高效液相色譜法分析遵義引種的栝樓籽游離氨基酸含量

梁光平，楊俊，陳榮華，劉亮，丁麗娜，萬路平，陳東林*

(1.遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 藥學(xué)系，貴州 遵義 563006；2.貴州省野生藥用植物資源持續(xù)利用協(xié)同創(chuàng)新中心，貴州 遵義 563006；3.遵義市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 遵義 563000)

栝樓籽是葫蘆科植物栝樓(TrichosantheskirilowiiMaxim)的成熟干燥種子，又稱瓜蔞子、吊瓜子。性甘、寒，歸肺、胃、大腸經(jīng)，具有潤肺化痰，滑腸通便的功效[1]。在江浙地區(qū)，炒熟的栝樓籽也作為休閑品嘗的時(shí)尚禮品受到人們的喜愛，屬于新興的藥食同源品種。由于栝樓籽資源需求量越來越大，本課題組前期從浙江紹興引進(jìn)5個(gè)品種的栝樓籽到貴州遵義進(jìn)行育苗、栽培，并通過原產(chǎn)地與引種地栝樓籽所含藥效成分、微量元素、重金屬，以及總蛋白、多糖、脂肪等營養(yǎng)成分的分析，初步優(yōu)選出其中的2號(hào)栝樓籽(越蔞2號(hào))為適宜在貴州遵義栽培的品種[2-4]。為進(jìn)一步探討該品種在貴州遵義栽培的可行性，本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，對(duì)引種地越蔞2號(hào)及其原產(chǎn)地種子16種游離氨基酸的含量進(jìn)行了分析比較。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

原產(chǎn)地越簍2號(hào)栝樓籽由浙江省紹興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院提供，將該種子引種至貴州省遵義市，經(jīng)過育苗、栽培、采收加工和干燥等工序即得引種地栝樓籽。

安捷倫公司16種氨基酸混合對(duì)照品，包括苯丙氨酸、谷氨酸、亮氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、絲氨酸、纈氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、甘氨酸、組氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、脯氨酸。異硫氰酸苯酯、三乙胺、乙腈、醋酸、正己烷等試劑均為分析純，未經(jīng)進(jìn)一步純化處理直接使用。

液相色譜系統(tǒng)(LC-2030，日本島津公司)，超聲波清洗儀(QTSXR10260，天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司)，原位冷凍干燥機(jī)(SCIENTZ-100F，寧波新芝生物科技股份有限公司)，電子天平(ATY224，日本島津公司)，超純水儀(WP-UP-WF-30，四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 供試液的制備

游離氨基酸樣品溶液的制備：精密稱取引種地栝樓籽粉末1.0 g，加水20 mL浸泡2 h后，超聲提取1 h，抽濾，濾液采用冷凍干燥法進(jìn)行干燥，加水定容至10 mL備用。

樣品衍生：參照文獻(xiàn)[5]的方法并稍作修改，吸取樣品1 mL于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，從中取500 μL稀釋后置于具塞試管中，加入異硫氰酸苯酯的乙腈溶液250 μL，三乙胺-乙腈溶液250 μL，搖勻，室溫放置1 h后，加入50 μL醋酸，搖勻。

萃取凈化：向上述衍生后的溶液中加入1.0 mL正己烷，渦旋混合器振蕩1 min，靜置分層后，棄去上層正己烷溶液，重復(fù)此操作2次，合并下層溶液，用0.45 μm濾膜過濾，濾液用于液相色譜測定。

原產(chǎn)地栝樓籽和16種氨基酸混合對(duì)照品溶液按照相同的方法進(jìn)行處理。以不加樣品的溶液空白為對(duì)照。

1.2.2 色譜條件

PhenomenexTMC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相A(無水硫酸鈉+三乙胺混合水溶液)與流動(dòng)相B(甲醇-乙腈-水)根據(jù)文獻(xiàn)[5]的方法進(jìn)行配制。檢測波長為254 nm，進(jìn)樣量10 μL，柱溫30 ℃。

2 結(jié)果與分析

對(duì)引種地和原產(chǎn)地栝樓籽的氨基酸成分進(jìn)行比較，結(jié)果如表1所示。2個(gè)樣品都檢測出了16種游離氨基酸，引種地與原產(chǎn)地栝樓籽游離氨基酸相對(duì)含量均超過5.0%的有脯氨酸、精氨酸、谷氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸等7種，其中以脯氨酸的相對(duì)含量最高，均超過了30%。2種栝樓籽樣品中16種氨基酸的相對(duì)含量基本一致。引種地栝樓籽必需氨基酸占總氨基酸的21.92%，原產(chǎn)地的占20.77%，兩者百分比也基本接近。在引種地栝樓籽中，有13種游離氨基酸的含量高于原產(chǎn)地栝樓籽樣品，丙氨酸、異亮氨酸、脯氨酸的含量低于原產(chǎn)地栝樓籽。其中，脯氨酸的相對(duì)含量降低最明顯，下降了2.94百分點(diǎn)。

表1 引種地與原產(chǎn)地16種游離氨基酸含量

注：*為必需氨基酸，含量變化為引種地相對(duì)含量減去原產(chǎn)地相對(duì)含量。

3 小結(jié)

藥用植物引種既保護(hù)了瀕危植物，又確保了藥用植物可持續(xù)利用，還在一定程度上解決了由于產(chǎn)地局限造成的資源緊張[6]。本文研究的栝樓籽是從浙江紹興引種至貴州遵義，屬跨域引種，該引種方式具有較強(qiáng)的探索性。同時(shí)也對(duì)引種研究者在評(píng)價(jià)引種藥材質(zhì)量方面提出了更高的要求。引種地栝樓籽16種游離氨基酸的相對(duì)含量與原產(chǎn)地栝樓籽的含量基本一致，說明在貴州遵義引種栽培的栝樓籽與原產(chǎn)地區(qū)的差異不明顯，表明越蔞2號(hào)栝樓可以在貴州遵義地區(qū)進(jìn)行大量栽培。