綠蘿組培快繁技術(shù)研究

崔小麗 劉偉清 劉建榮

摘要? ? 以綠蘿帶節(jié)莖段為外植體，探討不同消毒方法、不同培養(yǎng)基配方對綠蘿的腋芽誘導(dǎo)、繼代增殖、生根的影響。結(jié)果表明，用75%酒精消毒30 s，再用0.1% HgCl2消毒30 min效果最好;腋芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)為添加6-BA 2.0 mg/L，腋芽萌芽率高達(dá)100%;叢芽增殖最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L;而生根的最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L。

關(guān)鍵詞? ? 綠蘿;腋芽誘導(dǎo);增殖培養(yǎng);生根培養(yǎng)

中圖分類號? ? S682.26? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼? ? A

Abstract? ? Using the stem segments with node of Epipremnum aureum as explants，the effects of different sterilization methods and different med-ium components on axillary bud induction，proliferating culture and rooting culture were studied.The results showed that the best sterilization method for the stem segments was wiping the explant with 75% alcohol for 30 s and 0.1% HgCl2 for 30 min.The best culture medium for axillary bud induction was adding 6-BA 2.0 mg/L，the axillary bud germination percentage was up to 100%.The optimum subculture proliferation culture medium for clumpy buds was MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+sucrose 20 g/L.The optimum rooting culture medium was 1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L.

Key words? ? Epipremnum aureum;axillary bud induction;proliferating culture;rooting culture

綠蘿屬天南星科麒麟葉屬的常綠附生藤本植物，又名黃金藤、黃金葛、魔鬼藤等。其幼葉呈心臟形，長大后呈卵圓形;葉深綠色，具有光澤。綠蘿的莖蔓粗壯，在熱帶地區(qū)為常綠。同時，綠蘿具有良好的耐陰性，其是一種良好的室內(nèi)觀葉植物[1]。綠蘿在室內(nèi)能適應(yīng)較干旱環(huán)境條件，還能吸附和去除室內(nèi)空氣中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物，其是一種天然的“空氣凈化器”[2]。綠蘿一般采用壓條和扦插的繁殖方法[3-4]，但是扦插繁殖中扦插材料有限，同時存在繁殖系數(shù)低、遺傳穩(wěn)定性差等問題，難以滿足工廠化生產(chǎn)。本試驗(yàn)以綠蘿的帶節(jié)莖段為外植體進(jìn)行組培快繁相關(guān)技術(shù)的研究，探索綠蘿的高效繁育方法[5]，以期為其工廠化育苗提供參考。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗(yàn)材料

供試材料為從大棚中選取的生長健壯、無病蟲害綠蘿植株。外植體為從綠蘿植株中選擇的具有嫩葉的帶節(jié)莖段。

1.2? ? 試驗(yàn)方法

1.2.1? ? 外植體預(yù)處理及消毒。從所選取健壯、無病蟲害的植株莖基部將植株整株截?cái)?，去除老莖，并剝除葉片，同時清洗莖段。首先，將莖段浸泡在飽和洗衣粉溶液中并輕輕振蕩20 min，其次，自來水沖洗后晾干備用。再用75%酒精浸泡30 s后，使用無菌水沖洗1遍，分別置于裝有0.1% HgCl2的燒杯中，間斷搖晃燒杯分別消毒15、20、25、30、35 min，再用無菌水清洗4～5遍，隨后將已處理的莖段切成帶有1個腋芽的小段并分別接入MS培養(yǎng)基中，每個處理接種30瓶，每瓶1個外植體。30 d后統(tǒng)計(jì)外植體的污染率和存活情況，篩選出最佳消毒時間。

1.2.2? ? 腋芽萌發(fā)誘導(dǎo)。將消毒處理后并且合格的帶節(jié)莖段分別接種到以MS為基本培養(yǎng)基并添加適量TDZ、KT、6-BA、NAA等不同生長調(diào)節(jié)劑配比的培養(yǎng)基上。30 d后觀察和統(tǒng)計(jì)外植體腋芽的萌芽率、外植體形態(tài)特征變化，篩選出最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。萌芽率計(jì)算公式如下：

萌芽率（%）=（萌芽外植體數(shù)/外植體接種數(shù)）×100

1.2.3? ? 芽叢繼代增殖。采用L9（34）正交試驗(yàn)方法研究不同生長調(diào)節(jié)劑及蔗糖組合對綠蘿芽增殖的影響，即以MS+卡拉膠5.0 g/L為基本培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的6-BA、NAA和蔗糖。將莖段誘導(dǎo)出來的芽轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基中進(jìn)一步培養(yǎng)，以篩選出最佳增殖培養(yǎng)基。

1.2.4? ? 生根培養(yǎng)。以1/2 MS+卡拉膠5.0 g/L+蔗糖20 g/L為基本培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的NAA和IBA，研究不同培養(yǎng)基配方對綠蘿生根的影響。選擇增殖過程中生長健壯、葉片舒展的單株，接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)30 d后調(diào)查生根率、生根數(shù)以及根生長情況，確定最佳生根培養(yǎng)基。

1.2.5? ? 培養(yǎng)條件。培養(yǎng)溫度25～28 ℃，相對濕度50%～70%，光照強(qiáng)度1 000～2 000 lx，光照時間8～10 h/d。

1.2.6? ? 煉苗移栽。將已生根的組培苗移至煉苗棚進(jìn)行煉苗3～5 d，然后將苗取出，洗凈殘留培養(yǎng)基，用多菌靈溶液浸泡后移栽到含有由泥炭土、珍珠巖和椰糠等配成基質(zhì)的育苗穴盤中，同時澆透水，20 d后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 不同消毒時間對綠蘿莖段污染率的影響

由表1可知，帶節(jié)綠蘿莖段在不同消毒時間的處理下，污染率均不同。當(dāng)消毒時間為15 min時，接種外植體污染率最高;當(dāng)消毒時間為30 min時，污染率最低;當(dāng)消毒時間為35 min時，污染率也較低，但是植株死亡較多。因此，最佳消毒時間為30 min。

2.2? ? 不同生長調(diào)節(jié)劑對綠蘿腋芽誘導(dǎo)的影響

由表2可知，培養(yǎng)基中添加TDZ、KT和6-BA對綠蘿腋芽誘導(dǎo)的影響不同。其中，添加6-BA更有利于綠蘿腋芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)，以添加6-BA的培養(yǎng)基誘導(dǎo)綠蘿腋芽時，萌發(fā)率可高達(dá)100.0%，且萌芽生長更健壯。由于本試驗(yàn)所用NAA的濃度沒有變化，因而并不能確定NAA濃度配方是綠蘿腋芽誘導(dǎo)的最佳配方。

2.3? ? 不同生長調(diào)節(jié)劑及蔗糖組合對綠蘿芽增殖的影響

由表3可知，6-BA、NAA和蔗糖的濃度對綠蘿芽增殖的影響程度為6-BA濃度>蔗糖濃度>NAA濃度，說明以MS為基本培養(yǎng)基時6-BA濃度對綠蘿芽增殖起主要作用，其次是蔗糖濃度，NAA濃度的影響最小。由表3可知，6-BA濃度間的F=52.507、P=0.019，表明不同6-BA濃度對綠蘿芽增殖的影響差異顯著。而NAA濃度間的F=6.196、P=0.139，蔗糖濃度間的F=2.796、P=0.263，表明不同NAA濃度、蔗糖濃度對綠蘿芽增殖的影響差異不顯著。由表3知，除試驗(yàn)3外，其他試驗(yàn)增殖系數(shù)均大于3.0，其中試驗(yàn)4的增殖系數(shù)最高，達(dá)4.96，且其芽叢多，生長健壯，葉色青綠。而當(dāng)6-BA的濃度為3.0 mg/L時，叢芽分化較少、有少量變異現(xiàn)象。由此可知，綠蘿增殖的最佳處理組合為A2B2C1，即綠蘿芽增殖的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L。

2.4? ? 不同培養(yǎng)基配方對綠蘿生根的影響

由表4可知，每個處理均可生根，且生根培養(yǎng)基中添加IBA的配方生根數(shù)較多。當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L、IBA濃度為0.2 mg/L時，生根數(shù)最多且根粗壯;當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L、IBA濃度為0.5 mg/L時，根較弱并有氣生根生成。綜上所述，綠蘿最佳生根配方為1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L。

2.5? ? 煉苗移栽情況

將綠蘿生根組培苗移至大棚進(jìn)行煉苗3～5 d，注意避免中午太陽直射。煉苗后的組培苗顏色深綠。將組培苗從瓶中取出，洗凈附著在根系上的培養(yǎng)基，用多菌靈溶液1 000倍液浸泡20 min后移栽。結(jié)果表明，組培苗移栽到含有泥炭土和珍珠巖按3∶1比例配成基質(zhì)的育苗穴盤中，組培苗長勢旺盛。組培苗移栽管理期間，要求溫度為25～30 ℃，保持空氣相對濕度達(dá)85%以上[6]。20 d后，成活率可達(dá)95%。

3? ? 結(jié)論與討論

本研究以綠蘿帶節(jié)莖段為外植體，對其組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行探索。試驗(yàn)結(jié)果表明，腋芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)為添加6-BA 2.0 mg/L，腋芽萌發(fā)率高達(dá)100%;叢芽增殖最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L，增殖系數(shù)可達(dá)4.96;生根最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L，生根率可高達(dá)100%。

外植體消毒是植物離體組織培養(yǎng)所要進(jìn)行的第一步，是愈傷組織誘導(dǎo)和叢生芽誘導(dǎo)的基礎(chǔ)。本研究只運(yùn)用了酒精與升汞進(jìn)行消毒試驗(yàn)，且表明采用75%酒精消毒30 s后，再用0.1% HgCl2消毒30 min，效果最好。而現(xiàn)有的研究表明，不同種類的滅菌劑組合，對綠蘿外植體的滅菌效果不同[7]。這說明綠蘿外植體消毒處理方法具很大的改進(jìn)和提升空間，可采用多種滅菌劑進(jìn)行組合配比并比較消毒效果，進(jìn)而篩選出更優(yōu)的消毒方法。

研究發(fā)現(xiàn)，在天南星科植物組織培養(yǎng)中，生長調(diào)節(jié)劑對外植體形態(tài)建成及其調(diào)控起著關(guān)鍵作用，其種類選擇及濃度配比影響著植株再生方式和再生頻率[8-11]。因此，本試驗(yàn)著重探討了不同生長調(diào)節(jié)劑濃度對綠蘿的腋芽誘導(dǎo)、繼代增殖、生根的影響。本研究結(jié)果表明，6-BA在腋芽誘導(dǎo)及繼代增殖作用最為明顯，且最佳濃度為2.0 mg/L，這與郭 英等[12]的報(bào)道一致，但與王越銘等[3]報(bào)道的結(jié)果不同。此外，生根試驗(yàn)中NAA與IBA結(jié)合時效果最佳，這與黃鳳蘭等[13]的研究結(jié)果不同。在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，褐變的現(xiàn)象較嚴(yán)重，可適量添加活性炭。張 瑜等[14]的研究表明，活性炭最佳添加量為0.2%。在腋芽誘導(dǎo)試驗(yàn)中，由于添加NAA 0.02 mg/L為定量，因而不能確定其為最佳值，有待進(jìn)一步試驗(yàn)。雖然組織培養(yǎng)的方法變異小，但在試驗(yàn)過程中也有發(fā)現(xiàn)，綠蘿繼代培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)少量變異。因此，綠蘿的穩(wěn)定遺傳率和穩(wěn)定遺傳的能力還需進(jìn)一步進(jìn)行試驗(yàn)。

4? ? 參考文獻(xiàn)

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