東莞南城區(qū)九項(xiàng)呼吸道病原體IgM抗體檢測(cè)結(jié)果分析

黃明蘭 ，彭致平 ，隋洪 ，劉安定

（1.東莞康華醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 東莞 523003；2.廣東醫(yī)科大學(xué)，廣東 東莞 523073）

常見(jiàn)的呼吸道感染，主要由細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體等病原體引起，呼吸道感染由不同的病原體侵襲所致[1]?；颊叩呐R床癥狀有很大的相似度，引起上呼吸道感染、支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、肺炎、肺部感染、咳嗽、發(fā)熱等類(lèi)似的臨床癥狀，在感染早期醫(yī)生只能夠憑經(jīng)驗(yàn)用藥，給臨床醫(yī)療工作者的診治活動(dòng)帶來(lái)了極大的困擾，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致抗生素的濫用。在患者受到呼吸道病原體的感染后，1到3周內(nèi)最先出現(xiàn)相關(guān)的特異性IgM抗體，相關(guān)的IgM抗體會(huì)存在人體血液內(nèi)2～3個(gè)月的時(shí)間[2]。使用“九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒（間接免疫熒光法）”對(duì)常見(jiàn)的呼吸道病原體的特異性抗體進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè),確定其感染的病原體，有助于醫(yī)生的針對(duì)性用藥，減少患者不必要的負(fù)擔(dān)與痛苦，給臨床疾病診斷提供依據(jù)。

為充分了解東莞南城區(qū)呼吸道病原體的感染情況及流行趨勢(shì),統(tǒng)計(jì)2013年到2017年期間于我院就診的呼吸道感染患者,共計(jì)2019例，統(tǒng)計(jì)呼吸道患者中九項(xiàng)呼吸道病原體特異性IgM的檢出情況，為臨床診治提供參考性依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2013年1月-2017年12月于東莞康華醫(yī)院就診的2019例呼吸道感染的患者，男性1226例，女性793例，患者年齡1月～90歲，平均年齡（20.51±0.56）歲。根據(jù)就診患者的年齡進(jìn)行如下分組，幼兒組≤1歲、兒童青少年組（＞1歲,≤18歲）、成人組（＞18 歲、≤60 歲）、老齡組（＞60 歲）

1.2 標(biāo)本來(lái)源 抽取呼吸道感染的患者靜脈血4～5ml于紅色無(wú)抗凝劑的真空采血管中，靜置1h后，3000r/min離心10分鐘，取血清進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 方法

1.3.1 試劑、儀器的選擇 采用由鄭州安圖生物公司提供的 “九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒（間接免疫熒光法）”，生產(chǎn)地址：西班牙。儀器采用熒光顯微鏡OLYMPUS，型號(hào)CX31。

1.3.2 檢測(cè)原理 間接免疫熒光法（IFA）是在檢測(cè)板上包被有相對(duì)應(yīng)的特異性抗原,待測(cè)樣品中的抗體與包被在檢測(cè)板上的抗原發(fā)生免疫特異性反應(yīng),未與抗原結(jié)合的非特異性抗體分子被洗滌緩沖液（PBS）除去。接下來(lái)，抗原-抗體免疫性復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗IgM發(fā)生免疫特異性反應(yīng),將熒光素（FITC）粘附在檢測(cè)板上。用免疫熒光顯微鏡觀察檢測(cè)板上相對(duì)應(yīng)的孔位的熒光模型,得出對(duì)應(yīng)的結(jié)果。

1.3.3 結(jié)果判斷 陽(yáng)性結(jié)果：呼吸道合胞病毒(RSV),腺病毒（ADV），甲型流感病毒（INFA），副流感病毒1、2 和 3 型（PIVs）和乙型流感病毒（INFB）的測(cè)試孔位中有1%至5%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜呈現(xiàn)出綠色的熒光模型；嗜肺軍團(tuán)菌（LP1），Q熱立克次體（COX），肺炎衣原體（CPn）的測(cè)試孔位中包被的菌體呈現(xiàn)出綠色的熒光模型;肺炎支原體測(cè)試孔位中呈現(xiàn)細(xì)胞外圍綠色的熒光模型。陰性結(jié)果：肺炎衣原體,嗜肺軍團(tuán)菌和立克次體的檢測(cè)孔位無(wú)綠色熒光發(fā)出，甲型和乙型流感病毒，支原體，腺病毒,呼吸道合胞病毒和副流感病毒的檢測(cè)孔位的細(xì)胞發(fā)出紅色的熒光。10號(hào)位為質(zhì)控孔位，發(fā)出紅色熒光。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以率或例數(shù)來(lái)表示。對(duì)于同一個(gè)體兩種以上的病原體感染,針對(duì)同一病原體采用重復(fù)計(jì)算。比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 呼吸道感染病原體特異性IgM抗體檢測(cè)結(jié)果2013年至2017年共計(jì)2019例,共計(jì)有643例特異性IgM抗體陽(yáng)性患者，772項(xiàng)IgM抗體陽(yáng)性結(jié)果。九項(xiàng)呼吸道病原體的特異性IgM抗體總檢出率為31.85%（混合感染重復(fù)計(jì)算）。與相關(guān)文獻(xiàn)所報(bào)道的感染率相近[3]。 LP1 4.60%（93/2019），MP 22.10%（446/2019）,COX 0.15%（3/2019）,CP 1.09%（22/2019）,ADV 1.19%(24/2019),RSV 0.25%(5/2019),INFA 0.40% （8/2019），INFB 7.28% （147/2019），PIVs 1.19%(24/2019)，混合感染重復(fù)計(jì)算。結(jié)合數(shù)據(jù)分析，以肺炎支原體（MP）的感染率最高，乙型流感病毒次之，見(jiàn)圖1。

圖1 九項(xiàng)病原體特異性IgM抗體檢出情況

2.2 不同類(lèi)型病原體感染的相關(guān)統(tǒng)計(jì) 在所檢測(cè)的共計(jì)有643例特異性IgM抗體陽(yáng)性患者中混合感染(同一患者檢測(cè)出兩種及兩種以上的特異性Ig M抗體)總共有119例，混合感染的模式共有23種。其中，兩種病原體混合感染的模式有16種類(lèi)型，三種病原體混合感染的模式有6種，四種病原體混合感染的模式有1種類(lèi)型。病原體混合感染以肺炎支原體(MP)、乙型流感病毒(INFB)混合感染模式最高，共計(jì)52例，嗜肺軍團(tuán)菌（LP1）和乙型流感病毒（INFB）混合感染次之,共計(jì)26例，肺炎支原體（MP）、副流感病毒 1、2 和 3 型（PIVs）混合感染8 例,肺炎支原體（MP）、肺炎衣原體（CP）混合感染6 例，肺炎支原體（MP）、腺病毒（ADV）混合感染 4例。

2.3 呼吸道感染病原體的季節(jié)性分布 呼吸道病原體的傳播感染，會(huì)隨著季節(jié)的更替，呈現(xiàn)出一定的季節(jié)性變化的規(guī)律。先將該研究數(shù)據(jù)，依據(jù)感染的時(shí)間，劃分為四個(gè)組。春季（3月～5月）,夏季（6月～8 月），秋季（9 月～11 月），冬季（12 月～2 月），分別統(tǒng)計(jì)呼吸道病原體的感染率，見(jiàn)表1，采用卡方檢驗(yàn)，得 χ2=60.99，χ20.05,1=7.81，P＜0.05；差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；由表1可見(jiàn)，春季、夏季、秋季是呼吸道病原體感染的多發(fā)時(shí)間段,而冬季呼吸道病原體的傳播感染率較低。并將感染率最高的前三項(xiàng)病原體（LP1、MP、INFB），做出季節(jié)分布表,見(jiàn)表 2；由表2可見(jiàn)，肺炎支原體（MP）和嗜肺軍團(tuán)1型（LP1）感染的高發(fā)時(shí)間段為春季（3月～5月），而乙型流感病毒(INFB)感染的高發(fā)時(shí)間段為夏季（6月～8月）。

表1 九項(xiàng)呼吸道病原體特異性IgM抗體檢出率隨季節(jié)變化規(guī)律

2.4 不同年齡組呼吸道病毒特異性IgM抗體檢出率 被檢測(cè)人群因處于不同的年齡階段，因免疫力的不同，對(duì)病原體的抵抗能力也截然不同。嬰幼兒（≤1歲）、兒童少年（＞1歲,≤18歲）的免疫系統(tǒng)正處于逐漸建立及完善的過(guò)程中，成年人（＞18歲，≤60歲）的免疫系統(tǒng)基本建立完全，對(duì)病原體的感染具有一定的抵抗力，老齡人（＞60歲）的體質(zhì)下降。也隨著免疫力的下降,不同的人群對(duì)呼吸道病原體有著不同的抵抗力,在感染情況方面能夠體現(xiàn)出來(lái),見(jiàn)表 3,采用卡方檢驗(yàn)，得 χ2=123.78，χ20.05,1=7.81，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 LP1、MP、INFB特異性IgM抗體檢出率隨季節(jié)變化規(guī)律

表3 九項(xiàng)呼吸道病原體特異性IgM抗體在不同年齡人群的檢出情況

2.5 不同臨床診斷呼吸道病毒特異性IgM抗體檢出率 呼吸道病原體,是能夠引起人類(lèi)呼吸道系統(tǒng)疾病的病原體,有細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體等病原體，而以上是作為一個(gè)大類(lèi)，若細(xì)分下去，則有更多的種類(lèi)，在如此眾多的病原體的感染之下，用藥的方向、抗生素的選擇更是大相徑庭，但是呼吸道疾病的臨床表現(xiàn)卻大同小異主要引起上呼吸道感染、支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、肺炎、肺部感染、咳嗽、發(fā)熱等相似的臨床癥狀，在不同的臨床表現(xiàn)下,九項(xiàng)呼吸道病原體特異性IgM抗體的檢出情況也存在著應(yīng)有的規(guī)律,現(xiàn)在將本研究的數(shù)據(jù)，依據(jù)不同的臨床表現(xiàn)分為支氣管炎、肺炎、肺部感染、呼吸道感染、發(fā)熱查因、血液病和其他，共計(jì)7個(gè)分組,見(jiàn)表4。采用卡方檢驗(yàn),得χ2=58.13，7.81，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表4 九項(xiàng)呼吸道病原體特異性IgM抗體在不同臨床表現(xiàn)的檢出情況

3 討論

呼吸道是人直接與外界接觸的一個(gè)部分，而在自然界有無(wú)數(shù)種病原體能夠經(jīng)空氣進(jìn)入人體的呼吸道，在不同的情況下，能夠?qū)е氯梭w的呼吸道感染。不明原因發(fā)熱、咽炎、支氣管炎、喘息性支氣管炎、肺炎、肺部感染等都是呼吸道病原體感染的臨床表現(xiàn),然而不同的臨床表現(xiàn)又隨著患者的年齡、免疫力、特殊體質(zhì)、基礎(chǔ)性疾病等個(gè)人身體素質(zhì)差異的不同而表現(xiàn)出不同的臨床特征,因而給臨床的診療帶來(lái)了極大的困擾。兒童免疫力低下，極易引發(fā)呼吸道感染,由于呼吸道感染的非典型病原體引起的臨床表現(xiàn)不典型,給臨床診斷和治療造成困難[4]。

引起呼吸道感染的危險(xiǎn)因素多種多樣,若無(wú)明確的診斷極容易導(dǎo)致抗生素的濫用,給患者帶來(lái)不必要的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因而使用正確檢查手段，得出明確的感染病原體是非常有必要的。肺炎支原體是介于細(xì)菌和病毒之間的已知能獨(dú)立生活的病原微生物中最小者,被認(rèn)為是導(dǎo)致社區(qū)獲得性肺炎的第三位病原體[5]?，F(xiàn)階段對(duì)于呼吸道病原的檢測(cè)有PCR法、病原體培養(yǎng)法、凝血試驗(yàn)法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。但不同的方法有各自的長(zhǎng)短板。PCR法雖然敏感性高、但它的假陽(yáng)性率也高，且試劑昂貴、檢測(cè)繁瑣,對(duì)檢測(cè)人員有較高的技術(shù)要求。支原體、衣原體培養(yǎng)法，流感病毒的凝血試驗(yàn)等方法是鑒定的金標(biāo)法，但培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)[6]。現(xiàn)在使用的多數(shù)是間接免疫熒光法,檢測(cè)病原體特異性IgM抗體,該檢測(cè)方法具備高特異性：96.3%～100%、高靈敏性：85.7～100%（與另一商品化的IFA試劑盒對(duì)照）。檢測(cè)時(shí)間短（約3h）等優(yōu)點(diǎn)，采用九項(xiàng)呼吸道病原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒,更具有一份血清多項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，試劑較為便宜，適用于臨床的推廣。

呼吸道病原體的感染隨著季節(jié)的更替出現(xiàn)有一定的變化規(guī)律,春季和夏季是呼吸道病原體感染的高發(fā)期,呼吸道病原體IgM抗體的陽(yáng)性率分別為36.49%、36.58%,高于秋季和冬季的33.06%、15.72%。相關(guān)文獻(xiàn)中，呼吸道病原體的高發(fā)期為秋季和冬季[7],該文獻(xiàn)報(bào)道的是成都地區(qū)的感染情況，與東莞南城區(qū)的氣候有較大的差異。故呼吸道病原體的流行與氣候相關(guān)，空氣不流通，高溫濕熱，是呼吸道病原體感染的高危因素。

本研究中,以肺炎支原體和乙型流感病毒最為常見(jiàn)，感染的人群年齡以兒童、青少年（>1歲，≤18歲）為主，感染率達(dá)46.49%。此年齡階段的人群免疫系統(tǒng)尚未完善,最容易受到呼吸道病原體的感染，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相符[8]，若無(wú)相關(guān)的明確診斷，容易導(dǎo)致抗生素的濫用，憑醫(yī)生的經(jīng)驗(yàn)性用藥，對(duì)兒童、青少年的身體損害較大，采用該試劑盒進(jìn)行明確診斷具有積極的臨床意義。而老齡組（＞60歲）的陽(yáng)性率略低于成人組,是該研究分析老齡組人群的基數(shù)不夠，不具有代表性意義。

對(duì)不同臨床表現(xiàn)進(jìn)行分析可得,呼吸道病原體IgM抗體陽(yáng)性率前三的臨床診斷為上呼吸道感染、肺炎、支氣管炎,抗體陽(yáng)性率分別為43.07%、37.83%、31.52%，故呼吸道病原體的感染是呼吸道疾病的高危因素。其中，對(duì)陽(yáng)性患者的呼吸道病原體進(jìn)行分類(lèi),以肺炎支原體(MP)和乙型流感病毒（INFB）為主。肺炎支原體，其大小介于細(xì)菌和病毒之間,是引起呼吸道感染的常見(jiàn)微生物[9]，乙型流感病毒為RNA病毒，容易發(fā)生變異，人群普遍對(duì)其缺乏免疫力，因此容易引起大流行[10],上述二者傳播途徑均是空氣飛沫傳播。故遠(yuǎn)離人群密集區(qū)域，保持空氣流暢，對(duì)預(yù)防呼吸道病原體有積極地意義。

綜上可知,對(duì)呼吸道病原體的流行時(shí)間與易感人群的年齡段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,可為呼吸道病原體的治療提供參考性依據(jù)。采用九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒,對(duì)呼吸道感染的患者進(jìn)行檢測(cè)，有助于明確感染類(lèi)型,為患者明確用藥方向，對(duì)患者的治療與康復(fù)有著積極的意義。