Omi/HtrA2與Livin對子癇前期及子癇患者胎盤凋亡的影響

趙小環(huán) 李紅芳 樊 虹 許會英 孫高高

甘肅省蘭州市第一人民醫(yī)院(730050)

子癇前期-子癇是妊娠期特有的疾病，發(fā)病機制仍不明確，胎盤部位細胞凋亡異?？赡苁瞧湓蛑籟1]。絲氨酸蛋白酶Omi/HtrA2是線粒體促凋亡因子，在腫瘤中研究較多，在子癇前期-子癇中的凋亡作用尚無報道。Livin基因是凋亡抑制蛋白(IAPs)家族成員之一，其抑制凋亡的作用可能與受精卵著床、胎盤的生長發(fā)育有關(guān)。本研究檢測Omi/HtrA2與Livin在子癇前期-子癇患者胎盤組織中的表達，探討其在子癇前期及子癇發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 對象與方法

1.1 選擇對象

選擇2017-2018年本院婦產(chǎn)科住院的子癇前期20例、子癇前期重度32例、子癇8例共60例孕產(chǎn)婦(觀察組)。診斷標準依據(jù)相關(guān)診斷標準[2]。子癇前期重度中有2例發(fā)生胎盤早剝、3例伴有胸水及心包積液、1例發(fā)生LEELP綜合征。排除其它產(chǎn)科并發(fā)癥和合并癥的正常晚期妊娠20例為對照組。本研究通過本院倫理委員會審批。

1.2 胎盤組織的采集及處理

在兩組孕婦剖宮產(chǎn)或陰道分娩胎盤娩出5min內(nèi)，避開梗死及鈣化區(qū)，取胎盤母體面中央2cm×2cm×1cm組織10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋待用。采用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶連接法(SP法)檢測胎盤組織滋養(yǎng)細胞及間質(zhì)細胞中的Omi/HtrA2與Livin的表達。鼠抗人Omi/HtrA2單克隆抗體、兔抗人Livin多克隆抗體及SP免疫組化試劑盒均購自武漢博士德生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 結(jié)果判定及分析

每個標本隨機選取2張切片，光學顯微鏡下每張切片隨機觀察3個視野，陽性部位呈棕黃色。并將圖像輸入Image-Pro Plus圖像分析系統(tǒng)，分別測得兩組胎盤組織中最小灰度值(OD值)。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況

子癇組與對照組年齡(27.9±6.2歲、27.2±4.0歲)、孕周(37.2±2.6周、39.2±1.2周)和產(chǎn)次(1.2±0.4次、1.7±0.6次)等比較無差異(P>0.05)。

2.2 Omi/HtrA2、Livin在胎盤組織表達

Omi/HtrA2在胎盤組織中表達呈棕色顆粒，陽性染色主要定位于胎盤滋養(yǎng)細胞及間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)中，在各組胎盤組織中均有表達，但OD值觀察組(150.46±26.59)高于對照組(132.11±18.43)(t=2.049,P<0.05)(圖1、圖2、圖3)(封三),且子癇前期重度(161.17±19.45)高于子癇前期(136.79±26.57)(t=-3.833，P<0.01)；Livin染色呈棕黃色至深棕色顆粒，陽性染色主要位于胎盤合體滋養(yǎng)細胞和間質(zhì)細胞的細胞核中(圖4、圖5、圖6)(封三)，觀察組OD值(116.07±22.40)低于對照組(136.73±20.81)(t=-2.216,P<0.05)，但子癇前期(109.36±22.44)與子癇前期重度(122.17±28.12)比較無差異(t=-1.680，P>0.05)。

2.3 不同子癇程度患者孕產(chǎn)情況比較

子癇前期與子癇前期重度組間收縮壓、舒張壓、孕周、新生兒體重等均有差異，但產(chǎn)婦年齡、產(chǎn)后出血量及新生兒1 min Apgar評分無差異。 見表1。

表1 子癇不同程度孕婦孕產(chǎn)情況比較

3 討論

目前認為凋亡信號傳導有細胞表面死亡受體途徑、線粒體啟動途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑三條通路。越來越多研究顯示線粒體在介導細胞凋亡的過程中發(fā)揮了極為重要作用，位于線粒體內(nèi)外膜間隙的凋亡相關(guān)分子的釋放是線粒體介導的凋亡過程中關(guān)鍵。

Omi/HtrA2是定位于真核生物線粒體中的絲氨酸蛋白酶，是寡聚絲氨酸蛋白酶HtrA家族成員之一，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成后儲存在線粒體膜間隙。正常情況下對細胞有保護作用，當細胞受到刺激發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)而線粒體膜通透性增加時，Omi/HtrA2分子從線粒體釋放并進入細胞質(zhì)，解除了XIAP對caspase9的抑制，導致下游caspase3活化，進而DNA斷裂發(fā)生凋亡[3-8]。Omi/HtrA2除了caspase依賴性的凋亡通路外，還通過自身的酶切作用與IAPs 結(jié)合后直接剪切Livin、C-IAP1、C-IAP2和XIAP，消除IAPs抑制細胞凋亡的作用[9]。Omi/HtrA2是線粒體促凋亡因子，但在妊娠方面的研究報道很少。本研究發(fā)現(xiàn)，Omi/HtrA2主要在胎盤滋養(yǎng)細胞及間質(zhì)細胞細胞質(zhì)中表達，觀察組明顯高于對照組，且重度組更高。分析認為因缺血、缺氧等影響，Omi/HtrA2分子從線粒體釋放入細胞質(zhì)，通過凋亡信號轉(zhuǎn)導通路引起大量滋養(yǎng)細胞凋亡，從而抑制滋養(yǎng)細胞侵襲能力，使滋養(yǎng)細胞浸潤過淺，胎盤淺著床；同時胎盤缺血缺氧引起血管內(nèi)皮細胞損傷，胎盤功能發(fā)生障礙，尤其發(fā)展到子癇前期重度，血壓增高明顯，血管痙攣加重，并伴有其它器官受損及實驗室指標異常。因此，對子癇前期重度患者入院時應(yīng)積極給予藥物降壓、鎮(zhèn)靜對癥治療。但由于胎盤滋養(yǎng)細胞凋亡，胎盤功能不良，胎兒長期慢性缺氧、生長受限，新生兒體重偏低。子癇前期與子癇前期重度比較，收縮血壓、舒張血壓、孕周、新生兒體重均有差異，對子癇前期重度孕婦應(yīng)給予積極治療，以降低不良妊娠結(jié)局的發(fā)生[10]。

Livin是IAPs家族中的一種凋亡蛋白，存在于胚胎、胎盤和一些惡性腫瘤組織中，Livin凋亡抑制作用可能與受精卵的著床、胎盤的生長發(fā)育等有關(guān)。Livin在凋亡過程中的作用是多方面的。在Fas/Caspase-8誘導的死亡受體途徑中，Livin直接抑制該途徑中的核心Caspases-3蛋白酶活性；而在另一條細胞色素c/凋亡激活因子-1(Apaf-1)作用的線粒體途徑中，Livin通過與凋亡相關(guān)蛋白(SMAC)結(jié)合而中和SMAC的Caspase活化蛋白的活性，使多種 Caspases未能活化而發(fā)揮抗凋亡作用[1]。Straszew ski-Charezl[11]等研究發(fā)現(xiàn)妊娠初期和晚期胎盤組織中有Livin表達，認為其作用機制是阻斷Fas介導的滋養(yǎng)細胞凋亡。郭秀香等[12]研究發(fā)現(xiàn)，ICP組胎盤組織中滋養(yǎng)細胞、蛻膜細胞及間質(zhì)細胞Caspase-3表達增高，Livin表達降低且表達呈負相關(guān)性，推測Caspase -3和Livin基因可能是ICP胎盤細胞凋亡的重要調(diào)控基因之一。本研究發(fā)現(xiàn)，Livin在觀察組和對照組胎盤滋養(yǎng)細細胞、蛻膜細胞和間質(zhì)細胞中均有表達，且觀察組低于對照組，但子癇前期重度與子癇前期未見差異，與王曉兵[1]研究基本一致。提示子癇前期及子癇患者胎盤組織中Livin蛋白低表達，推測Livin通過死亡受體途徑及線粒體途徑等不同信號轉(zhuǎn)導通路引起了胎盤大量滋養(yǎng)細胞的凋亡，從而引起胎盤功能不良，缺血缺氧，引起子癇前期臨床表現(xiàn)甚至子癇發(fā)生，故認為Livin在子癇前期-子癇的疾病發(fā)生發(fā)展中有一定作用。

通過本研究認為，凋亡因子Omi/HtrA2、Livin參與了胎盤的凋亡，在子癇前期-子癇疾病的發(fā)生發(fā)展中有重要作用，但二者參與凋亡的方式是否有關(guān)還需進一步研究。