丁香油對俄羅斯鱘幼魚血液生化指標的影響

李泊巖，高 喬，姜志強

（大連海洋大學農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室，遼寧省北方魚類應用生物學與增養(yǎng)殖重點實驗室，遼寧 大連 116023)

俄羅斯鱘（Acipenser gueldenstaedtii）又稱俄國鱘，屬硬骨魚綱鱘形目鱘科鱘屬。其食用價值高，可食部分占總體重60%左右，魚肉和魚子醬制品暢銷；干制鰾可用來生產(chǎn)強力膠，精巢可治療燒傷。俄羅斯鱘體重增長快、環(huán)境適應性強，已成為我國當前鱘類養(yǎng)殖的主要品種之一。麻醉劑的合理使用可以降低魚體在人工操作時的應激反應，使操作順利進行。此外，在水體中添加適量的麻醉劑能減弱運輸過程中魚體的新陳代謝速度，降低活魚運輸過程中魚體興奮并減少魚體游動時造成的體表損傷，提高運輸存活率。

丁香油應用于魚類的常用麻醉劑主要有效成分為丁香酚，學名：2-甲氧-4-烯丙基苯油，屬植物香料。丁香酚及其衍生物能夠快速地從血液和組織中排出，不會誘發(fā)機體產(chǎn)生突變物質(zhì)。研究表明，丁香酚有抑制真菌、抗氧化和抗腫瘤的作用，醫(yī)學上已將其作為牙科鎮(zhèn)痛劑被廣泛應用。很多國家已將丁香油作為合法的水產(chǎn)動物麻醉劑，魚類麻醉常采取藥液浸泡的方式進行。在親魚采卵和活魚運輸中，國內(nèi)學者對丁香酚麻醉暗紋東方魨幼魚、斑點叉尾鮰、大瀧六線幼魚、鯔魚、刀鱭幼魚、大西洋鮭、美洲鰣幼魚等已開展了大量研究。

作為魚體內(nèi)環(huán)境的重要組成部分，血液是由血漿和血細胞組成的流體組織，具有運輸、防御和免疫、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和參與體液調(diào)節(jié)等多種功能。血液生化指標能反映出魚類的生理狀態(tài)并評價其健康狀況，麻醉藥物進入魚體后主要通過肝臟代謝，而魚體內(nèi)代謝產(chǎn)物的排泄主要通過腎臟完成，因此麻醉過程會對魚體的肝腎功能造成影響。本研究通過對丁香油麻醉俄羅斯鱘過程中和麻醉復蘇后相關血液生化指標的測定，分析其變化過程，綜合評估丁香油對俄羅斯鱘的應激反應及對肝腎等器官功能的影響，為生產(chǎn)應用提供技術依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

俄羅斯鱘幼魚：購自遼寧省大連市某養(yǎng)殖場。

試驗器材：溶菌酶檢測試劑盒，由南京建成生物科技公司生產(chǎn)；48 L水槽、1 mL無菌注射器、冰盤、分析天平、冷凍離心機、2 mL離心管、各規(guī)格微量移液槍、0.5 cm及1 cm比色皿和722分光光度計等。

1.2 試驗設計

試驗設3組處理。（1）空白對照組：水中檢測無麻醉劑；（2）A組：低濃度丁香油組，丁香油溶液濃度為80 mg·L-1；（3）B組：高濃度丁香油組，丁香油溶液濃度為120 mg·L-1。每組各10尾，體長（26.83±5.42）cm，體重（70.91±8.93）g。

1.3 試驗方法

1.3.1 丁香油溶液的配制 稱取25 g丁香油在燒杯中用無水乙醇定容至250 mL，配制成0.1 g·mL-1的丁香油麻醉劑母液，配置足量的母液在4 ℃冰箱內(nèi)保存以備多次使用。試驗前用移液管準確移取一定量的母液配成所需濃度的丁香油溶液，充分攪拌均勻后放置10 min左右。

1.3.2 麻醉處理 選擇健康無病、符合試驗規(guī)格的俄羅斯鱘幼魚30尾，于150 L水槽中暫養(yǎng)，試驗用水為經(jīng)24 h以上曝氣的自來水，水溫13 ℃，pH值7.6～7.8，D0＞8 mg·L-1，正常攝食后試驗前停食1 d。將隨機選取的30尾試驗魚分別放入不同丁香油濃度的3組40 L塑料箱中，每組放入試驗魚10尾，試驗前采血檢測空白組俄羅斯鱘幼魚。待A組和B組魚體對外部刺激失去反應能力、鰓蓋張合微弱且沉底不動后即深度麻醉，開始計時，10 min后每組隨機取5尾魚進行采血即麻醉中血液樣本，另將各組尚未采血的5尾魚分別放入清水中復蘇，24 h后采血即為麻醉后血液樣本。

1.3.3 血液采集 將試驗魚撈出，用無菌紗布裹住頭部，采用1 mL注射器從尾部靜脈采血，轉(zhuǎn)移至2 mL離心管，室溫靜置10 min， 12 000 r·min-1離心5 min，取上層澄清液，分裝成3份樣品，-20 ℃溫度條件下保存，待測。

1.3.4 血液及血清生化指標測定 血清提取后置于-20 ℃冰箱內(nèi)，次日送至大連市體檢中心檢測血清生化指標。測定的指標包括血糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST）、總蛋白（TP）、堿性磷酸酶(AKP)、總膽紅素（T-BIL）、尿素氮（BUN）、溶菌酶（LZM）。其中，由于俄羅斯鱘血清顯色，血清溶菌酶（LZM）活性的測定采用自身對照法，即在一定濃度的混濁菌懸液中，溶菌酶水解細菌細胞壁中的黏多肽，液體透光度逐漸增強，由此根據(jù)濁度變化推測溶菌酶含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS statistics 19.0處理，在單因素方差分析（One-way ANOVA）的基礎上采用Duncan多重比較進行方差分析，數(shù)據(jù)表示為平均值±標準差（Mean±SD，n=5）。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁香油麻醉前后俄羅斯鱘幼魚的血液生化指標（表1）

2.2 丁香油對俄羅斯鱘血糖（GLU）含量的影響

圖1所示，A和B組樣品中的GLU均高于對照組。A組麻醉中和麻醉后高于對照組血糖含量，差異顯著，且麻醉后略高于麻醉中；B組麻醉中血糖含量稍高于對照組，差異不顯著，B組麻醉后樣品血糖含量高于麻醉中和對照組，差異顯著。泌，魚鰓上皮滲透性的增加調(diào)節(jié)尿量的增減。而A組麻醉中血清BUN含量的增加可能是由于在該丁香油濃度下，麻醉初期魚體因亢奮應激排尿量增加，而深麻后這些代謝產(chǎn)物又因進入麻醉狀態(tài)，不能有效排泄出體外而導致尿素氮含量增加。其余試驗組中BUN含量均顯著低于對照組。說明在丁香油作用下鰓運動的頻率降低，鰓與外界水的交換減少，導致缺氧引起血液酸化。復蘇24 h后，血清尿素氮含量仍低于對照組，說明此濃度的麻醉藥對魚的腎功能仍有一定的影響。

表1 丁香油麻醉前后俄羅斯鱘幼魚的血清生化指標

3.2 試驗表明，丁香油麻醉中和麻醉后均高于對照組血清中的GLU含量，說明丁香油影響了魚體的正常糖代謝。丁香油低濃度組血糖含量顯著高于對照組，而丁香油高濃度組與對照組差異不顯著。可能在這種濃度下，麻醉劑對魚的刺激性更強，應激反應使魚消耗大量能量來維持特定水平的血糖。麻醉后高濃度組魚的GlU水平顯著高于對照組，說明麻醉在血清中的富集對魚肝功能的糖原轉(zhuǎn)化有一定影響。試驗表明，丁香油麻醉中組對TC影響不顯著；麻醉后血清中TC含量顯著高于麻醉中和對照組。丁香油麻醉中血清TG含量均低于對照組，差異不顯著；A組麻醉后血清中TG含量能回到正常水平。

肝功能代謝的強弱可以反應血清中總蛋白（TP）的含量高低。測定結(jié)果顯示，丁香油組麻醉中和麻醉后TP含量顯著高于對照組。測定顯示A組和B組血清的T-BIL含量與對照組差異不顯著，麻醉中的總膽紅素略高于對照組，說明丁香油可能會加快細胞衰老。上述血液生化指標的變化表明在丁香油麻醉過程中肝功能受到一定影響。

3.3 魚體血清中的AST和ALT主要存在于細胞中且活性很低，在一些組織疾病中，細胞通透性增加導致ALT和AST釋放到血液中，血清中ALT和AST活力升高。試驗顯示，血清中ALT含量在丁香油麻醉中與對照組差異不顯著，但麻醉后顯著高于對照組，而AST含量丁香油低濃度組與對照組差異不顯著，高濃度組與對照組差異顯著。丁香油麻醉低濃度組對魚體血清AKP無顯著影響，而對高濃度組影響顯著，復蘇24 h后AKP水平仍顯著低于對照組，該濃度麻醉劑對魚體影響顯著。丁香油A組麻醉俄羅斯鱘幼魚時，麻醉中血清LZM活性高于對照組，麻醉后回歸正常水平。而B組麻醉俄羅斯鱘幼魚時，麻醉中血清LZM活性低于對照組，差異不顯著。

3.4 低濃度的丁香油麻醉對俄羅斯鱘幼魚的免疫力具有一定的刺激作用，而高濃度的丁香油引起的毒性可能超過俄羅斯鱘幼魚的生理調(diào)節(jié)范圍，導致免疫水平低于對照組，損害魚類的免疫力。因此，實際應用中，應選擇一定劑量的丁香油濃度，以達到俄羅斯鱘幼魚刺激效應的高峰，提高免疫力。