HPLC法測(cè)定參麥地黃丸中毛蕊花糖苷含量的研究

佘雪花　潘馨

【摘 要】 目的：建立測(cè)定參麥地黃丸中毛蕊花糖苷的含量測(cè)定方法。方法：采用HPLC法，流動(dòng)相為乙腈-0.1%冰醋酸溶液（14∶[KG-*3/5]86），色譜柱為ChromCoreTMC18（5μm，4.6×250mm），流速1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20μL。結(jié)果：毛蕊花糖苷在2.13～106.4μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r=0.9992），平均加樣回收率在97.63%，RSD為0.63%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，且重現(xiàn)性好，為參麥地黃丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。

【關(guān)鍵詞】 參麥地黃丸;毛蕊花糖苷;HPLC;含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2020）4-0032-03

Application of HPLC in the Verbascoside Content Determination of ShenmaiDihuang Pills

SHE Xuehua PAN Xin*

School of Pharmacy，F(xiàn)ujian University of Traditional Chinese Medicine ，F(xiàn)uzhou350122，China

Abstract：Objective To establish a method for the Verbascoside content determination in Shenmai Dihuang Pills.Methods High performance liquid chromatography method was used with Chrom CoreTMC18（250mm×4.6mm，5μm）.The mobile phase was a mixture of acetonitrile-water（0.1%） glacial acetic acid（14∶[KG-*3/5]86）.Flow rate was 1.0mL/min ，the detection wave length at 334nm，.Column temperature was 30℃and sample loop volume was 20 μL.Results The calibration curve was linear within the range of 2.13～106.4μg/mL of Verbascoside（r=0.9992），the average recovery rate was 97.63%，RSD was 0.63%.Conclusion The method isprecise and reliable，which can be used for the quantitation control of Shenmai Dihuang Pills.

Key words：ShenmaiDihuang Pills;Verbascoside;HPLC; Content Determination

參麥地黃丸始載于清代張秉成《成方便讀》，是補(bǔ)益劑中補(bǔ)陰劑的代表方，由熟地黃、山藥、山茱萸、澤瀉、茯苓、牡丹皮、麥冬、北沙參八味中藥組成[1]。參麥地黃丸具有養(yǎng)陰潤(rùn)肺之功效，臨床上主要用于肺腎兩虛、咳嗽氣喘、咽干口燥[2-3]。其中，熟地黃滋腎填精為主藥，毛蕊花糖苷常被作為熟地黃質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分，具有抗氧化、增強(qiáng)免疫功能等作用[4-5]。目前參麥地黃丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有丸劑的常規(guī)制劑檢查項(xiàng)，缺少有效成分的含量控制[1]。為更好控制參麥地黃丸的質(zhì)量，本研究建立了HPLC法測(cè)定其毛蕊花糖苷含量，以期進(jìn)一步提高參麥地黃丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 日本島晶LC-20AT高效液相色譜儀;在線脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、DAD檢測(cè)器、LCsolution工作站（島晶制造）;數(shù)控超聲波清洗器KQ-500DE型（昆山市超聲儀器有限公司）;OHAUS型萬分之一電子分析天平（奧豪斯儀器（常州）有限公司）;Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國(guó)，Millipore公司）。

1.2 材料 參麥地黃丸由福州海王金象中藥制藥有限公司生產(chǎn)提供（批號(hào)：1905071、1905072、1904162、1905081、1904152）;毛蕊花糖苷對(duì)照品（批號(hào)：AF8051802），購(gòu)自成都埃法生物科技有限公司;乙腈為色譜純（天津市福晨化學(xué)試劑廠），冰醋酸為分析純（天津市福晨化學(xué)試劑廠），水為自制超純水，其余試劑均為分析純（天津市福晨化學(xué)試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取毛蕊花糖苷2.66mg，置于25mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。再精密量取1mL置10mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，配制成10.64μg/mL對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉約10g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇100mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，用甲醇定容，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50mL，減壓回收溶劑近干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例稱取參麥地黃丸處方飲片（除熟地外），按照制備工藝制成參麥地黃丸缺熟地的陰性樣品，并按上述供試品溶液制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Chrom Core TMC18 （5μm，4.6×250mm）;流動(dòng)相：乙腈-0.1%冰醋酸溶液 （14∶[KG-*3/5]86）;流速：1.0mL/min;柱溫：30℃。檢測(cè)波長(zhǎng)：334nm;進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)按毛蕊花糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000[6]。

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析，在該色譜條件下，供試品中毛蕊花糖苷與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致，與相鄰峰的分離度大于1.5，陰性對(duì)照品溶液未見該峰，說明陰性無干擾。色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2mL、1mL、4mL、6mL、8mL置10mL容量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度，配制成2.13μg/mL、10.64μg/mL、42.56μg/mL、63.84μg/mL、85.12μg/mL的濃度。按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定，以峰面積（mAU）為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的毛蕊花糖苷對(duì)照品濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=30347x+135606，r=0.9992。毛蕊花糖苷在2.13～106.4μg/mL范圍呈線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，測(cè)得毛蕊花糖苷峰面積的RSD為1.47%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)參麥地黃丸供試品溶液室溫下放置，分別于0，2，4，8，12，24 h，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定毛蕊花糖苷峰面積，計(jì)算RSD為1.77%。表明供試品溶液中毛蕊花糖苷在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)參麥地黃丸（201904152），稱取5份，每份約10g，精密稱定，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。測(cè)得毛蕊花糖苷平均含量為0.0474mg/g，RSD為1.56%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批號(hào)參麥地黃丸（201904152），采用加樣回收試驗(yàn)，精密加入一定量毛蕊花糖苷對(duì)照品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果毛蕊花糖苷平均回收率（n=6）為97.63%，RSD為0.63%。表明本法具有較好的加樣回收率。見表1。

2.9 樣品含量測(cè)定 取5批樣品（批號(hào)：1905071、1905072、1904162、1905081、1904152），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算含量，樣品含量測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

熟地黃為參麥地黃丸的主藥，熟地黃中有效成分含量直接關(guān)系到藥品的療效。2015版《中國(guó)藥典》將毛蕊花糖苷作為評(píng)價(jià)熟地黃的指標(biāo)性成分，規(guī)定其含量不少于0.020%[7]。故本實(shí)驗(yàn)通過建立HPLC法測(cè)定參麥地黃丸中毛蕊花糖苷含量。在對(duì)毛蕊花糖苷的分離試驗(yàn)中，考察了乙腈—水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-冰醋酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相為乙腈-0.1%冰醋酸溶液（14∶[KG-*3/5]86），分離效果較好。對(duì)毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液進(jìn)行掃描，在334nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故以334nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。本研究通過測(cè)定參麥地黃丸中毛蕊花糖苷的含量，為本制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)，后期課題組將繼續(xù)研究其他成分含量測(cè)定，以不斷提高參麥地黃不同制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2019-11-25 編輯：劉 斌）

基金項(xiàng)目：福建省科技廳福建省高校產(chǎn)學(xué)合作項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2019Y4008）。

作者簡(jiǎn)介：佘雪花（1989-），女，漢族，碩士，主管藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┘百|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：742912622@qq.com;

通信作者：潘馨（1964-），女，漢族，本科，研究員，研究方向?yàn)橹兴幹苿┘百|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：358317515@qq.com