级毛片我不卡| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品久久久久久久末码| 国产精品久久久久久久电影| 美女cb高潮喷水在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 在现免费观看毛片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 我要看黄色一级片免费的| 欧美xxⅹ黑人| 51国产日韩欧美| 久久精品人妻少妇| 免费看av在线观看网站| 日本午夜av视频| 亚洲人成网站在线播| 久久久成人免费电影| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久99热这里只有精品18| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲美女视频黄频| av在线老鸭窝| 久久久久视频综合| a级一级毛片免费在线观看| 成人特级av手机在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产av国产精品国产| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 久久 成人 亚洲| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲综合精品二区| 1000部很黄的大片| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费观看a级毛片全部| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 人妻 亚洲 视频| 一级二级三级毛片免费看| 久久av网站| 国精品久久久久久国模美| 国产精品一区二区在线观看99| 好男人视频免费观看在线| 免费av不卡在线播放| videossex国产| www.av在线官网国产| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲色图av天堂| 99久久综合免费| 久久人妻熟女aⅴ| 国产淫片久久久久久久久| 午夜福利高清视频| 国产69精品久久久久777片| 久久精品国产自在天天线| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 日韩一区二区视频免费看| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美高清成人免费视频www| 青青草视频在线视频观看| 不卡视频在线观看欧美| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 色网站视频免费| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 免费看日本二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 少妇精品久久久久久久| 久久ye,这里只有精品| 熟女av电影| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品熟女少妇av免费看| 国产淫片久久久久久久久| 中文字幕av成人在线电影| 干丝袜人妻中文字幕| 精品人妻视频免费看| 特大巨黑吊av在线直播| 各种免费的搞黄视频| 久久久精品免费免费高清| 在线观看美女被高潮喷水网站| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 一区二区三区免费毛片| 国产永久视频网站| 嘟嘟电影网在线观看| 国产一区二区三区av在线| 老熟女久久久| 亚洲国产欧美人成| 看免费成人av毛片| 亚洲综合精品二区| 国产成人精品一,二区| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | av播播在线观看一区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| av免费在线看不卡| 一级毛片aaaaaa免费看小| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美+日韩+精品| 午夜福利视频精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美xxxx性猛交bbbb| 街头女战士在线观看网站| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 欧美人与善性xxx| 毛片一级片免费看久久久久| 免费观看av网站的网址| 日韩一区二区三区影片| 国产一区二区在线观看日韩| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 一级毛片电影观看| 黄色一级大片看看| 99久久精品国产国产毛片| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 激情 狠狠 欧美| 亚洲国产日韩一区二区| 久久久色成人| 成人黄色视频免费在线看| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产视频首页在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 黄片无遮挡物在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产午夜精品一二区理论片| 久久99热这里只频精品6学生| 国产精品久久久久久久电影| 少妇人妻精品综合一区二区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产成人精品一,二区| 久久综合国产亚洲精品| 黄色日韩在线| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲第一av免费看| 久久久久久久精品精品| 日本黄大片高清| 国产69精品久久久久777片| av免费在线看不卡| 久久毛片免费看一区二区三区| 午夜福利视频精品| 日韩av不卡免费在线播放| 免费看av在线观看网站| 七月丁香在线播放| 亚洲无线观看免费| 亚洲va在线va天堂va国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 2018国产大陆天天弄谢| 女人久久www免费人成看片| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲三级黄色毛片| 日本爱情动作片www.在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品国产三级国产专区5o| 草草在线视频免费看| 少妇的逼水好多| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 国产大屁股一区二区在线视频| 精品一区在线观看国产| 国产男女超爽视频在线观看| 青春草国产在线视频| 97超视频在线观看视频| 在线播放无遮挡| 日韩欧美精品免费久久| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产一级毛片在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 日本黄色日本黄色录像| 人妻少妇偷人精品九色| 精品国产乱码久久久久久小说| 中文字幕久久专区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 成年av动漫网址| 精品久久久久久久久av| 黄色一级大片看看| av女优亚洲男人天堂| 少妇人妻 视频| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲综合精品二区| 一区在线观看完整版| 国产欧美日韩精品一区二区| 美女福利国产在线 | 麻豆成人午夜福利视频| 一区二区av电影网| 国产精品不卡视频一区二区| 99久久综合免费| 又大又黄又爽视频免费| 少妇的逼水好多| 亚洲va在线va天堂va国产| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 一级毛片电影观看| 高清午夜精品一区二区三区| 超碰97精品在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 久久久成人免费电影| 亚洲无线观看免费| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 精品国产三级普通话版| 午夜免费男女啪啪视频观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 久久精品人妻少妇| 国产色爽女视频免费观看| 久久97久久精品| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲人成网站高清观看| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久热精品热| 亚洲av在线观看美女高潮| 超碰av人人做人人爽久久| 久久人妻熟女aⅴ| 久久久久久人妻| 欧美性感艳星| 高清黄色对白视频在线免费看 | av天堂中文字幕网| 欧美3d第一页| 97在线视频观看| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产永久视频网站| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 青春草亚洲视频在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品456在线播放app|