嬰幼兒急性下呼吸道感染外周血炎癥細(xì)胞因子水平表達(dá)及臨床意義

張戰(zhàn)軍

（河南省洛陽市婦女兒童醫(yī)療保健中心檢驗(yàn)科，河南 洛陽471023）

喘息癥狀在學(xué)齡前兒童中較為常見,但多數(shù)患兒喘息癥狀持續(xù)時(shí)間較短，未發(fā)展成為哮喘，但仍有25%以上患兒的喘息癥狀會在緩解后復(fù)發(fā)或持續(xù)至成人期[1]。呼吸道感染是嬰幼兒時(shí)期喘息的重要危險(xiǎn)因素之一,會對兒童的生長發(fā)育及健康造成嚴(yán)重的影響,是發(fā)展中國家兒童死亡的最常見因素，其以急性呼吸道感染最為常見，在兒科門診中約占60%以上[2]。與非過敏性體質(zhì)嬰幼兒相比，嬰幼兒期反復(fù)哮喘和特應(yīng)性體質(zhì)患兒發(fā)生哮喘的幾率更大。大量研究顯示，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）能維持外周免疫耐受,其包括外周誘導(dǎo)的實(shí)用性T細(xì)胞（iTreg）和胸腺產(chǎn)生的自然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（nTreg），兩者與炎癥的控制和過敏有關(guān)[3]。慢性過敏性哮喘的發(fā)生與不恰當(dāng)?shù)拿庖呦到y(tǒng)活化有關(guān),也可能與內(nèi)源性的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制異常有關(guān)[4]。過敏性哮喘患兒伴有Treg功能或數(shù)量不足。IL-10能抑制T細(xì)胞的分泌與增殖，為重要的抑制性細(xì)胞因子，對自身抗原、過敏原、腫瘤抗原和移植物抗原的免疫耐受的建立均發(fā)揮重要的作用[5]。本研究通過分析嬰幼兒LRTI和健康兒外周血中的IL-10和CD4+CD25+FoxP3+Treg水平,探討嬰幼兒LRTI外周血炎癥細(xì)胞因子水平表達(dá)及臨床意義,旨在為臨床治療提供指導(dǎo)意見。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 入組前3周未接受口服或靜脈、吸入糖皮質(zhì)激素以及其他免疫抑制劑,入院后未接受心電監(jiān)護(hù)以及吸氧等相關(guān)治療；無長期服藥史；30d內(nèi)無急性感染史;無過敏性疾病和哮喘性疾病;受檢者家屬均對本研究知情，并簽署知情同意書。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 支氣管異物、肺結(jié)核、慢性呼吸道感染、反復(fù)呼吸道感染、中重度營養(yǎng)不良、先天性心臟病、心腎功能不全、先天性胃腸道畸形、免疫缺陷、手足口病者；父母存在吸煙史。

1.2 一般資料 選擇2015年2月至2017年8月期間在我院接受治療的80例LRTI患兒為觀察組。符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》[6]中關(guān)于LRTI的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男58例，女22例；年齡8～14個月，平均年齡（11.02±0.27）個月；按有無特應(yīng)性皮炎史分為無特應(yīng)性皮炎史組（n=38）、有特應(yīng)性皮炎史組（n=42）；按是否存在喘息分為喘息組（n=48）、非喘息患兒組（n=32）。另選擇同期在我院行健康體檢的80例嬰幼兒為對照組，其中男56例，女 24 例；年齡 8～14 個月,平均年齡（11.04±0.30）個月。本研究經(jīng)我院倫理委員會審核批準(zhǔn)。對照組和觀察組的性別、年齡經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.122、t=0.853，P=0.727、0.396），具有可對比性。

1.3 方法 采集兩組受檢者兩份3ml外周靜脈血，將其置入EDTA抗凝管中,其中一份在室溫下2h內(nèi)以血細(xì)胞分析儀流式細(xì)胞技術(shù)半導(dǎo)體激光法測定嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞比例，儀器：全自動XE-2000i(日本SYSMEX公司)。另一份取出1 ml,1500r/min離心3min，取上清液，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定IL-10,儀器:美國Becton Dic-kinson（BD）公司的全自動血生儀（BACTEC9050）。 剩下2ml外周靜脈血用于檢測調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，即CD4+CD25+FoxP3+Treg,儀器：BD-CALIBUR流式細(xì)胞分析儀（美國BD公司）。

1.4 評價(jià)指標(biāo) 比較各組受檢者嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞比例、IL-10以及CD4+CD25+FoxP3+Treg水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)和例數(shù)表示，組間比較采用 χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組與觀察組比較 與對照組相比，觀察組嗜堿性粒細(xì)胞、IL-10、CD4+CD25+FoxP3+Treg 水平較高，嗜酸性粒細(xì)胞比例較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 對照組和觀察組各項(xiàng)檢查結(jié)果比較（x±s）

2.2 有、無特應(yīng)性皮炎史組比較 無特應(yīng)性皮炎史組嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、IL-10水平與有特應(yīng)性皮炎史組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;無特應(yīng)性皮炎史組CD4+CD25+FoxP3+Treg水平與有特應(yīng)性皮炎史組相比較高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 2。

表2 有、無特應(yīng)性皮炎史患兒各項(xiàng)檢查結(jié)果比較（x±s）

2.3 喘息與非喘息組比較 喘息組嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+Treg水平與非喘息組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；喘息組IL-10水平與非喘息組相比較低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 3。

表3 喘息和非喘息患兒各項(xiàng)檢查結(jié)果比較（x±s）

3 討論

下呼吸道感染主要以病毒感染為主,氣道上皮細(xì)胞會受病毒的毒性作用而受損,使黏膜下的膽堿神經(jīng)纖維在化學(xué)或物理的刺激物下暴露和過敏源會導(dǎo)致抗原的通透性增加,使氣道上皮細(xì)胞分泌NO減少；病毒會損傷氣道上皮細(xì)胞，產(chǎn)生P物質(zhì)，誘導(dǎo)氣管收縮；P物質(zhì)還能增加血管通透性,趨化嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等白細(xì)胞在炎癥部位定植[7-10]。本研究中，與對照組相比，觀察組嗜酸性粒細(xì)胞比例較低,分析原因可能是因外周血嗜酸性粒細(xì)胞參與宿主抗病毒防御有關(guān)。嗜酸性粒細(xì)胞能趨化靶器官，清除病原微生物，是機(jī)體對疾病防御的重要組成部分[11,12]。在循環(huán)外周血中嗜堿性粒細(xì)胞所占比例較小，能通過“脫顆?！毕蛲庵茚尫怕磻?yīng)物質(zhì)、組織胺、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子等活性因子，對嗜酸性粒細(xì)胞可起到促進(jìn)作用，使其在局部聚集，在IgE介導(dǎo)的慢性過敏性疾病中起到起始作用[13,14]。本研究中，與對照組相比，觀察組嗜堿性粒細(xì)胞比例較高，可能是因LRTI患兒在感染炎癥反應(yīng)時(shí)，會使嗜堿性粒細(xì)胞增加，促使其進(jìn)入靶部位，清除病原體功能。

Treg因起源不同分為iTreg和nTreg，前者在維持黏膜免疫耐受中發(fā)揮重要的作用,后者能提高所有免疫反應(yīng)的閥值和避免發(fā)生自身免疫性疾病[15]。 CD4+CD25+FoxP3+Treg包括 CD4+CD25+FoxP3+iTreg和CD4+CD25+FoxP3+nTreg,作用方式為以下幾點(diǎn)：⑴對抗原提呈細(xì)胞發(fā)揮抑制作用，間接發(fā)揮免疫抑制作用；⑵能經(jīng)分泌抑制性細(xì)胞因子發(fā)揮功能,包括 IL-25、β-轉(zhuǎn)化生長因子、IL-10 等;⑶可經(jīng)競爭生長因子(IL-7、IL-4、IL-2等)以及通過細(xì)胞-細(xì)胞間接觸分泌穿孔素/顆粒酶，誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡而發(fā)揮作用[16,17]。本研究中,觀察組CD4+CD25+Fox P3+Treg水平均高于對照組。當(dāng)嬰幼兒感染后，微生物（病毒和細(xì)菌等）會侵入系呼吸道，樹突狀細(xì)胞會穿過氣道黏膜表皮細(xì)胞間的緊密連接攝取相應(yīng)抗原，隨后遷移，在此過程中會減弱攝取抗原的能力，并逐漸增強(qiáng)抗原提呈能力，增加其表面的MHCⅡ類分子、粘附分子、共刺激分子的表達(dá)，攝取抗原的樹突狀細(xì)胞到引流淋巴結(jié)后,會誘導(dǎo)CD4+CD2 5+FoxP3+iTreg和相應(yīng)效應(yīng)T細(xì)胞的產(chǎn)生[18]。IL-10為抑制性細(xì)胞因子，其產(chǎn)生與炎癥消失有關(guān),其具有以下幾點(diǎn)功能：⑴對肥大細(xì)胞的“脫顆?！逼鸬揭种谱饔茫虎谱璧KICOS、CD28、CD2的信號通路；⑶對樹突狀細(xì)胞成熟起到抑制作用；⑷降低單核細(xì)胞表面的共刺激分子和MHCⅡ類分子以及樹突狀細(xì)胞的表達(dá)；⑸誘導(dǎo)IgA和IgG4的產(chǎn)生，抑制IgE產(chǎn)生等。本研究中，觀察組IL-10水平高于對照組,這可能與下呼吸道受病毒感染后會使機(jī)體對入侵微生物清除是的免疫炎癥反應(yīng)減輕，損傷機(jī)體有關(guān)。

本研究中,無特應(yīng)性皮炎史組和有特應(yīng)性皮炎史組嗜堿性粒細(xì)胞、IL-10、嗜酸性粒細(xì)胞水平無顯著差異;無特應(yīng)性皮炎史組CD4+CD25+FoxP3+Treg水平與有特應(yīng)性皮炎史組相比較高。過敏性疾?。ㄌ貞?yīng)性皮炎等）體質(zhì)與CD4+CD25+FoxP3+Treg生成缺陷可能存在相關(guān)性。喘息組嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+Treg水平與非喘息組比較無明顯差異，而喘息組IL-10水平與非喘息組相比較低。分析原因可能與以下兩點(diǎn)有關(guān)：⑴下呼吸道感染時(shí)，會使體內(nèi)IL-10水平增加，使小氣道中抗病毒免疫能力降低。IL-10能抑制氣道中巨噬細(xì)胞抗原提呈功能,對上呼吸道感染病毒入侵下呼吸道可起到促進(jìn)作用,易引起氣道高反應(yīng)性和喘息[19]。⑵IL-10能經(jīng)拮抗IL-12提高Th2細(xì)胞、抑制Th1細(xì)胞，引起過敏性氣道疾病[20]。

綜上所述，嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞、IL-10以及CD4+CD25+FoxP3+Treg均參與了嬰幼兒LRTI的發(fā)病機(jī)制;患兒外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg水平較高是機(jī)體免疫防御的重要表現(xiàn),而IL-10水平升高則表示患兒可能伴有喘息,可將兩者作為嬰幼兒LRTI治療的靶點(diǎn)。