12%氟唑菌酰胺·氟環(huán)唑乳油高效液相色譜分析

毛健偉，劉 哲，袁 媛，劉建國，張錫珍，尹方坡

(吉林省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，吉林 長春 130033)

1 前言

氟唑菌酰胺是巴斯夫公司研發(fā)的酰胺類殺菌劑，其化學(xué)名稱為3-(二氟甲基)-1-甲基-N-(3，4，5-三氟[1，1-聯(lián)苯]-2-基)-1-吡唑-4-甲酰胺。其作用機(jī)制屬于琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑，具有防效高、防治病害多、持久性好、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)[1-2]，被應(yīng)用于水稻、黃瓜、蘋果樹等作物上[3]。氟環(huán)唑是巴斯夫公司研發(fā)的三唑類殺菌劑，其化學(xué)名稱為(2RS，3RS)-1[-3-(2-氯苯基)-2，3-環(huán)氧-2-(4-氟苯基)丙基]-1氫-1，2，4-三唑。其活性成分氟環(huán)唑抑制病菌麥角甾醇的合成，阻礙病菌細(xì)胞壁的形成，被廣泛應(yīng)用于水稻、香蕉、小麥等作物上[4-5]。12%氟唑菌酰胺·氟環(huán)唑乳油于2016年在我國由巴斯夫歐洲公司首次取得農(nóng)藥登記證，用于防治水稻紋枯病及香蕉葉斑病[3]。

目前國內(nèi)關(guān)于12%氟唑菌酰胺·氟環(huán)唑乳油的分析方法未見公開報(bào)道。本文采用高效液相色譜法對試樣中氟唑菌酰胺和氟環(huán)唑進(jìn)行定量分析，該方法操作快速、簡便、準(zhǔn)確，分離度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 乙腈：色譜純；水：超純水；磷酸：分析純；氟唑菌酰胺標(biāo)準(zhǔn)品(99.5%)；氟環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品(98.0%)；12%氟菌·氟環(huán)唑乳油(其中氟唑菌酰胺含量6%、氟環(huán)唑含量6%)。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1100，具有二極管陣列檢測器和自動進(jìn)樣器，20μL定量環(huán)；Agilent色譜工作站；色譜柱：250mm ×4.6mm(id)不銹鋼柱 Eclipse Plus C18，5μm填充物；過濾器：濾膜0.45μm。

2.3 液相色譜操作條件 流動相：乙腈：水(0.1%磷酸水溶液)=80：20(V/V)；流量：0.8mL/min；柱溫：(30±2)℃；檢測波長：210nm；進(jìn)樣體積：5μL，保留時(shí)間：氟唑菌酰胺約為4.4min，氟環(huán)唑約為4.8 min。氟唑菌酰胺和氟環(huán)唑標(biāo)樣色譜圖(圖1)和12%氟唑菌酰胺·氟環(huán)唑乳油試樣的高效液相色譜圖(圖2)。

2.4 測定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱取氟唑菌酰胺和氟環(huán)唑標(biāo)樣各0.02g(精確至0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，加入約80mL乙腈溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用乙腈稀釋定容，搖勻備用。

2.4.2 試樣溶液的配置 稱取12%氟唑菌酰胺·氟環(huán)唑乳油試樣0.33g(精確至0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，加入約80mL乙腈溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用乙腈稀釋定容，搖勻備用。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，確認(rèn)儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化﹤1.5%后，即可按標(biāo)樣、試樣、試樣、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

2.4.4 計(jì)算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中氟唑菌酰胺(氟環(huán)唑)的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氟唑菌酰胺(氟環(huán)唑)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)數(shù)ω(%)按下式計(jì)算[6]

式中：A1—標(biāo)樣溶液中氟唑菌酰胺(氟環(huán)唑)的峰面積平均值；

A2—試樣溶液中氟唑菌酰胺(氟環(huán)唑)的峰面積平均值；

m1—氟唑菌酰胺(氟環(huán)唑)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2—氟唑菌酰胺(氟環(huán)唑)試樣的質(zhì)量，g；

P—標(biāo)樣中氟唑菌酰胺(氟環(huán)唑)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇 通過Agilent 1100高效液相色譜儀的數(shù)據(jù)采集功能，對氟唑菌酰胺和氟環(huán)唑進(jìn)行掃描，獲得其紫外波長吸收光譜圖(圖3)?？梢钥闯觯蚓０吩?90～200 nm 附近有最大吸收，后在230 nm處又出現(xiàn)較強(qiáng)吸收(圖3)。氟環(huán)唑在190～210 nm附近有最大吸收?？紤]到在 190～200 nm波長下，溶劑的干擾比較明顯，為減少干擾，故選擇檢測波長為210 nm。

色譜柱選擇常規(guī)的反相填料Eclipse Plus C18柱。依據(jù)氟唑菌酰胺、氟環(huán)唑物化性質(zhì)，用乙腈作為溶劑溶解樣品，并選擇乙腈和水作為流動相，為了得到更好的分離效果和峰形，按流動相乙腈和水不同比例進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)流動相為：乙腈：水(0.1%磷酸水溶液)=80：20(V/V)，流速0.8mL/min時(shí)，得到滿意的分析結(jié)果，即有效成分之間及雜質(zhì)能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，峰保留時(shí)間適宜。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取氟唑菌酰胺和氟環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品0.022 8和0.020 4g(精確至0.000 2 g)于100mL容量瓶中，加入約80mL乙腈溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用乙腈稀釋定容，搖勻備用。按2.3色譜條件進(jìn)行分析，進(jìn)樣量分別為1、3、5、7、9μL，以質(zhì)量濃度和峰面積進(jìn)行線性回歸分析，得到氟唑菌酰胺線性方程為Y=4 894.106 91X+77.122 632，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 7；氟環(huán)唑線性方程為Y=5 373.135 93X+156.555 28，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 1。線性相關(guān)性具體試驗(yàn)結(jié)果(表1)。

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果

3.3 分析方法的精密度試驗(yàn) 對同一試驗(yàn)樣品按照上述方法平行測定5次。測得氟唑菌酰胺和氟環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02和0.02，變異系數(shù)分別為0.31%和0.32%(表2)。

表2 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4 方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取5個一定量的試樣，分別加入10mL 2.4.1中配制的標(biāo)樣溶液，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測得氟唑菌酰胺的回收率為99.83%～100.34%，氟環(huán)唑的回收率為99.83%～101.09%(表3)。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

本工作建立了一種便捷、快速、靈敏的分析方法測定12%氟唑菌酰胺·氟環(huán)唑乳油中有效成分含量，其測試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系符合檢測要求，同時(shí)該檢測方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，是產(chǎn)品質(zhì)量控制的有效可行的分析方法。