丁香油對斑馬魚麻醉效果的研究

包 杰，燕偉山，姜宏波，盧煥云，于業(yè)輝

（沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽 100866）

關(guān)于麻醉劑對魚類麻醉效果的研究、麻醉劑對血液成分的影響以及對麻醉作用機(jī)制、代謝途徑、喝麻醉劑的安全范圍的研究國內(nèi)外已有很多報(bào)道。目前魚用麻醉劑有近30種，但有些麻醉劑的麻醉效果不甚理想，有些對魚體安全性不可靠或者價(jià)格昂貴。丁香油為淡黃或無色的澄明油狀液，不溶于水，易溶于醇、醚或冰醋酸。丁香油由于其成本低、高效性以及較高的安全性被廣泛地應(yīng)用于親魚采卵、活魚運(yùn)輸以及活體手術(shù)過程等養(yǎng)殖生產(chǎn)和科學(xué)研究操作中[1-5]。李春梅等[6]在丁香油對鯽魚、錦鯉麻醉的效果中發(fā)現(xiàn)，隨著丁香油藥液濃度的升高，鯽魚、錦鯉麻醉所需時(shí)間不斷縮短，兩者呈負(fù)相關(guān)。黃雪芹等[7]用不同濃度的丁香油麻醉中國對蝦幼蝦發(fā)現(xiàn)，在50～400 mg/L的濃度范圍內(nèi)，隨著丁香油濃度的增加，對蝦麻醉所需的時(shí)間縮短，而復(fù)蘇所需的時(shí)間不斷增加；丁香油濃度低于200 mg/L時(shí)，麻醉對蝦的復(fù)蘇率可達(dá)100%；而在400 mg/L的藥液麻醉時(shí)，對蝦的復(fù)蘇率僅有66.67%。由于斑馬魚是目前科研應(yīng)用極其廣泛的模式生物，因此，本試驗(yàn)以斑馬魚為研究對象，研究不同水溫和不同濃度的丁香油對斑馬魚的麻醉效果，以期為丁香油應(yīng)用于斑馬魚麻醉研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料 斑馬魚（Danio rerio）購于水族零售市場，共150尾，體格健壯，全長1.3～2.2 cm、體重0.12～0.29 g，用塑料袋運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行暫養(yǎng)5 d，暫養(yǎng)溫度為23℃，試驗(yàn)前1 d停食使其排空糞便并適應(yīng)環(huán)境后用于試驗(yàn)。

1.1.2 丁香油 丁香油（上海齒科材料廠生產(chǎn)），其有效成分是丁香酚，為淡黃色的油狀液體，不易溶于水。使用時(shí)按質(zhì)量1:9比例溶于酒精中，將此比例溶解的丁香油作為母液，靜置10 min后配置不同的試驗(yàn)濃度。

1.2 試驗(yàn)方法 試驗(yàn)設(shè)置4個(gè)溫度處理組（23℃和27℃）和4個(gè)丁香油濃度處理組（20、40、60和80 mg/L）共8個(gè)溫度、丁香油濃度組合。每個(gè)處理組選取泥鰍10尾，分別放置在8個(gè)1 000 mL的燒杯中，記錄試驗(yàn)?zāi)圉q的麻醉時(shí)間和蘇醒時(shí)間。麻醉時(shí)間是指魚被放入麻醉劑溶液開始到魚體側(cè)翻的時(shí)間。將被麻醉的魚從藥液中取出放回到清水中，從這一時(shí)間起到能看到魚開始以正常姿勢游泳所需的時(shí)間為復(fù)蘇時(shí)間。

1.3 數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0軟件處理，采用ANOVA-LSD方法進(jìn)行差異性分析，以P＜0.05作為差異顯著的標(biāo)志。

2 結(jié)果與分析

2.1 斑馬魚在麻醉階段和恢復(fù)階段的行為特征 斑馬魚在丁香油麻醉作用下的麻醉行為：在高濃度丁香油中（80 mg/L）斑馬魚行為表現(xiàn)最為激烈，有狂游行為，但很快恢復(fù)平靜狀態(tài)，鰓蓋停止張合；在低濃度丁香油中斑馬魚的行為表現(xiàn)相對平靜，其圍繞燒杯緩慢游動，而后逐漸減緩游動，身體失去平衡，側(cè)游或仰游，最后停止游動，鰓蓋仍有張合。斑馬魚在丁香油麻醉作用下蘇醒行為：麻醉的斑馬魚放入清水后初期表現(xiàn)為不動，后逐漸恢復(fù)知覺，鰓蓋恢復(fù)張合，開始倒游，身體逐漸恢復(fù)平衡。

2.2 不同溫度和不同濃度丁香油對斑馬魚麻醉效果的影響 不同溫度和不同濃度丁香油對斑馬魚麻醉時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間的影響見表1。

表1 溫度和不同濃度丁香油對斑馬魚的麻醉效果Tab le1 Effect oftemperatures and concentrations of clove oil on the anesthetic tim e and recovery tim e of Danio rerio

研究結(jié)果表明，在23℃和27℃下，斑馬魚的麻醉時(shí)間均隨著丁香油濃度的增加而縮短，麻醉時(shí)間變化范圍分別為0.6～7.6 min和0.4～6.9 min；蘇醒時(shí)間則隨著丁香油濃度的增加而延長，蘇醒時(shí)間變化范圍分別為1.1～2.5 min和0.8～1.8 min。方差分析表明，在23℃和27℃溫度下，斑馬魚的麻醉時(shí)間在20 mg/L濃度處理組最長，顯著高于其他濃度處理組（P＜0.05）；復(fù)蘇時(shí)間在20 mg/L濃度處理組下最短，顯著低于其他濃度處理組（P＜0.05）。同一濃度下，斑馬魚的麻醉時(shí)間和蘇醒時(shí)間均隨溫度的升高而縮短。

3 討論

3.1 不同濃度丁香油對斑馬魚麻醉效果的影響Dong-Won Seol1等[8]用丁香油（麻醉成分為丁香油）麻醉章魚，認(rèn)為200 mg/L的丁香油能快速地麻醉章魚并能在較短的時(shí)間內(nèi)從麻醉狀態(tài)中恢復(fù)。張富林等[9]研究表明，20 mg/L、40 mg/L對鯉的麻醉效果最好，l0 mg/L、20 mg/L濃度丁香油對鯉的麻醉效果與50 mg/L、l00 mg/L MS-222的濃度大致相當(dāng)，但是丁香油濃度超過160 mg/L對鯉進(jìn)行麻醉是不安全的。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在一定丁香油濃度范圍內(nèi)（20～80 mg/L），隨著丁香油藥液濃度的增加，麻醉斑馬魚所需的時(shí)間逐漸縮短，復(fù)蘇所需時(shí)間不斷增加。在80 mg/L下，有死亡現(xiàn)象發(fā)生，其他處理組復(fù)活率均為100%，因此，丁香油濃度超過80 mg/L對斑馬魚進(jìn)行麻醉具有不安全性。麻醉時(shí)間在20 mg/L時(shí)與其他處理組之間差異均極顯著，但其他組之間差異不顯著，這表明40 mg/L時(shí)為斑馬魚的最適濃度，高濃度對斑馬魚的麻醉效果不明顯。復(fù)蘇時(shí)間除在60 mg/L和80 mg/L下不顯著外其他各組之間差異顯著。丁香油濃度在40～60 mg/L時(shí)復(fù)蘇率達(dá)到100%且都較容易進(jìn)入深度麻醉，這與甘靜雯等[10]研究150～200 mg/L MS-222全體斑馬魚可短時(shí)間內(nèi)迅速進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)的研究結(jié)果相識，表明丁香油對斑馬魚具有很好的麻醉效果，麻醉的濃度較低，麻醉作用強(qiáng)，且對比MS-222具有價(jià)格較低、使用方便、效果良好的優(yōu)點(diǎn)，更適合用于斑馬魚的麻醉。

3.2 不同溫度對斑馬魚麻醉效果的影響 水溫是影響麻醉劑麻醉效果的一個(gè)重要環(huán)境因素。趙艷麗等[11]用丁香油麻醉大黃魚發(fā)現(xiàn)，水溫25～27℃時(shí)，5 mg/L丁香油可在1 min內(nèi)使大黃魚魚種進(jìn)入麻醉狀態(tài)，入水后3 min左右復(fù)蘇。杜浩等[12]發(fā)現(xiàn)MS-222在同一濃度下，溫度越高，美洲鰣達(dá)到麻醉狀態(tài)各階段的時(shí)間越短，完全復(fù)蘇則所需要的時(shí)間越長。本試驗(yàn)中水溫對麻醉效果的影響表明，在相同濃度麻醉劑的作用下，隨水溫的升高（23～27℃），麻醉所需的時(shí)間和蘇醒時(shí)間均縮短，即隨水溫的升高同種劑量的丁香油的麻醉效果增強(qiáng)，這可能是在高水溫時(shí)，魚體代謝旺盛，心跳和呼吸頻率加快，麻醉藥液經(jīng)鰓絲滲透的速率亦加快，故隨著溫度的升高，在相同的麻醉劑含量下，魚體達(dá)到各麻醉階段的時(shí)間均縮短；在低水溫時(shí)，魚體對麻醉藥物的吸收率降低，麻醉所需劑量高或者浸泡時(shí)間長[13]，因此，隨水溫的升高使其對斑馬魚的麻醉效果得以提高，即麻醉時(shí)間隨之縮短，與此同時(shí)，當(dāng)水溫升高時(shí)，作用于魚體的麻醉劑藥效減失加快，故將一經(jīng)麻醉的斑馬魚轉(zhuǎn)入清水后，其蘇醒時(shí)間也就隨之縮短。

4 結(jié)論

丁香油濃度對斑馬魚具有很好的麻醉效果，丁香油濃度為40 mg/L下斑馬魚麻醉效果較好。斑馬魚的麻醉時(shí)間和蘇醒時(shí)間均隨溫度的升高而縮短。

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