復(fù)合益生菌對(duì)生長(zhǎng)期湖羊生長(zhǎng)性能、養(yǎng)分表觀消化率和血液生化指標(biāo)的影響

何韻秋，劉 程，陸琴月，葉均安，徐寧寧*

（1.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310058；2.嘉興匯欣農(nóng)業(yè)有限公司，浙江嘉興 314300）

草畜轉(zhuǎn)型政策促進(jìn)了我國(guó)肉羊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，消費(fèi)升級(jí)引起的羊肉供給缺口，大量研究集中于肉羊的快速育肥[1]。顆粒化全混合日糧（Pelleted Total Mixed Ration，PTMR）的推廣應(yīng)用可顯著提高肉羊生長(zhǎng)性能，減少人工和儲(chǔ)存成本；但是PTMR 降低了瘤胃pH[2]，增加瘤胃酸中毒的風(fēng)險(xiǎn)，影響動(dòng)物酸堿平衡[3]。瘤胃是反芻動(dòng)物主要的消化器官，絕大多數(shù)的碳水化合物和蛋白質(zhì)在瘤胃中被降解，尤其是淀粉等精料物質(zhì)快速降解引起瘤胃pH 迅速降低，導(dǎo)致瘤胃功能紊亂[4]，進(jìn)而影響動(dòng)物健康和生長(zhǎng)性能。反芻動(dòng)物采食粗飼料，尤其是物理有效性纖維（Physically Effective Neutral Detergent Fiber，peNDF）對(duì)于穩(wěn)定瘤胃pH、維持正常功能具有重要作用。但是PTMR 中缺少peNDF 的刺激，因此在PTMR 推廣應(yīng)用中，如何在缺失peNDF 條件下維持瘤胃穩(wěn)態(tài)和動(dòng)物健康成為研究熱點(diǎn)。益生菌能夠改善瘤胃微生態(tài)平衡[5]，抑制宿主腸道病原微生物的增殖[6]，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率，并且作為飼料添加劑對(duì)各類動(dòng)物具有顯著促生長(zhǎng)作用[7]。目前為止，尚未有探究PTMR 中添加益生菌對(duì)肉羊生長(zhǎng)性能的影響報(bào)道。本試驗(yàn)旨在探究復(fù)合益生菌不同添加量對(duì)生長(zhǎng)期湖羊生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率及血液生化指標(biāo)的影響，為優(yōu)化PTMR 應(yīng)用提供新的數(shù)據(jù)支撐和實(shí)踐參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇體重（18.1±1.8）kg 的生長(zhǎng)期公湖羊60 只，隨機(jī)分成4 組，每組15 只，分別飼喂含有0、1、2、3 g/kg（干物質(zhì)計(jì)算）復(fù)合益生菌的PTMR，其中0 g/kg組為對(duì)照組。復(fù)合益生菌由浙江大學(xué)研制，為灰褐色粉狀物，主要包含地衣芽孢桿菌（≥2.0×109CFU/g）、枯草芽孢桿菌（≥2.0×109CFU/g）和米曲霉（≥2.0×104CFU/g）。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)于2018 年10 月—12 月在嘉興匯欣農(nóng)業(yè)有限公司進(jìn)行，預(yù)試期7 d，正試期45 d。預(yù)試期每天每只湖羊定量飼喂顆粒料700 g，正試期各組湖羊自由采食和飲水。顆粒飼料由浙江科盛飼料股份有限公司加工，PTMR 組成和營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

1.3 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能 試驗(yàn)開始前連續(xù)2 d 空腹稱重，作為初始體重；試驗(yàn)結(jié)束時(shí)連續(xù)2 d 空腹稱重，計(jì)算平均日增重（Average Daily Gain，ADG）。記錄試驗(yàn)期間各組湖羊顆粒料采食量，計(jì)算平均采食量（Average Daily Feed Intake，ADFI）。試驗(yàn)期湖羊ADFI 與ADG 的比值為耗料增重比（F/G）。

表1 生長(zhǎng)期湖羊PTMR 飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3.2 表觀消化率 試驗(yàn)結(jié)束前5 d 連續(xù)收集全部糞樣，記錄重量。每天混勻后采集500 g 糞樣，65℃烘干后40目篩粉碎。日糧和糞樣的干物質(zhì)（Dry Matter，DM）和粗蛋白質(zhì)（Crude Protein，CP）參考張麗英[8]方法測(cè)定，中性洗滌纖維（Neutral Detergent Fiber，NDF）和酸性洗滌纖維（Acid Detergent Fiber，ADF）按Van Soest等[9]的方法測(cè)定。

養(yǎng)分表觀消化率=[（攝入養(yǎng)分量－排出養(yǎng)分量）/攝入養(yǎng)分量]×100%

1.3.3 血液生化指標(biāo) 試驗(yàn)期最后一天，每組選取8 只試驗(yàn)羊，晨飼前采集頸靜脈血液5 mL，3 000×g 離心15 min 制備血清，并于-20℃保存。采用全自動(dòng)生化儀測(cè)定總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLOB）、血清尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、肌酐（CREA）、堿性磷酸酶（ALP）和超氧化物歧化酶（SOD），生化試劑盒購(gòu)置于中山標(biāo)佳生物科技有限公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel 2013 初步整理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，用SAS 軟件（9.0）中Proc Mixed 模型進(jìn)行方差分析，Tukey 進(jìn)行多重比較，以P＜0.05 代表差異顯著，P＜0.01 代表差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合益生菌對(duì)湖羊生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，ADG 和F/G 隨復(fù)合益生菌添加量的提高呈二次性變化趨勢(shì)（P＜0.01）。1 g/kg 和 2 g/kg 組 ADG 比對(duì)照組和3 g/kg 組高出約10%（P＜0.05），而F/G 顯著低于對(duì)照組和3 g/kg 組，飼料轉(zhuǎn)化效率顯著提高；1 g/kg 和2 g/kg 組ADG 和 F/G 無差異，3 g/kg 組與對(duì)照組 ADG 和 F/G無差異。

2.2 復(fù)合益生菌對(duì)湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 由表3可知，DM 和CP 表觀消化率隨復(fù)合益生菌添加量呈二次性變化趨勢(shì)（P＜0.01）。1 g/kg 組DM 表觀消化率高于對(duì)照組（P＜0.05），3 g/kg 組低于對(duì)照組（P＜0.05）；2 g/kg 組CP 表觀消化率高于對(duì)照組（P＜0.05），但1 g/kg 和3 g/kg 組與對(duì)照組無差異。復(fù)合益生菌添加量對(duì)NDF 和ADF 消化率無影響。

2.3 復(fù)合益生菌對(duì)湖羊血液生化指標(biāo)的影響 由表4 可知，TP、GLOB 和A/G 隨復(fù)合益生菌添加量提高呈二次性變化趨勢(shì)（P＜0.01）。1 g/kg 組 TP 和 GLOB 濃度顯著高于其余各組，且2 g/kg 和3 g/kg 組TP 和GLOB濃度無差異。白蛋白與球蛋白比值（A/G）在1 g/kg組最低（P＜0.05），表明機(jī)體免疫功能提高。1 g/kg組 BUN 含量顯著高于 3 g/kg 組（P＜0.05），而血清ALB、GLU、CREA、ALP 和SOD 含量不受復(fù)合益生菌添加量的影響。

表2 不同添加量復(fù)合益生菌對(duì)湖羊生長(zhǎng)性能的影響

表3 不同添加量復(fù)合益生菌對(duì)湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 %

表4 不同添加量復(fù)合益生菌對(duì)湖羊血液生化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 不同劑量復(fù)合益生菌對(duì)湖羊生長(zhǎng)性能的影響 益生菌的作用原理在于調(diào)控瘤胃內(nèi)環(huán)境，提高飼料瘤胃降解率。楊華等[10]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)日糧中添加0.5 g/kg 和1 g/kg 分離自羊瘤胃液的芽孢桿菌和雙歧桿菌顯著提高了肉羊ADG，降低F/G。吳家泉等[11]研究發(fā)現(xiàn)酵母菌、乳酸菌和枯草芽胞桿菌組成的微生態(tài)制劑顯著提高了肉羊ADFI 和ADG，提高飼料轉(zhuǎn)化率。但Rodríguez 等[12]研究發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌制成的復(fù)合菌對(duì)羊只體重沒有影響。因此復(fù)合益生菌對(duì)肉羊生長(zhǎng)性能的改變受到復(fù)合益生菌菌種和添加劑量的影響，其原因可能是不同益生菌之間存在協(xié)同或者拮抗作用。Zerby等[13]研究發(fā)現(xiàn)在干物質(zhì)采食量相同的情況下，日糧添加米曲霉培養(yǎng)物提高了肉羊ADG。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在PTMR 日糧中添加1 g/kg 和2 g/kg 的芽孢桿菌和米曲霉益生菌復(fù)合菌顯著提高ADG 和飼料轉(zhuǎn)化率，但是3 g/kg 復(fù)合益生菌添加組與對(duì)照組無顯著差異，表明復(fù)合益生菌對(duì)湖羊生長(zhǎng)性能的影響存在明顯的劑量相關(guān)性。3 g/kg 組飼料轉(zhuǎn)化效率和ADG 均與對(duì)照組無差異，可能原因是該復(fù)合益生菌添加量過高，反而造成養(yǎng)分降解率降低[14]，最終引起ADG 降低，故生長(zhǎng)期湖羊PTMR 日糧中芽孢桿菌和米曲霉復(fù)合菌的適宜添加量為1～2 g/kg。

3.2 不同劑量復(fù)合益生菌對(duì)湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響益生菌能夠調(diào)節(jié)瘤胃發(fā)酵，并且有些益生菌還能夠分泌外源降解酶，促進(jìn)日糧瘤胃降解。芽孢桿菌是反芻動(dòng)物生產(chǎn)中常用的益生菌，能夠產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶、磷脂酶，促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的降解[7]。米曲霉培養(yǎng)物在有效促進(jìn)瘤胃細(xì)菌生長(zhǎng)的基礎(chǔ)上，還能促進(jìn)真菌生長(zhǎng)，提高纖維素酶、木聚糖酶、羧甲基纖維素酶和淀粉酶的活性，促進(jìn)瘤胃發(fā)酵、揮發(fā)性脂肪酸形成和微生物蛋白合成[15]。肖怡等[16]研究表明，地衣芽孢桿菌可顯著提高45 kg 的杜× 寒雜交成年羯羊DM、NDF 和CP 表觀消化率，但Rodríguez 等[12]試驗(yàn)表明地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌制成的復(fù)合菌對(duì)羊的DM 及CP 消化率沒有影響，對(duì)NDF 消化率有提高的趨勢(shì)。添加米曲霉能夠提高瘤胃體外DM、CP、NDF 消化率，米曲霉添加量≥1.2×106CFU/mL 時(shí)達(dá)到顯著效果[17]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PTMR 中添加復(fù)合益生菌提高了DM 和CP 降解率，但是對(duì)NDF 消化率無影響，可能原因是本試驗(yàn)所用菌種不同，另一方面顆粒飼料中長(zhǎng)纖維含量較低，益生菌提高NDF 消化率的作用效果可能受限，有待進(jìn)一步研究。

3.3 不同劑量復(fù)合益生菌對(duì)湖羊血液生化指標(biāo)的影響芽孢桿菌屬于好氧或兼性厭氧菌，進(jìn)入腸道后會(huì)迅速消耗氧氣，營(yíng)造腸道厭氧環(huán)境，抑制有害菌生長(zhǎng)，而且芽孢代謝產(chǎn)物中含有多肽類抗菌物質(zhì)，能顯著抑制病原菌的生長(zhǎng)，因此芽孢桿菌具有很好的提高動(dòng)物免疫力、抗氧化功效[18]。Antunovic 等[19]研究發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌制成的復(fù)合菌降低了血清甘油三酯濃度以及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和肌酸激酶的活性，提高了GLU 和ALP 含量，促進(jìn)了羔羊代謝活動(dòng)。本研究發(fā)現(xiàn)，1 g/kg 的復(fù)合益生菌添加量顯著提高了血清TP、GLOB 濃度，降低A/G，提高生長(zhǎng)期湖羊免疫能力，與Hussein 等[20]研究結(jié)果相同。但大部分試驗(yàn)表明，益生菌對(duì)血液生化指標(biāo)沒有影響[21]。張志軍等[22]發(fā)現(xiàn)復(fù)合益生菌提高了哈薩克綿羊血清GLOB 濃度，但是對(duì)TP 濃度無顯著影響。添加益生菌可以增強(qiáng)瘤胃細(xì)菌的活性，從而提高氮的利用效率，降低BUN 濃度[23]，但是本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1 g/kg 復(fù)合益生菌組血清BUN 濃度顯著高于3 g/kg 復(fù)合益生菌添加組，其余各組間無顯著差異，間接表明益生菌對(duì)瘤胃微生物活性的影響存在明顯的劑量效應(yīng)。ALP 是反映肝功能的重要指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)添加復(fù)合益生菌對(duì)血清ALP 濃度無影響，表明復(fù)合益生菌對(duì)生長(zhǎng)期湖羊肝功能無影響。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，生長(zhǎng)期湖羊PTMR 中復(fù)合益生菌的適宜添加量為1 g/kg，可顯著提高生長(zhǎng)期湖羊ADG，顯著提高DM 和CP 降解率，降低F/G，提高飼料轉(zhuǎn)化效率；提高血清TP 和GLOB 濃度，降低A/G，增強(qiáng)生長(zhǎng)期湖羊的抗病力。