利拉魯肽注射液在正常動(dòng)物及糖尿病模型動(dòng)物中降血糖作用的評(píng)價(jià)

王菲，王洪領(lǐng)，姚曦冉，邢銳

（1.通化東寶藥業(yè)股份有限公司，吉林 通化 134000；2.北京昭衍新藥研究中心股份有限公司，北京 100176）

1980 年，世界衛(wèi)生組織（WHO）估計(jì)有1.08億人患有糖尿病，在2014年這個(gè)數(shù)字增加了4倍[1]。國(guó)際糖尿病聯(lián)盟報(bào)告，目前18-99歲成年人的糖尿病患病率約為8.4%，預(yù)計(jì)到2045年將上升至9.9%[1]。GLP-1受體激動(dòng)劑可有效降低血糖，并有顯著降低體重和改善TG、血壓、和體重的作用。單獨(dú)使用GLP-1受體激動(dòng)劑不會(huì)增加低血糖風(fēng)險(xiǎn)[2]。并有研究報(bào)道，在伴有心血管病史或心血管危險(xiǎn)因素的2型糖尿病患者中使用，具有有益的作用及安全性[3]。

本研究通過對(duì)正常ICR小鼠單次皮下注射不同劑量的利拉魯肽注射液，及對(duì)II型糖尿病db/db小鼠及KKay小鼠多次皮下注射不同劑量的利拉魯肽注射液，觀察其降糖作用，并與諾和力進(jìn)行比較，旨在為其在臨床中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 正常ICR小鼠（24.3-35.0 g）購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證編號(hào)SCXK（京）2012-0001，飼養(yǎng)于北京昭衍新藥研究中心股份有限公司SPF級(jí)動(dòng)物房。

II型糖尿病db/db小鼠（36.4-48.0 g）購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部，許可證編號(hào)SCXK（京）2011-0012，飼養(yǎng)于北京昭衍新藥研究中心股份有限公司SPF級(jí)動(dòng)物房。II型糖尿病KKAy小鼠（30.3-48.3 g）購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證編號(hào)SCXK（京）2014-0004，飼養(yǎng)于北京昭衍新藥研究中心股份有限公司SPF級(jí)動(dòng)物房。

利拉魯肽注射液（批號(hào)LU12016050012，3 mL:18 mg）和溶媒（批號(hào)MLU12016050012）由通化東寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，2-8oC保存；諾和力（Victoza，批號(hào)EP51492-1，3 mL:18 mg）由諾和諾德生產(chǎn)，2-8oC保存。

主要儀器有：德國(guó)羅氏診斷有限公司生產(chǎn)的卓越精采型血糖儀及配套試紙。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 利拉魯肽注射液對(duì)正常ICR小鼠非禁食血糖PBG和糖耐量OGTT血糖變化的影響：動(dòng)物在SPF級(jí)動(dòng)物房適應(yīng)性飼養(yǎng)后，按照體重采用隨機(jī)分組為7組（n=20），分別為利拉魯肽注射液（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組、諾和力（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組及溶媒組（模型對(duì)照組）。每組10只動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)前禁食過夜，自由飲水，尾尖采血，測(cè)定空腹血糖FBG（0 h），單次皮下注射給藥，分別在藥后3 h、6 h、24 h進(jìn)行糖耐量OGTT檢測(cè)，在糖負(fù)荷前0 min、糖負(fù)荷后30 min、60 min和120 min采血，測(cè)定血糖。每組另外10只動(dòng)物單次皮下注射給藥，在給藥后1 h、3 h、6 h、10 h、24 h采血測(cè)定非禁食血糖。

1.2.2 利拉魯肽注射液對(duì)II型糖尿病db/db小鼠糖耐量OGTT后血糖變化的影響：動(dòng)物在SPF級(jí)動(dòng)物房適應(yīng)性飼養(yǎng)后，在分組前檢測(cè)空腹血糖并稱重，選擇血糖和體重相近的10只C57BL/6小鼠作為正常對(duì)照組，選擇血糖和體重相近的70只db/db小鼠隨機(jī)分為7組（n=10），分別為利拉魯肽注射液（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組、諾和力（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組及溶媒組（模型對(duì)照組）。皮下注射給藥，每天給藥1次，連續(xù)給藥42 d。D1、D4、D7、D14、D21、D28、D41進(jìn)行口服糖耐量實(shí)驗(yàn)（OGTT）并計(jì)算葡萄糖曲線下面積（G-AUC）。D20進(jìn)行口服胰島素耐量實(shí)驗(yàn)（ITT）。于給藥后1周內(nèi)進(jìn)行攝食量和攝水量測(cè)定。

1.2.3 利拉魯肽注射液對(duì)II型糖尿病KKAy小鼠糖耐量OGTT后血糖變化的影響：動(dòng)物在SPF級(jí)動(dòng)物房適應(yīng)性飼養(yǎng)后，在分組前檢測(cè)空腹血糖并稱重，選擇血糖和體重相近的10只C57BL/6小鼠作為正常對(duì)照組，選擇血糖和體重相近的70只KKAy小鼠隨機(jī)分為7組（n=10），分別為利拉魯肽注射液（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組、諾和力（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組及溶媒組（模型對(duì)照組）。皮下注射給藥，每天給藥1次，連續(xù)給藥42 d。D1、D4、D7、D14、D21、D28、D41進(jìn)行口服糖耐量實(shí)驗(yàn)（OGTT）并計(jì)算葡萄糖曲線下面積（G-AUC）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，以（Mean±SD）來表示。用單因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，如果ANOVA 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）且方差齊性，用 LSD test進(jìn)行組間比較分析。

2 結(jié)果

2.1 利拉魯肽注射液對(duì)正常ICR小鼠非禁食血糖PBG和OGTT后血糖變化的影響 與溶媒組比較，利拉魯肽注射液0.03、0.1、0.3 mg/kg 皮下注射后均能夠降低ICR小鼠PBG，與相同劑量的諾和力比較，降低作用和作用特點(diǎn)相似。利拉魯肽在3 h、6 h的OGTT荷糖后G-AUC呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性降低，藥后24 h各給藥組對(duì)G-AUC的降低作用出現(xiàn)回落（圖1和2）。

2.2 利拉魯肽注射液對(duì)II型糖尿病db/db小鼠OGTT后血糖變化的影響 與溶媒組相比，利拉魯肽注射液和諾和力組的血糖和G-AUC在各時(shí)間點(diǎn)均呈劑量依賴性降低，降低幅度隨時(shí)間推移有逐漸減小的趨勢(shì)，相同劑量下供利拉魯肽注射液和諾和力組間無明顯差異（圖3）。利拉魯肽注射液和諾和力各劑量組攝食量和攝水量均低于模型對(duì)照組且呈現(xiàn)明顯劑量依賴關(guān)系（圖4）。胰島素耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與溶媒組相比，利拉魯肽注射液和諾和力各劑量組均出現(xiàn)劑量依賴性顯著降低（P＜0.05），與相同劑量的諾和力比較，降低作用和作用特點(diǎn)相似（圖5）。

2.3 利拉魯肽注射液對(duì)II型糖尿病KKAy小鼠OGTT后血糖變化的影響 與溶媒組相比，利拉魯肽注射液和諾和力組的血糖和G-AUC在各時(shí)間點(diǎn)均呈劑量依賴性降低，相同劑量下利拉魯肽注射液和諾和力組間無明顯差異（圖6）。與溶媒組相比，利拉魯肽注射液和諾和力各劑量組G-AUC均出現(xiàn)劑量依賴性降低。

3 討論

利拉魯肽是在胰高血糖素樣肽-1（GLP-1，7-37）基礎(chǔ)上進(jìn)行修飾的產(chǎn)物，是一個(gè)長(zhǎng)效GLP-1類似物，與天然人GLP-1就有97%的同源性，并可避免被DPP-4酶水解。利拉魯肽降糖和減肥適應(yīng)證，都已被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局FDA批準(zhǔn)[4]。

GLP-1受體激動(dòng)劑作用機(jī)制：（1）降糖作用機(jī)制，包括促進(jìn)胰島素生物合成和分泌、抑制胰升血糖素分泌、保護(hù)β細(xì)胞、抑制肝臟葡萄糖生成、抑制食欲、延緩胃排空和胃腸蠕動(dòng)；（2）減重作用機(jī)制，包括增加飽食感、增加能量消耗、作用于胃腸道。利拉魯肽作為新型的2型2型糖尿病治療手段，在臨床上應(yīng)用越來越廣泛。《中國(guó)2型糖尿病防治指南（2017年版）》也將其列入二聯(lián)降糖治療選擇之一[5]。

本研究中的利拉魯肽注射液在0.03-0.3 mg/kg劑量范圍內(nèi)能夠降低正常ICR小鼠、II型糖尿病db/db小鼠和KKAy小鼠OGTT后的血糖和AUC，提示其能控制糖尿病患者的餐后血糖，且血糖的降低作用及作用特點(diǎn)，包括起效時(shí)間、作用強(qiáng)度和時(shí)程等都與相同劑量的諾和力相當(dāng)。