太子參多糖治療大鼠糖尿病足潰瘍研究

王林莉 龐文生 胡娟

【摘 要】 目的：建立大鼠糖尿病足潰瘍模型，用太子參多糖進(jìn)行治療，探討太子參多糖治療大鼠糖尿病足潰瘍的藥效。方法：通過腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin， STZ）制備大鼠高血糖模型，注射72h后，連續(xù)3d監(jiān)測(cè)空腹血糖值在10～25mmol/L為高血糖模型成功大鼠;采用足部全層皮膚切除法，制備大鼠足潰瘍模型。實(shí)驗(yàn)大鼠分為空白組（生理鹽水外涂）、模型組（生理鹽水外涂）、金因肽陽性組（重組人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子外用溶液）、太子參多糖外用組（太子參多糖溶液外涂）。每天觀察創(chuàng)面愈合情況，給藥后第7d及第14d，監(jiān)測(cè)大鼠空腹血糖，采集創(chuàng)面照片，以Image-pro plus獲取圖像數(shù)據(jù)，計(jì)算創(chuàng)面愈合率。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)，空白對(duì)照組大鼠血糖均處于正常水平[（4.43±0.52）～（4.59±0.43）]，高血糖模型組大鼠血糖一直維持在較高水平[（16.94±4.09）～（23.61±3.43）]。給藥后第7d、14d，太子參多糖外用組創(chuàng)面愈合率明顯好于模型組（P<0.05），且與陽性組相差不大（P>0.05）。給藥周期內(nèi)各組大鼠足潰瘍創(chuàng)面愈合的效果為：空白對(duì)照組>金因肽陽性組>太子參多糖外用組>模型組。結(jié)論：太子參多糖具有促進(jìn)高血糖大鼠足潰瘍創(chuàng)面愈合的藥效。

【關(guān)鍵詞】 太子參多糖;糖尿病足潰瘍;血糖值;創(chuàng)面愈合率

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2020）3-0013-05

Abstract：Objective The model of diabetic foot ulcer in rats was established and treated with Polysaccharide fromPseudostellaria heterophyllato explore the efficacy of Polysaccharide in the treatment of diabetic foot ulcer in rats.Methods The rat hyperglycemic model is prepared by intraperitoneal injection of streptozoin （40mg/kg）.Fasting blood glucose was monitored for 3 days after 72 hours of injection，and the blood glucose value between 10-25mmol/l was successful in hyperglycemia model.The rat model of foot ulcer was established by full-thickness skin resection of foot.The experimental rats were divided into four groups，the rats in the blank control group and model group were treated with saline.The positive group was treated with recombinant human epidermis growth factor solution.The external application group of Polysaccharide from Pseudostellaria heterophylla was coated with Polysaccharide solution of Pseudostellaria heterophylla.The wound healing was observed every day.On the 7th and 14th day after administration，fasting blood glucose was monitored， wound photos were collected， and then the image data were obtained by Image-pro plus to calculate the wound healing rate.Results In the experimental period， the blood glucose of the rats in the blank control group was at normal level[（4.43±0.52～4.59±0.43）]， and the blood glucose of the rats in the model group was maintained at a higher level[（16.94±4.09）～（23.61±3.43）].On the 7th and 14th day after administration，the wound healing rate in the external use group was significantly better than that in the model group（P<0.05），and was not significantly different from that in the positive group（P>0.05）.The effect of the wound healing of each group of the rats in the administration period was as follows：The blank control group>The positive group>The Pseudostellaria heterophylla polysaccharide group>The model group.Conclusion Pseudostellaria heterophylla polysaccharide has the effect of promoting the wound healing of foot ulcer in hyperglycemia rats.

2.3 分組及給藥 32只Wistar雄性大鼠分為4組，其中空白對(duì)照組8只，其余24只高血糖模型大鼠隨機(jī)分為模型組、金因肽外用陽性組、太子參多糖外用組，每組8只?？瞻讓?duì)照組大鼠給予等體積生理鹽水外用，模型組大鼠給予等體積生理鹽水外用，金因肽外用陽性組大鼠給予重組人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子外用溶液局部均勻噴濕創(chuàng)面，每日1次，約4000IU/10×10cm2，太子參多糖外用組大鼠足潰瘍創(chuàng)面給予太子參多糖外涂，每天2次。

2.4 大鼠糖尿病及糖尿病足潰瘍模型指標(biāo)測(cè)定

2.4.1 血糖 測(cè)定大鼠連續(xù)給藥周期內(nèi)監(jiān)測(cè)其空腹血糖的變化情況，每隔7d，各組均禁食不禁水6h，尾靜脈采血，血糖儀測(cè)定空腹血糖值。

2.4.2 大鼠體征的觀察及體重測(cè)定 觀察大鼠是否出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體重減輕的“三多一少”癥狀。連續(xù)給藥周期內(nèi)，每隔7d監(jiān)測(cè)一次體重并進(jìn)行記錄。

2.4.3 大鼠糖尿病足潰瘍創(chuàng)面監(jiān)測(cè) 觀察各組大鼠創(chuàng)面愈合的情況，每隔7d對(duì)大鼠足潰瘍創(chuàng)面愈合情況進(jìn)行拍照記錄。采用Image-pro plus圖像處理分析軟件獲取JPEG格式圖像數(shù)據(jù)，評(píng)估創(chuàng)面愈合情況。使用顏色及對(duì)比度濾鏡增強(qiáng)圖像后，依據(jù)創(chuàng)面呈紅色與背景膚色的區(qū)別，選取紅色創(chuàng)面為測(cè)量區(qū)域，測(cè)量創(chuàng)面面積，計(jì)算創(chuàng)面愈合率。

創(chuàng)面愈合率=（原始創(chuàng)面總面積-未愈創(chuàng)面面積）/原始創(chuàng)面總面積×100%

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠體征的觀察及體重測(cè)定 造模組大鼠體型消瘦，倦怠乏力，毛發(fā)黯淡發(fā)灰，出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體重減輕的“三多一少”癥狀。

3.2 大鼠空腹血糖結(jié)果 大鼠連續(xù)給藥后第7d及第14d，各組均禁食不禁水6h后，尾靜脈采血，血糖儀測(cè)定大鼠空腹血糖值。由表1可見，造模后治療前即0d，空白對(duì)照組大鼠平均血糖（4.43±0.52）處于正常水平，但模型對(duì)照組大鼠平均血糖（16.94±4.09），證明高血糖大鼠造模成功。太子參多糖外用治療大鼠足潰瘍7day和14day，空白對(duì)照組大鼠平均血糖分別為（4.46±0.50）和（4.59±0.43）均處于正常水平;但模型組、陽性對(duì)照組、太子參多糖治療組大鼠血糖一直維持在（18.96±6.13）～（23.48±5.13）較高水平;給藥周期內(nèi)，高血糖大鼠血糖值仍然處于較高水平，即外用金因肽和太子參粗多糖并不能降低高血糖大鼠血糖值，同時(shí)高血糖大鼠血糖值也無自然恢復(fù)。

3.3 大鼠糖尿病足潰瘍創(chuàng)面愈合結(jié)果 由圖1可知，造足部潰瘍模型后，各組大鼠潰瘍創(chuàng)面鮮紅，可見明顯的炎性膿液滲出。造模后第7d，空白組創(chuàng)面結(jié)痂脫落，傷痕收縮紅活;模型組創(chuàng)面結(jié)成黃褐色痂，且創(chuàng)面仍有稀薄膿性分泌物;陽性組和多糖外用組創(chuàng)面結(jié)成紅褐色痂，創(chuàng)面收縮。造足部潰瘍模型后第14d，空白組創(chuàng)面全部愈合，足部留有淡淡的傷痕;陽性組創(chuàng)面大多愈合，創(chuàng)面有干燥皮屑脫落;多糖外用組創(chuàng)面基本愈合，少有一點(diǎn)黑星小痂;模型組創(chuàng)面大都留有紅褐色結(jié)痂。采用Image-pro plus圖像處理分析軟件計(jì)算各組大鼠創(chuàng)面愈合率，由表2、圖2可知，給藥后第14d，各組大鼠創(chuàng)面基本愈合。給藥周期內(nèi)各組大鼠足潰瘍創(chuàng)面愈合的效果為，空白組好于金因肽外用陽性組、好于太子參多糖外用組好于模型組。造足部潰瘍模型后，空白組的正常動(dòng)物創(chuàng)面結(jié)痂和愈合速度明顯快于糖尿病動(dòng)物，表明高血糖影響大鼠足潰瘍創(chuàng)面的愈合。太子參多糖外用組及陽性組結(jié)痂和愈合速度明顯快于模型組，與模型組相比，差異具有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說明了太子參多糖具有促進(jìn)高血糖大鼠足潰瘍創(chuàng)面愈合的藥效。

4 討論

糖尿病可引起神經(jīng)和血管損傷，持續(xù)高血糖可導(dǎo)致基于周圍神經(jīng)病變的全身性多部位神經(jīng)損傷，使糖尿病患者肢端缺血和對(duì)傷痛的感覺不靈敏，增加了糖尿病足潰瘍這一并發(fā)癥出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)。持續(xù)高血糖會(huì)導(dǎo)致上皮細(xì)胞功能障礙，導(dǎo)致促血管生成信號(hào)和一氧化氮生成減少。此外，高血糖患者白細(xì)胞功能受損，免疫功能受損，相關(guān)部位免疫應(yīng)答不足，使糖尿病足這一糖尿病常見并發(fā)癥更難愈合[12]。

實(shí)驗(yàn)型糖尿病足潰瘍動(dòng)物模型的制備多是在糖尿病模型的基礎(chǔ)上配合外部干預(yù)建立的。鏈脲佐菌素這一藥物對(duì)哺乳動(dòng)物的胰島β細(xì)胞有特異毒性，造成胰島素分泌低下，引起實(shí)驗(yàn)性糖尿病，此藥物性糖尿病模型制備操作簡(jiǎn)便，成模周期短，被廣泛用于誘導(dǎo)糖尿病動(dòng)物模型。鏈脲佐菌素的注射劑量是決定糖尿病模型成功與否的關(guān)鍵，一次性腹腔注射STZ 50mg/kg以上劑量，大鼠胰島細(xì)胞大量被破壞，血糖迅速升高，極容易造成死鼠，不利于對(duì)糖尿病進(jìn)一步研究;40mg/kg以下劑量造模血糖上升趨勢(shì)緩慢，成模率低，其可能處于胰島素抵抗早期，胰島β細(xì)胞為代償胰島素抵抗而分泌更多的胰島素進(jìn)而控制血糖上升。本實(shí)驗(yàn)以40mg/kg的劑量，給予1%STZ溶液左下腹注射，制備大鼠高血糖模型。造模后大鼠血糖一直維持在較高水平[（16.94±4.09）～（23.61±3.43）]，出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體重減輕的“三多一少”癥狀，符合臨床糖尿病患者的病癥特征;進(jìn)而于高血糖大鼠足背部切除一矩形全層皮膚組織，建立糖尿病足潰瘍模型[13]。

目前難治性糖尿病足潰瘍還沒有理想的特效藥，植物多糖具有皮膚組織修復(fù)等作用，同時(shí)可提供濕性愈合環(huán)境加速創(chuàng)面愈合。本文通過空白組、模型組、金因肽外用陽性組、太子參多糖外用組大鼠足潰瘍創(chuàng)面愈合率的對(duì)比，證明了太子參多糖具有促進(jìn)高血糖大鼠足潰瘍創(chuàng)面愈合的藥效，為中藥太子參進(jìn)一步開發(fā)和利用提供了新的思路。

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