血清miR-372在鼻咽癌患者中的診斷和預(yù)后價值研究

毛長海 董國菊

[摘要]目的研究血清miR-372在鼻咽癌患者中的診斷和預(yù)后價值。方法選取116例鼻咽癌患者作為鼻咽癌組，另選同期58例健康志愿者作為健康對照組。采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）檢測兩組研究對象血清中miR-372的表達水平，并進行比較;分析miR-372表達水平與患者臨床病理特征之間的關(guān)系;建立受試者工作特征曲線（ROC）評估m(xù)iR-372的診斷價值;通過Kaplan-Meier（KM）生存曲線和Cox回歸分析評估m(xù)iR-372的預(yù)后價值。結(jié)果qRT-PCR檢測結(jié)果表明，血清miR-372在鼻咽癌組患者中的表達水平（2.130±0.786）顯著低于健康對照組的（3.852±1.114），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=11.794，P<0.01）。ROC曲線表明，曲線下面積（AUC）為0.888，說明miR-372具有較高的診斷鼻咽癌的能力;診斷截斷值為3.135，靈敏度為87.1%，特異度為77.6%。Kaplan-Meier生存曲線表明，miR-372低表達與患者低生存率顯著相關(guān)（log-rankP=0.012）。Cox回歸分析證明miR-372是鼻咽癌患者的獨立預(yù)后因子[HR=2.191，95%CI=（1.027，4.671），P=0.042<0.05]。結(jié)論鼻咽癌患者血清中miR-372的表達水平降低，是一個潛在的診斷和預(yù)后生物標志物，有望改善鼻咽癌患者的臨床診斷和預(yù)后。

[關(guān)鍵詞]miR-372;診斷;預(yù)后;鼻咽癌

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.05.006

鼻咽癌（nasopharyngeal?carcinoma）是一種發(fā)生于鼻咽黏膜上皮的惡性腫瘤，在中國的發(fā)病率較高，已成為困擾我國的一大健康難題[1]。目前對于鼻咽癌的研究證明，早期診斷對疾病的治療具有重要意義，因此探尋有效的診斷方法有助于癌癥患者的篩選。盡管人們已經(jīng)研究出多種治療腫瘤疾病的手段，但鼻咽癌患者總生存率以及預(yù)后情況并不理想。如何進一步改善鼻咽癌的診斷和預(yù)后，是治療此疾病的研究重點之一。已有研究表明，微小RNAs（microRNAs，miRNAs）可以調(diào)控細胞多種生物學(xué)過程，其在腫瘤中的異常表達可能參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程，具有較高診斷和預(yù)后的臨床意義[2]，miR-372在結(jié)直腸癌、前列腺癌等多種癌癥中均有相關(guān)報道[3，4]，但其表達水平在鼻咽癌中的臨床意義尚不清楚。因此本研究旨在評估血清miR-372在鼻咽癌患者中的診斷及預(yù)后價值，為其在臨床上應(yīng)用作好基礎(chǔ)性研究?，F(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2010年3月～2013年2月壽光市第三人民醫(yī)院收治的116例鼻咽癌患者作為鼻咽癌組，所有患者均經(jīng)病理組織檢查證實為鼻咽癌。其中男72例，女44例，平均年齡（66.1±8.9）歲。此外，本研究另選同期58例健康志愿者作為健康對照組，所有志愿者均無惡性腫瘤史。收集參試者血液樣品，離心法獲得血清樣本，保持于-809C備用。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，所有參與者均簽署了知情同意書。癌癥患者行腫瘤切除術(shù)后，均接受了為期5年的隨訪，對患者的生存情況及臨床病理資料進行記錄。

1.2方法總RNA提取和qRT-PCR使用TRIzol試劑（美國Invitrogen公司）提取血清樣本中的總RNA，用反轉(zhuǎn)錄試劑盒Transeriptor First?Strand?eDNA Symthesis?Kit（美國Qiagen公司），將RNA反轉(zhuǎn)錄為單鏈cDNA。采用SYBR green?I Master?Mix試劑盒（美國Invitrogen公司）在7300Real-TimePCR系統(tǒng)（美國Applied?Biosystems公司）上，進行qRT-PCR反應(yīng)。其中，U6作為反應(yīng)內(nèi)參基因使用，miR-372的最終相對表達量采用2-44C方法進行計算。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，采用x2檢驗;建立ROC曲線評估m(xù)iR-372的診斷價值，用Kaplan-Meier方法和Cox回歸分析

評估m(xù)iR-372的預(yù)后價值。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果

2.1血清miR-372在鼻咽癌患者中的表達水平qRT-PCR檢測結(jié)果表明，血清miR-372在鼻咽癌組患者中的表達水平（2.130±0.786）顯著低于健康對照組的（3.852±1.114），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=11.794，P<0.01）。見圖1。

2.2miR-372表達量與患者臨床病理特征之間的關(guān)系將患者以miR-372表達量均值為截斷值，分為miR-372低表達組（66例）和miR-372高表達組（50例）。兩組患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度以及TNM分期比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;兩組患者年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義.（P>0.05）。見表1。

2.3血清miR-372表達量在鼻咽癌患者中的診斷和預(yù)后價值ROC曲線表明，AUC為0.888，說明miR-372具有較高的診斷鼻咽癌的能力。診斷截斷值為3.135，靈敏度為87.1%，特異度為77.6%。見圖2A。Kaplan-Meier生存曲線表明，miR-372低表達與患者低生存率顯著相關(guān)（log-rankP=0.012）。見圖2B。Cox回歸分析證明miR-372是鼻咽癌患者的獨立預(yù)后因子[HR=2.191，95%CI=（1.027，4.671），P=0.042<0.05]。見表2。

3討論

鼻咽癌是中國常見惡性腫瘤之一，多發(fā)于我國南方地區(qū)。研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌病理類型以低分化或未分化腫瘤最為常見，惡性程度和侵襲性極高，發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的幾率增加，且TNM晚期患者的5年生存率僅為30%[5]。隨著醫(yī)療科技水平的不斷發(fā)展，手術(shù)切除、放療和化療等先進治療手段已經(jīng)應(yīng)用于鼻咽癌的治療，但是多數(shù)患者初次診斷已經(jīng)為鼻咽癌晚期，患者的生存率仍然得不到顯著的改善[6]。因此，早期診斷和準確預(yù)后是目前改善鼻咽癌治療的一大重要手段。

研究表明，miRNAs在人類各種疾病的病理進程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。在鼻咽癌中，miR-3188[7]、miR-212[8]和miR-214[9]等異常表達水平的miRNAs，均被證明具有一定的臨床意義，并可能參與了腫瘤進展。本研究收集了116例鼻咽癌患者的血清樣本，通過qRT-PCR分析了樣本中miR-372的表達水平，發(fā)現(xiàn)其在鼻咽癌患者中的表達水平較健康對照人群顯著減少，說明miR-372在鼻咽癌腫瘤進展中可能扮演了抑癌miRNA的角色。此外，本研究發(fā)現(xiàn)miR-372表達水平與鼻咽癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度以及TNM分期具有顯著的關(guān)系，說明miR-372可能參與了鼻咽癌的發(fā)展過程，miR-372低表達可能預(yù)測了鼻咽癌較高的惡性程度。

鑒于鼻咽癌患者血清miR-372的差異表達水平，本研究進一步分析了其在疾病診斷和預(yù)后中的應(yīng)用價值。ROC曲線結(jié)果表明miR-372具有較高的診斷準確性，能夠有效地從健康人群中區(qū)分鼻咽癌患者;Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果提示，miR-372表達量低的鼻咽癌患者具有更短的總體生存時間，進一步的Cox回歸分析證明了miR-372與患者預(yù)后獨立相關(guān)，說明miR-372是鼻咽癌患者的獨立預(yù)后標志物。除本研究中證明的miR-372在鼻咽癌中的臨床意義，其在結(jié)直腸癌[3]、肝細胞癌[10]以及口腔癌[1]等惡性腫瘤的診斷和預(yù)后中均發(fā)揮了重要作用，說明miR-372在人類多種腫瘤疾病中具有重要的臨床應(yīng)用價值。

綜上所述，血清miR-372在鼻咽癌患者中表達水平較健康對照人群顯著減少，與腫瘤患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和TNM分期具有顯著的關(guān)系，miR-372的異常表達可能是鼻咽癌診斷和預(yù)后的潛在生物標志物。雖然本研究進一步豐富了miR-372在鼻咽癌中的臨床意義，但是其在該疾病中的生物學(xué)功能及機制尚不清楚，需要更深入的分析和探究，以期為該疾病的治療提供新思路。

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[收稿日期：2019-11-13]