川西小黃菊莖化學(xué)成分的研究

陳玉，盧青秀，年賀鳳，滕海達(dá)，杜艷，陳曦

(中南民族大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，武漢 430074)

藏醫(yī)藥為我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分，有著悠久的歷史和長(zhǎng)期的應(yīng)用基礎(chǔ).川西小黃菊Pyrethrumtatsienense(Bur. et Franch.) Ling又名韃新菊或打箭菊，為菊科匹菊屬植物[1].生長(zhǎng)于海拔3500～5200 m的灌叢、高山、草甸、山坡礫石地或杜鵑灌叢，在我國(guó)主要分布于甘肅、西藏、四川、云南及青海等地，為一種民間常用藏藥，其性寒，味苦，具有治療傷口流黃水、黃水瘡、肝炎、瘡瘍、濕熱、跌打損傷、頭傷、頭痛等功效[2]，在臨床上主要用于腦震蕩、黃水病、瘟疫病、太陽(yáng)穴頭痛、跌打損傷和濕熱瘡瘍等病癥[3].現(xiàn)代藥理研究表明：川西小黃菊化合物具有抗心肌缺血、保肝、抗缺氧和鎮(zhèn)痛抗炎等作用[4]，但是其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制都還尚不明確.為了進(jìn)一步闡明川西小黃菊的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本文對(duì)川西小黃菊的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究.

1 材料與儀器

川西小黃菊購(gòu)于西藏自治區(qū)，由中南民族大學(xué)藥學(xué)院劉新橋副教授鑒定為川西小黃菊Pyrethrumtatsienense(Bur. et Franch.) Ling. 50 μm反相硅膠(日本YMC)；200～300目硅膠(青島海洋化工)；80～100目聚酰胺粉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑)；硫酸香草醛顯色劑(硫酸、香草醛、乙醇、水分別為8 mL、0.5 g、10 mL、20 mL)；色譜甲醇(昌泰興業(yè))；色譜乙腈(科建化玻教學(xué)設(shè)備)；氘代試劑(DMSO-d6、C5D5N、CDCl3，安諾倫生物科技)；其余試劑均為分析純，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司和上海泰坦化學(xué)有限公司生產(chǎn).

Bruker 600 MHz核磁共振波譜儀(ADVANCE IIITM 600 MHz型，德國(guó)布魯克)；半制備型高效液相色譜儀(Untimate3000型，美國(guó)戴安)；VWD、DAD檢測(cè)器(Untimate3000型，美國(guó)戴安)；半制備型色譜柱(5C18-MS-Ⅱ,ID 10 mm250 mm，日本COSMOSIL)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE2000A型，上海亞榮生化)；氮吹濃縮裝置(MTN-2800D型，天津奧特賽恩斯儀器).

2 提取和分離

取川西小黃菊莖4.8 kg，用70%乙醇室溫浸泡提取3次(每次24 h)，合并3次提取液，減壓濃縮后得到浸膏約1 kg.將浸膏用80～100目聚酰胺(1.1 kg)拌樣，自然晾干，研細(xì).80～100目聚酰胺(4 kg)采用濕法上柱，依次用H2O和30%、50%、70%、100%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，分別得到30%組分32.76 g，50%組分61.38 g，70%組分91.94 g.

50%組分經(jīng)正相硅膠柱層析分離，用二氯甲烷∶甲醇(體積比99∶1→0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜監(jiān)測(cè)，相同部分合并得到10個(gè)組分(Fr.A～J)，其中Fr.F經(jīng)過(guò)反復(fù)的正、反相硅膠柱色譜和半制備HPLC得到化合物1[2.99 mg,tR=14.12 min,V(甲醇)∶V(水)=30∶70]、4[3.68 mg,tR=23.08 min,V(甲醇)∶V(水)=50∶50]、5[12.68 mg,tR=29.20 min,V(甲醇)∶V(水)=30∶70]、6[11.37 mg,tR=24.56 min,V(甲醇)∶V(水)=40∶60]、7[21.53 mg,tR=25.09 min,V(甲醇)∶V(水)=24∶76]、8[12.13 mg,tR=32.69 min,V(甲醇)∶V(水)=30∶70]、9[30.3 mg,tR=18.78 min,V(甲醇)∶V(水)=50∶50]、11[4.80 mg,tR=25.56 min,V(甲醇)∶V(水)=30∶70]、12[4.55 mg,tR=20.90 min,V(甲醇)∶V(水)=24∶76]、13[7.60 mg,tR=33.79 min,V(乙腈)∶V(水)= 60∶40]. Fr.G經(jīng)過(guò)反相硅膠柱和HPLC分離得到化合物2[0.88 mg,tR=11.80 min,V(甲醇)∶V(水)=24∶76]、3[3.65 mg,tR=11.20 min,V(甲醇)∶V(水)=25∶75]、15[5.74 mg,tR=12.72 min,V(乙腈)∶V(水)=19∶81]. 30%組分經(jīng)正相硅膠柱層析分離，用二氯甲烷:甲醇(體積比99∶1→0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并相同部分，共收集到12個(gè)組分(Fr.A～L)，F(xiàn)r.C經(jīng)過(guò)HPLC制備得到化合物10[3.27 mg,tR=5.92 min,V(甲醇)∶V(水)=73∶27]，F(xiàn)r.I析出晶體14(8.02 mg)且經(jīng)過(guò)正相硅膠柱和HPLC得到化合物16[152 mg,tR=18.50 min,V(甲醇)∶V(水)=33∶67]、17[5.00 mg,tR=16.55 min,V(甲醇)∶V(水)=41∶59]、18[3.27 mg,tR=12.66 min,V(甲醇)∶V(水)=44∶56].

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，分子式為C7H6O3.1H NMR(600 MHz,C5D5N)δ: 8.47(2H,d,J=7.8 Hz,H-2,H-6),7.26(2H,d,J=7.8 Hz,H-3,H-5);13C NMR(150 MHz,C5D5N)δ: 169.9(-COOH),163.2(C-4),132.9(C-2),132.9(C-6),123.4(C-1),116.2(C-3),116.2(C-5).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物1為對(duì)羥基苯甲酸.

化合物2：白色粉末，分子式為C6H6O3.1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ: 7.32(1H,s,H-2),7.27(1H,d,J=7.2 Hz,H-6),6.75(1H,d,J=7.2 Hz,H-5);13C NMR(150 MHz,DMSO-d6)δ: 149.9(C-1),144.9(C-3),144.9(C-4),121.8(C-5),116.7(C-6),115.1(C-2).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物2為1,2,4-苯三酚.

圖1 化合物1～18的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of compound 1-18

化合物3：白色粉末，分子式為C7H6O4.1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ: 7.32(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),7.27(1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6),6.77(1H,d,J=8.4 Hz,H-5);13C NMR(150 MHz,DMSO-d6)δ: 167.5(-COOH),150.0(C-4),144.9(C-3),121.9(C-1),121.8(C-6),116.6(C-2),115.2(C-5).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物3為原兒茶酸.

化合物4：白色粉末，分子式為C9H8O2.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δ: 7.64(1H,d,J=16.2 Hz,H-7),7.59(2H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-2,H-6),7.39(3H,m,H-3,H-4,H-5),6.49(1H,d,J=16.2 Hz,H-8);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δ: 171.1(C-9),146.0(C-7),136.1(C-1),131.4(C-4),130.1(C-2),130.1(C-6),129.3(C-3),129.3(C-5),120.2(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物4為反式肉桂酸.

化合物5：白色粉末，分子式為C9H8O3.1H NMR(600 MHz,C5D5N)δ: 8.13(1H,d,J=16.2 Hz,H-7),7.64(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,H-6),7.18(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,H-5),6.86(1H,d,J=15.6 Hz,H-8);13C NMR(150 MHz,C5D5N)δ: 170.2(C-9),161.5(C-4),144.9(C-7),130.9(C-2),130.9(C-6),126.8(C-1),117.5(C-8),117.2(C-3),117.2(C-5).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物5為反式對(duì)羥基肉桂酸.

化合物6：白色粉末，分子式為C9H8O3.1H NMR(600 MHz,C5D5N)δ: 8.82(1H,d,J=16.2 Hz,H-7),7.77(1H,d,J=7.8 Hz,H-6),7.29(1H,m,H-4),7.27(1H,d,J=16.2 Hz,H-8),7.17(1H,d,J=8.4 Hz,H-3),6.95(1H,t,J=7.8 Hz,H-5);13C NMR(150 MHz,C5D5N)δ: 170.4(C-9),158.6(C-2),140.9(C-7),132.0(C-4),129.7(C-6),123.2(C-1),120.5(C-5),120.2(C-8),117.3(C-3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物6為反式鄰羥基肉桂酸.

化合物7：淡黃色粉末，分子式為C9H8O4.1H NMR(600 MHz,C5D5N)δ: 8.15(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),7.68(1H,s,H-2),7.25(1H,d,J=7.8 Hz,H-6),7.23(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),6.85(1H,d,J=16.2 Hz,H-8);13C NMR(150 MHz,C5D5N)δ: 170.1(C-9),150.4(C-4),147.9(C-3),145.5(C-7),127.4(C-1),122.1(C-6),117.0(C-5),117.0(C-8),115.9(C-2).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物7為反式咖啡酸.

化合物8：白色粉末，分子式為C10H10O4.1H NMR(600 MHz,C5D5N)δ: 8.14(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),7.36(1H,br s,H-2),7.29(1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6),7.23(1H,overlap,H-2),6.90(1H,d,J=16.2 Hz,H-8),3.78(3H,s,3-OMe);13C NMR(150 MHz,C5D5N)δ: 170.2(C-9),151.1(C-3),149.3(C-4),145.3(C-7),127.2(C-1),124.2(C-6),117.6(C-2),117.1(C-5),111.7(C-8),56.1(3-OMe).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物8為反式阿魏酸.

化合物9：淡黃色粉末，分子式為C11H12O4.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δ: 7.53(1H,d,J=16.2 Hz,H-7),7.03(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.94(1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-6),6.77(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),6.25(1H,d,J=16.2 Hz,H-8),4.21(2H,q,J=7.2 Hz,H-1′),1.31(3H,t,J=7.2 Hz,H-2′);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δ: 169.5(C-9),149.7(C-4),147.0(C-3),146.9(C-7),127.8(C-1),123.1(C-6),116.6(C-5),115.2(C-2),115.2(C-8),61.6(C-1′),14.8(C-2′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物9為反式咖啡酸乙酯.

化合物10：白色粉末，分子式為C9H6O2.1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ: 8.07(1H,d,J=9.6 Hz,H-4),7.73(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),7.62(1H,t,J=7.8 Hz,H-7),7.40(1H,d,J=7.8 Hz,H-8),7.36(1H,t,J=7.8 Hz,H-6),6.50(1H,d,J=9.6 Hz,H-3).以上H譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物10為香豆素.

化合物11：白色粉末，分子式為C9H6O3.1H NMR(600 MHz,C5D5N)δ: 7.66(1H,d,J=9.6 Hz,H-4),7.40(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.04(1H,m,H-6),7.02(1H,br s,H-8),6.26(1H,d,J=9.6 Hz,H-3);13C NMR(150 MHz,C5D5N)δ: 162.8(C-2),161.0(C-7),156.5(C-9),144.0(C-4),129.7(C-5),113.7(C-3),111.8(C-6),111.7(C-10),103.1(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物11為7-羥基香豆素.

化合物12：白色粉末，分子式為C9H6O4.1H NMR(600 MHz,C5D5N)δ: 7.65(1H,d,J=9.6 Hz,H-4),7.30(1H,s,H-8),7.17(1H,s,H-5),6.28(1H,d,J=9.6 Hz,H-3);13C NMR(150 MHz,C5D5N)δ: 162.1(C-2),152.8(C-7),145.1(C-6),144.5(C-4),113.3(C-5),112.3(C-3),111.8(C-10),103.9(C-8)，其中C-9被溶劑峰覆蓋.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物12為6,7-二羥基香豆素.

化合物13：黃色油狀物，分子式為C18H30O3.1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.50(1H,dd,J=15.0,12.0 Hz,H-11),6.18(1H,d,J=15.6 Hz,H-12),6.12(1H,t,J=11.4 Hz,H-10),5.91(1H,m,H-9),2.55(2H,t,J=7.2 Hz,H-14),2.35(2H,t,J=7.2 Hz,H-2),2.31(2H,m,H-8),1.64(2H,m,H-15),1.26～1.44(3-7,16,17-H2),0.90(3H,t,J=6.6 Hz,H-18);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 201.6(C-13),179.3(C-1),142.8(C-9),137.3(C-11),129.5(C-12),127.1(C-10),41.4(C-14),34.1(C-2),31.7(C-16),29.3(C-5),29.1(C-4),29.1(C-6),29.0(C-7),28.4(C-8),24.8(C-3),24.3(C-15),22.7(C-17),14.1(C-18).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17,18]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物13為(9Z,11E)-13-氧代-9,11-十八碳二烯酸.

化合物14：白色結(jié)晶，分子式為C16H18O9.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δ: 7.56(1H,d,J=16.2 Hz,H-7),7.05(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.95(1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-6),6.78(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),6.26(1H,d,J=15.6 Hz,H-8),5.34(1H,m,H-3′),4.17(1H,m,H-5′),3.74(1H,dd,J=8.4,3.0 Hz,H-4′),2.05～2.23(4H,m,2′-H2,6′-H2);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δ: 177.1(C-7′),168.8(C-9),149.7(C-4),147.2(C-7),146.9(C-3),127.9(C-1),123.1(C-6),116.6(C-5),115.3(C-2),115.3(C-8),76.2(C-1′),73.5(C-3′),72.1(C-4′),71.4(C-5′),38.8(C-2′),38.3(C-6′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物14為綠原酸.

化合物15：白色粉末，分子式為C17H20O9.1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ: 7.37(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),7.02(1H,br s,H-2),6.97(1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6),6.76(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),6.10(1H,d,J=15.6 Hz,H-8),4.99(1H,dd,J=9.0,5.4 Hz,H-3′),3.87(1H,m,H-5′),3.57(1H,m,H-4′),3.55(3H,s,-OCH3),2.08～2.13(2H,m,H-2′a,H-6′a),1.91(1H,dd,J=13.2,3.0 Hz,H-2′b),1.75(1H,m,H-6′b);13C NMR(150 MHz,DMSO-d6)δ: 173.7(C-7′),165.5(C-9),148.6(C-4),145.7(C-3),145.3(C-7),125.4(C-1),121.5(C-6),115.9(C-5),114.6(C-2),113.9(C-8),73.0(C-1′),71.1(C-4′),69.3(C-3′),66.8(C-5′),51.9(-OCH3),37.3(C-2′),35.1(C-6′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物15為綠原酸甲酯.

化合物16：白色粉末，分子式為C26H32O11.1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ: 7.05(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.96(1H,d,J=1.2 Hz,H-2′),6.89(1H,d,J=1.2 Hz,H-2),6.86(1H,dd,J=8.4,1.2 Hz,H-6′),6.76(1H,dd,J=7.8,1.2 Hz,H-6),6.73(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),4.89(1H,d,J=7.2 Hz,H-1″),4.67(1H,d,J=4.2 Hz,H-7′),4.61(1H,d,J=4.2 Hz,H-7),4.13(2H,m,H-9a,H-9′a),3.77(3H,s,3-OMe),3.76(3H,s,3′-OMe),3.75(1H,overlap,H-9b),3.74(1H,overlap,H-9′b),3.67(1H,br d,J=11.4 Hz,H-6″a),3.46(1H,dd,J=11.4,5.4 Hz,H-6″b),3.04(2H,m,H-8,H-8′),3.17～3.28(4H,m,H-2″～5″);13C NMR(150 MHz,DMSO-d6)δ: 149.1(C-3),147.7(C-3′),146.1(C-4′),146.0(C-4),135.4(C-1),132.4(C-1′),118.9(C-6′),118.3(C-6),115.3(C-5),115.3(C-5′),110.6(C-2),110.5(C-2′),100.2(C-1″),85.4(C-7′),85.1(C-7),77.2(C-5″),77.0(C-3″),73.4(C-2″),71.2(C-9),71.1(C-9′),69.8(C-4″),60.8(C-6″),55.8(3′-OMe),55.7(3-OMe),53.9(C-8),53.7(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物16為松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷.

化合物17：白色粉末，分子式為C26H32O11.1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ: 7.03(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),6.95(1H,br s,H-2),6.88(1H,s,H-2′),6.86(1H,br d,J =8.4 Hz,H-6),6.73(2H,br s,H-5′,H-6′),4.87(1H,d,J=7.2 Hz,H-1″),4.75(1H,d,J=6.0 Hz,H-7′),4.36(1H,d,J=6.6 Hz,H-7),4.07(1H,d,J=9.6 Hz,H-9a),3.75(6H,s,3-OMe,3′-OMe),3.74(1H,m,H-9b),3.72(1H,m,H-9′a),3.65(1H,br d,J=11.4 Hz,H-6″a),3.34(1H,m,H-8′),3.14(1H,m,H-9′b),3.10～3.34(5H,m,H-2″～6″),2.82(1H,m,H-8);13C NMR(150 MHz,DMSO-d6)δ: 148.9(C-3),147.4(C-3′),145.9(C-4),145.3(C-4′),135.3(C-1),129.6(C-1′),118.2(C-6),117.9(C-6′),115.2(C-5),115.1(C-5′),110.4(C-2),110.0(C-2′),100.1(C-1″),86.8(C-7),81.4(C-7′),77.1(C-5″),76.9(C-3″),73.3(C-2″),70.3(C-9),69.7(C-4″),69.1(C-9′),60.7(C-6″),55.7(3′-OMe),55.6(3-OMe),54.1(C-8),49.4(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22,23]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物17為表松脂素4-O-吡喃葡萄糖苷.

化合物18：白色粉末，分子式為C26H32O11.1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ: 7.04(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),6.95(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.89(1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.83(1H,dd,J=8.4,1.2 Hz,H-6),6.76(1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6′),6.72(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),4.88(1H,d,J=7.2 Hz,H-1″),4.79(1H,d,J=5.4 Hz,H-7′),4.30(1H,d,J=6.6 Hz,H-7),4.05(1H,d,J=9.0 Hz,H-9a),3.76(3H,s,3-OMe),3.75(3H,s,3′-OMe),3.74(1H,m,H-9b),3.72(1H,m,H-9′a),3.36(1H,overlap,H-8′),3.16(1H,m,H-9′b),3.06～3.31(6H,m,H-2″～6″),2.82(1H,m,H-8);13C NMR(150 MHz,DMSO-d6)δ: 148.6(C-3′),147.6(C-3),146.0(C-4),145.4(C-4′),132.4(C-1′),132.3(C-1),118.7(C-6),117.6(C-6′),115.2(C-5′),114.8(C-5),110.3(C-2),109.9(C-2′),100.1(C-1″),87.1(C-7),81.2(C-7′),77.1(C-5″),76.9(C-3″),73.3(C-2″),70.4(C-9),69.7(C-4″),68.9(C-9′),60.7(C-6″),55.7(3′-OMe),55.6(3-OMe),54.0(C-8),49.4(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22,23]報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物18為表松脂素4′-O-吡喃葡萄糖苷.

4 結(jié)語(yǔ)

本文從川西小黃菊中分離鑒定的18個(gè)化合物，其中1～3為小分子芳香類化合物，4～9為苯丙酸類成分，10、12為簡(jiǎn)單香豆素類化合物，13為長(zhǎng)鏈脂肪酸，14、15為奎寧酸的衍生物，16～18為雙四氫呋喃木脂素，展現(xiàn)了川西小黃菊化學(xué)成分結(jié)構(gòu)類型多樣性，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)該藏藥提供了科學(xué)依據(jù).