評(píng)價(jià)熒光定量PCR技術(shù)在痰結(jié)核菌檢測(cè)中的應(yīng)用

陳文龍

【摘 ?要】目的：探討在痰結(jié)核細(xì)菌檢測(cè)中應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)方式的臨床效果。方法：建立檢測(cè)痰結(jié)核熒光定量PCR技術(shù)，對(duì)多種敏感性和特異性進(jìn)行檢驗(yàn)，通過對(duì)150例住院患者痰結(jié)核細(xì)菌檢測(cè)，得出相關(guān)數(shù)據(jù)，并進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果：使用熒光定量PCR技術(shù)的患者標(biāo)本陽性檢出率為35.33%。培養(yǎng)法的患者標(biāo)本陽性檢出率為17.33%，涂片法的患者標(biāo)本陽性檢出率為12.00%。熒光定量PCR技術(shù)均優(yōu)于培養(yǎng)法和涂片法，更能有效檢測(cè)出結(jié)合桿菌，數(shù)據(jù)比較存在顯著差異性，P<0.05。結(jié)論：熒光明顯定量PCR技術(shù)明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的結(jié)合桿菌監(jiān)測(cè)方式，敏感性和檢出率均較高，且具有特異性，診斷價(jià)值更高，可有效診斷患者結(jié)核疾病，尤其對(duì)涂片染色和結(jié)核陰性結(jié)核病有良好的診斷效果。

【關(guān)鍵詞】熒光定量PCR;痰結(jié)合菌;診斷價(jià)值

【中圖分類號(hào)】R440??????【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A??????【文章編號(hào)】1672-3783（2020）03-0039-01

結(jié)核病屬于臨床常見感染性疾病，全球均具有較高的感染率，是一種單一病原體疾病，死亡率極高，嚴(yán)重威脅患者的身體健康，因此目前采取有效措施，及時(shí)診斷結(jié)核疾病，做好結(jié)核疾病的防控工作^[1]。目前，比較常見的結(jié)核疾病診斷方式為傳統(tǒng)培養(yǎng)法和涂片法，但是此種診斷方式存在很多弊端，準(zhǔn)確性和特異性不高。基于此，本研究對(duì)痰結(jié)核細(xì)菌標(biāo)本進(jìn)行熒光定量PCR診斷，對(duì)此種診斷方式的診斷價(jià)值進(jìn)行評(píng)估。

1 資料與方法

1.1一般資料

本文從2014年6月至2017年7月，收治的150例住院患者作為研究對(duì)象，這些研究對(duì)象均為結(jié)核患者，患者最大年齡為66歲，最小年齡為19歲，其中包括50例女性患者和100例男性患者。

1.2方法

采集標(biāo)本。所有患者均按照結(jié)核病細(xì)菌學(xué)診斷操作流程進(jìn)行診斷;首先需采集患者痰液，痰液采集時(shí)間為每日清晨，采集劑量為4毫升。若患者患有胸膜炎，則還需對(duì)患者胸水進(jìn)行采集，然后將采集的標(biāo)本處理過后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，診斷期間需利用涂片抗酸染色和結(jié)核細(xì)菌培養(yǎng)方式診斷。診斷程序包括編號(hào)標(biāo)本和化驗(yàn)單，其余診斷操作方式均嚴(yán)格按照流程進(jìn)行規(guī)范操作;與此同時(shí)采用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)試劑為MX300P，試劑產(chǎn)自中山達(dá)安基因股份有限公司。在痰液標(biāo)本中加入4倍體積4%氫氧化鈉，搖勻后將其放置實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，待30分鐘后痰液會(huì)形成液體，然后將其中1毫升液體放置在離心管中，離心管長度為1.5毫升，5分鐘后離心棄上清。待其沉淀過后，利用無菌生理鹽水進(jìn)行清洗，其于體液標(biāo)本也依次方式進(jìn)行處理。

1.3數(shù)據(jù)處理

利用專業(yè)的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)熒光定量PCR技術(shù)診斷價(jià)值進(jìn)行分析和統(tǒng)計(jì)，陽性、陰性檢出率為計(jì)數(shù)資料，采用（n，%）表示和卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（）表示和T檢驗(yàn)，若P<0.05則數(shù)據(jù)對(duì)比差異性顯著。

2 結(jié)果

涂片法陰性患者標(biāo)本共有150例，呈陽性的有18例，陰性的有132例，陽性檢出率為12.00%（18/150）。

培養(yǎng)法取150例結(jié)核疾病患者，標(biāo)本呈陽性的有26例，呈陰性的有124例，陽性檢出率為17.33%（26/150）.

熒光定量取150例結(jié)核疾病患者，標(biāo)本呈陽性的有53例，呈陰性的有97例，陽性檢出率為35.33%（53/150）.三種監(jiān)測(cè)方式最終檢出的陽性標(biāo)本例數(shù)為450例，呈陽性的有97例，呈陰性的有353例，陽性檢出率為61.33%。

3 討論

結(jié)核病目前比較準(zhǔn)確的分離方式為結(jié)核菌分離培養(yǎng)，傳統(tǒng)的分離檢測(cè)方式主要包括涂片法和培養(yǎng)檢測(cè)法，可通過實(shí)驗(yàn)人員的檢測(cè)實(shí)現(xiàn)結(jié)核疾病的診斷，但是此種方式往往需要很多人員方能實(shí)現(xiàn)檢測(cè)和診斷的目的，診斷花費(fèi)時(shí)間較長，不僅使檢測(cè)結(jié)核細(xì)菌的效率受到影響，還在一定程度上降低陽性檢出率，存在診斷結(jié)核菌不準(zhǔn)確現(xiàn)象，有一定的檢測(cè)弊端，其次此種診斷方式無法準(zhǔn)確判斷細(xì)菌的染色和生長特異，容易發(fā)生誤診現(xiàn)象，不僅會(huì)延誤病情，還在一定程度上增加患者病情惡化的概率，使患者錯(cuò)過最佳時(shí)間，嚴(yán)重威脅患者的生命安全。因此為了克服傳統(tǒng)檢測(cè)方式的弊端，需采取更先進(jìn)的結(jié)核菌檢測(cè)技術(shù)^[2]。

熒光定量PCR屬于一種新型診斷方式，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測(cè)方式的優(yōu)勢(shì)，可縮短檢測(cè)時(shí)間，提高檢測(cè)效率，同時(shí)具有敏感度、特異度等優(yōu)勢(shì)，能夠快速培養(yǎng)生長緩慢細(xì)菌。其次此種檢測(cè)方式完全是在密閉系統(tǒng)中擴(kuò)張完成，不僅可實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)測(cè)定，還能降低污染的可能性，以免患者痰核細(xì)菌因污染物增長呈假陽性;也能最大程度的降低誤診概率，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性，診斷價(jià)值較高，檢測(cè)效率高，檢測(cè)結(jié)果好，廣受結(jié)核疾病患者的歡迎和喜愛，可作為臨床檢測(cè)結(jié)核桿菌的主要診斷方式^[3]。

熒光定量診斷方式還具有以下幾方面優(yōu)勢(shì)：（1）可快速解決污染問題，此種方式檢測(cè)完全在單管中進(jìn)行，期間不需要打開管蓋，可杜絕污染物入侵，降低污染的發(fā)生概率。（2）此種檢測(cè)方式自動(dòng)化程度高，結(jié)核細(xì)菌反應(yīng)完全是由計(jì)算機(jī)完成，不僅高效、快速，還可減少相關(guān)人員接觸致癌物質(zhì)，降低細(xì)菌的傳播概率。（3）此種檢測(cè)方式具有敏感性、特異和準(zhǔn)確性。（4）此種診斷方式可實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)核細(xì)菌的實(shí)施檢測(cè)，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)定量只能檢測(cè)最終結(jié)果的局限性，可對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行CT計(jì)算，獲得定量結(jié)果準(zhǔn)確性更高^[4-5]。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究表明，熒光定量PCR技術(shù)明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的痰液涂片和培養(yǎng)方式，此種檢測(cè)方式能夠提高結(jié)核桿菌的檢出率，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果快速為患者治療針對(duì)性的檢驗(yàn)方式，及時(shí)控制病情，為患者贏得最佳治療時(shí)間，降低患者病死率，保證患者的身體健康。

參考文獻(xiàn)

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