基于靶向代謝組學(xué)的腹膜透析脾腎氣虛證和氣陰兩虛證患者血清氨基酸水平探究*

夏 麗 黃益麒 沈偉鋼

紹興第二醫(yī)院 浙江 紹興 312000

終末期腎病（ESRD）是由于原發(fā)或繼發(fā)性病因引起的終末性腎臟疾病。腹膜透析（PD）能較好地保護(hù)ESRD患者殘余腎功能，已經(jīng)成為我國(guó)治療ESRD首選方式。本研究選擇PD脾腎氣虛證及氣陰兩虛證患者，通過比較兩者之間氨基酸代謝物表達(dá)的差異性，以期為中醫(yī)臨床辨證提供依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料：收集2018年1～12月在紹興第二醫(yī)院腎病中心治療的PD患者84例，將其分為脾腎氣虛組51例和氣陰兩虛組33例。脾腎氣虛組中男29例，女22例；平均年齡59.37±8.29歲；平均病程4.38±1.81年。氣陰兩虛組中男13例，女20例；平均年齡61.22±11.28歲；平均病程3.92±1.52年。兩組性別、年齡、病程比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究通過紹興第二醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有入選研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)：①脾腎氣虛證：主癥：腰膝酸軟，倦怠乏力，浮腫難消，納呆腹脹。次癥：畏寒喜暖，夜尿清長(zhǎng)，大便稀溏。舌：淡紫。脈：細(xì)澀，沉遲。②氣陰兩虛證：主癥：畏寒肢冷，冷喜熱飲或泛吐清水，腰膝冷痛，大便溏泄或五更泄。次癥：面色?白或黧黑，發(fā)脫齒搖，性功能減退明顯，夜尿頻多或小便清長(zhǎng)。舌：胖嫩有齒印。脈：沉細(xì)或沉弱。以上證型診斷需具備主癥二項(xiàng)，或主癥一項(xiàng)、次癥二項(xiàng)即可[1]。

1.3 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)：納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②無血液透析或移植史；③腹膜透析時(shí)間≥3個(gè)月；④自愿參加試驗(yàn)并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①視力及聽力障礙或無法正常交流的患者；②有嚴(yán)重的心腦血管事件發(fā)生，如急性心肌梗死、腦出血等；③急性腹膜炎患者；④拒絕中藥治療的患者。

1.4 方法：分述如下。

1.4.1 一般資料收集：包括性別、年齡、病程、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）。血液生化指標(biāo)：血紅蛋白（Hb）、紅細(xì)胞分布寬度（RDW）、血白蛋白（Alb）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、血鈣、血磷、肌酐（SCr）、尿酸（UA）、全段甲狀旁腺素（iPTH）等。

1.4.2 氨基酸檢測(cè)：取空腹靜脈血5ml，3000r/min離心10min。吸取上清液置入EP管，放入－20℃冰箱儲(chǔ)存待測(cè)。參考2013版美國(guó)FDA《生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》利用超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLCMS/MS）平臺(tái)測(cè)定血清氨基酸。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布的計(jì)量資料采用±s表示，非正態(tài)分布的計(jì)量資料用M（1/4，3/4）表示。正態(tài)分布且方差齊的計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，正態(tài)分布而方差不齊的計(jì)量資料用校正的t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的計(jì)量資料用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組腹膜透析患者臨床參數(shù)比較：具體見表1～2。

表1 兩組腹膜透析患者臨床參數(shù)比較（±s）

表1 兩組腹膜透析患者臨床參數(shù)比較（±s）

注：與氣陰兩虛組比較，*P＜0.05。

組別脾腎氣虛組氣陰兩虛組病程（年）4.38±1.81 3.92±1.52 Alb（g/L）32.7±1.1*26.3±1.4例數(shù)51 33年齡（歲）59.37±8.29 61.22±11.28性別（男/女）29/22 13/20 BMI（kg/m2）24.27±3.44 22.33±3.62 Hb（g/L）88.3±8.9*72.1±12.1 RDW（%）12.9±2.1*14.3±1.2

表2 兩組腹膜透析患者臨床參數(shù)比較（±s）

表2 兩組腹膜透析患者臨床參數(shù)比較（±s）

注：與氣陰兩虛組比較，*P＜0.05。

組別脾腎氣虛組氣陰兩虛組UA（mmol/L）388.92±47.32 362.78±50.92例數(shù)51 33 TG（mmol/L）1.29±0.26 1.31±0.32 TC（mmol/L）5.64±1.32 6.17±1.21鈣（mmol/L）2.35±0.22*1.87±0.31磷（mmol/L）1.68±0.42 1.82±0.36 iPTH（ng/L）345.8±117.4 297.6±93.5 SCr（μmol/L）689.54±97.68 811.65±132.85

2.2 兩組腹膜透析患者血清氨基酸譜差異比較：具體見表3。

表3 兩組腹膜透析患者血清氨基酸譜差異比較（±s）

表3 兩組腹膜透析患者血清氨基酸譜差異比較（±s）

注：與氣陰兩虛組比較，*P＜0.05。

氨基酸丙氨酸甘氨酸谷氨酸谷氨酰胺精氨酸賴氨酸絲氨酸蘇氨酸天冬氨酸纈氨酸異亮氨酸組氨酸脾腎氣虛組343.20±104.34*263.07±67.96*302.75±81.15*526.47±114.28 116.54±17.46 261.09±67.23*138.22±22.17 114.37±19.98 58.70± 8.94 225.00±62.27 63.86± 4.25 76.82± 4.97氣陰兩虛組443.43±97.36 152.12±46.05 219.20±76.63 492.19±134.29 131.04±11.89 140.94±45.07 166.59±29.32 158.19±25.33 73.58± 9.11 258.14±69.90 91.12±10.11 123.44± 8.15

3 討論

中醫(yī)方證代謝組學(xué)研究技術(shù)通常先進(jìn)行疾病的中醫(yī)辨證，采集證候樣本進(jìn)行代謝產(chǎn)物譜分析，篩選差異標(biāo)記物，建立中醫(yī)證型與生物標(biāo)記物群的相關(guān)模型[2]。

本研究結(jié)果顯示，與脾腎氣虛組比較，氣陰兩虛組血紅蛋白、白蛋白、血鈣水平較低。根據(jù)中醫(yī)學(xué)證型演變規(guī)律，脾腎氣虛證可發(fā)展為氣陰兩虛證，故脾腎氣虛組患者的病情往往較氣陰兩虛組稍輕。血紅蛋白及白蛋白、血鈣水平在臨床上常常用來評(píng)判營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)。與脾腎氣虛組比較，氣陰兩虛組的紅細(xì)胞分布寬度數(shù)值較高。我們推測(cè)紅細(xì)胞分布寬度增大可能與腹膜透析氣陰兩虛組患者病情較重、體內(nèi)尿毒癥毒素未及時(shí)清除導(dǎo)致紅細(xì)胞生成障礙有關(guān)[3]。

本研究借鑒中醫(yī)方證代謝組學(xué)研究技術(shù)，發(fā)掘了甘氨酸、谷氨酸、賴氨酸、丙氨酸等4種差異氨基酸。其中賴氨酸是機(jī)體蛋白質(zhì)合成的重要原料，本研究中氣陰兩虛組的賴氨酸水平低于脾腎氣虛組，其白蛋白水平亦低于脾腎氣虛組。我們推測(cè)可能是體內(nèi)較低的賴氨酸水平會(huì)限制血清白蛋白生成[4]。丙氨酸是主要的能量來源。葡萄糖經(jīng)糖酵解轉(zhuǎn)化為丙酮酸，后通過轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)生成丙氨酸。本研究中，氣陰兩虛組患者血漿中丙氨酸含量增多，提示機(jī)體微炎癥狀態(tài)下需要更多能量代謝維持生命活動(dòng)[5]，導(dǎo)致氣陰兩虛組存在蛋白質(zhì)氨基酸的吸收紊亂。谷氨酸和甘氨酸均在氧化-抗氧化過程中起著重要作用，可通過多種途徑降低氧化應(yīng)激反應(yīng)[6]。氣陰兩虛組患者血漿中谷氨酸、甘氨酸水平低于脾腎氣虛組，提示可能存在氨基酸代謝、氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，炎癥反應(yīng)劇烈等，提示病情較重。體內(nèi)氨基酸異常升高的狀態(tài)屬于中醫(yī)學(xué)“痰濁”“血瘀”范疇。腹膜透析輕者脾腎虧虛，氣化失司，津液輸布無力，痰濁阻滯血?dú)膺\(yùn)行，從而引起血瘀；重者氣陰兩虛，陰虛則內(nèi)盛，虛火灼津?yàn)樘?，血瘀阻滯，痰瘀互結(jié)，導(dǎo)致體內(nèi)氨基酸異常升高。