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    不同廠家黃連羊肝丸的顯微鑒別研究

    2020-10-28 02:36:04趙閩家楊娜娜劉樹森徐蓓蕾
    關(guān)鍵詞:羊肝中成藥黃連

    趙閩家,吳 迪,王 旭,楊娜娜,劉樹森,徐蓓蕾*

    (1.哈爾濱市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,哈爾濱150090;2. 哈爾濱商業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院,哈爾濱150076)

    顯微鑒別(microscopic identification)是運(yùn)用電子顯微技術(shù)直接觀察中成藥中原料藥粉末的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物,借此鑒別中成藥處方組成的真實(shí)性的一種鑒別方法.大多數(shù)的中成藥直接用各種中藥粉末配制而成,因此可選擇粉末鑒定法進(jìn)行鑒定;有些濃縮丸劑、片劑等是由藥材浸膏制備的,其中殘留有藥材細(xì)胞、組織碎片及其它細(xì)微特征,因此顯微鑒定對(duì)其也有一定的應(yīng)用價(jià)值.鑒定時(shí),根據(jù)處方和顯微觀察,選取足以說明在中成藥中是該藥所專有的特征,作為鑒別依據(jù)[1-3].

    丸劑、散劑、片劑、膠囊劑等為中成藥的常見劑型,所用原料藥為部分或全部中藥材細(xì)粉,因此保留了飲片粉末的顯微特征,這類中成藥的質(zhì)量鑒別項(xiàng)下常列有顯微鑒別.中成藥所含藥味多、成分復(fù)雜且含量低、成分之間相互干擾大,因此現(xiàn)代化學(xué)方法及儀器分析方法常常不能有效測(cè)定其質(zhì)量,而顯微鑒別方法則獨(dú)具優(yōu)勢(shì).《中國(guó)藥典1977年版》初次記載了“中草藥及成方顯微鑒別法”,并在各中成藥的鑒別項(xiàng)下對(duì)其可資鑒別的顯微特征作出規(guī)定,一些省、市、自治區(qū)所編印的《藥品標(biāo)準(zhǔn)》也相繼增訂這方面內(nèi)容,《中國(guó)藥典1985年版》收載的中成藥對(duì)此又有所充實(shí)和提高,十余年來證明,顯微鑒別法對(duì)保證中成藥質(zhì)量行之有效[4-7].

    《中國(guó)藥典2005年版》記載,黃連羊肝丸顯微鑒別:纖維束鮮黃色,壁稍厚,紋孔明顯,韌皮纖維淡黃色,梭形,壁厚,孔溝細(xì),纖維束鮮黃色,周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶成片存在于薄壁組織中,種皮柵狀細(xì)胞一列,長(zhǎng)40~72 μm,其下數(shù)列細(xì)胞含草酸鈣簇晶及方晶,油管含黃色或棕黃色分泌物,不規(guī)則團(tuán)塊暗灰色,不透明,加酸產(chǎn)生氣泡[8].對(duì)黃連羊肝丸處方分析可知:黃連、胡黃連為根莖類中藥;黃芩、柴胡、龍膽為根類中藥;黃柏為皮類中藥;密蒙花為花類中藥;決明子為種子類中藥;木賊為全草類中藥;青皮、茺蔚子為果實(shí)類中藥;石決明為動(dòng)物類中藥.此中成藥,由十四味藥材組成,這些中藥藥材經(jīng)過幾千年的醫(yī)療實(shí)踐證明,皆有治療眼部疾病的作用或保肝、養(yǎng)肝之功效[9-11].羊肝補(bǔ)肝血,養(yǎng)肝陽(yáng)而治目疾;黃連有清心火、瀉肝明目的功效;決明子、茺蔚子可以涼肝明目;胡黃連、黃芩、黃柏、龍膽草的功效為清瀉肝火;柴胡、青皮可以舒肝解郁,黃連羊肝丸有清泄肝熱而明目之效[12-15].元代的《原機(jī)啟微》和明代的《證治準(zhǔn)繩》曾對(duì)此方有過記載,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究和臨床驗(yàn)證表明,黃連羊肝丸屬純中藥制劑,價(jià)格低廉,安全有效,無毒副作用,可作為病毒性角膜炎早期治療的首選藥物,是治療眼部疾病的良方.

    1 方法與結(jié)果

    1.1 儀器與材料

    顯微鏡(XSM-20生物顯微鏡,寧波舜宇儀器有限公司)、干燥箱(XRD-HR760IN,深圳市旭日東電子設(shè)備有限公司)、黃連羊肝丸由不同廠家提供(見表1).

    表1 不同廠家的黃連羊肝丸

    1.2 制片及觀察

    1.2.1 取樣

    取不同廠家(或不同批次)的黃連羊肝丸,每盒任選其中3粒蜜丸(或3袋水蜜丸).

    1.2.2 脫蜜

    取蜜丸,除去外層,切成碎塊,加熱水(50~60 ℃),振搖,使藥物溶散混懸、煉蜜溶解,靜置,傾去上液,在沉淀中再加熱水,依上法操作,如此3~4次(至上液基本無色),最后所得的沉淀物即為樣品.可直接取沉淀制片,亦可將沉淀置干燥箱干燥后取樣制片進(jìn)行顯微鑒別.

    1.2.3 制片

    將需要進(jìn)行顯微觀察的粉末藥材放置于載玻片上,然后輕輕滴入2~3滴的水合氯醛,攪勻,蓋玻片必須用鑷子沿一側(cè)輕輕放下,以便液體能夠自然展勻.使用濾紙將溢出的液體吸拭或從蓋玻片邊緣補(bǔ)充液體不足的空隙.每個(gè)廠家的黃連羊肝丸粉末各制片5個(gè).

    1.2.4 顯微觀察

    將制備好的片子放在顯微鏡載物臺(tái)上,對(duì)黃連羊肝丸進(jìn)行顯微鑒定,檢出其所含的14種藥物成分,排除交叉,避免各藥物相互干擾,對(duì)其中各藥物具有鑒別價(jià)值的顯微特征進(jìn)行觀察并拍照.

    1.3 結(jié)果與討論

    1.3.1 各藥材顯微特征

    1)黃連石細(xì)胞鮮黃色,測(cè)量其直徑平均值在25~64 μm之間,紋孔小,孔溝細(xì),少數(shù)石細(xì)胞壁較薄而胞腔較大.

    2)胡黃連棕色塊隨處散在,黃棕色,形狀、大小不一.

    3)黃芩韌皮纖維微黃色.呈梭形,顯微測(cè)量其長(zhǎng)度平均值在51~200 μm之間,直徑約9~33 μm.

    4)黃柏晶纖維鮮黃色,成束存在.柴胡油管管道中含黃棕色條狀分泌物.

    5)龍膽草酸鈣針晶不規(guī)則散在于薄壁細(xì)胞中或充塞于細(xì)胞一角.

    6)青皮中果皮薄壁組織呈無色,細(xì)胞形狀不規(guī)則,有的細(xì)胞中可見到淡黃色無定形或類圓形橙皮甙結(jié)晶,結(jié)晶大小不一.

    7)木賊的內(nèi)皮層細(xì)胞表面觀呈長(zhǎng)方形,壁微波狀彎曲,有光澤.

    8)茺蔚子內(nèi)果皮厚壁細(xì)胞呈黃棕色.底面觀(內(nèi)表面觀)胞間層不易被觀察到,紋孔排列疏松,存在不規(guī)則形狀裂紋,胞腔形似類圓形,多見方晶.

    9)決明子的種皮柵狀細(xì)胞,無色,橫斷面觀細(xì)胞1列,呈長(zhǎng)方形.

    10)密蒙花極易見其特征結(jié)構(gòu)星狀毛,體部具有2細(xì)胞,基部細(xì)胞并列存在,每個(gè)細(xì)胞具有2分叉,分叉長(zhǎng)度相當(dāng)或一長(zhǎng)一短,先端逐漸尖銳.石決明不規(guī)則團(tuán)塊暗灰色,不透明.

    11)夜明砂昆蟲的觸角顯微可見.動(dòng)物類的顯微特征可鑒別動(dòng)物類用藥羊肝的存在.(見圖1~3)

    圖1 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

    圖2 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

    圖3 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

    1.3.2 專屬性特征

    黃連、黃芩、黃柏、龍膽中均含有石細(xì)胞.黃連石細(xì)胞大多呈類圓形,直徑25~64 μm,紋孔小,孔溝細(xì);黃芩石細(xì)胞直徑24~48 μm,孔溝有分叉;黃柏石細(xì)胞大多呈分枝狀,形大;龍膽石細(xì)胞少見,紋孔裂縫狀,有的胞腔內(nèi)含細(xì)小針晶.因此,可以根據(jù)所含石細(xì)胞特點(diǎn)的不同進(jìn)行黃連的鑒別.黃連與黃芩中均含有韌皮纖維.黃連韌皮纖維較粗短,長(zhǎng)136~185 μm,直徑27~37 μm.黃芩韌皮纖維長(zhǎng)51~200 μm,直徑9~33 μm.通過顯微測(cè)量法可鑒別黃芩.

    1.3.3 結(jié)果

    對(duì)黃連羊肝丸處方進(jìn)行分析,其組成藥物共14種,避開交叉,排除干擾,在不同廠家的黃連羊肝丸粉末所制的片子中,均可見各藥材的主要顯微特征.說明已購(gòu)買的各廠家黃連羊肝丸中藥味無缺失現(xiàn)象,表明其質(zhì)量在顯微鑒別結(jié)果上無明顯差別,若要進(jìn)一步進(jìn)行質(zhì)量控制,可以結(jié)合理化鑒別和含量測(cè)定的方法.

    2 討 論

    以往文獻(xiàn)鑒定黃連羊肝丸的質(zhì)量,通常只對(duì)黃連和黃芩的主要成分小檗堿及黃芩苷進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定,此法只能確定中成藥中某味或某幾味藥的指標(biāo)性成分的含量高低,不能全面的檢測(cè)處方中的所有原料藥的有無,尤其對(duì)于沒有標(biāo)準(zhǔn)品的中藥,檢測(cè)難度更大.本文采用顯微鑒別方法,具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn),可以快速、簡(jiǎn)便的對(duì)中成藥進(jìn)行質(zhì)量控制,能夠測(cè)定制劑處方中原料藥組成的真實(shí)性,是中成藥鑒定中的主要手段之一.

    中成藥的顯微鑒別是在粉末藥材顯微鑒定的基礎(chǔ)上,通過排比、分析,選定中成藥原料藥材中可資鑒別的顯微特征作為檢定的依據(jù),具有一定專屬性,且制劑的原料藥材均為整體和批量磨粉入藥,避免了個(gè)體差異和取材部位不同的影響,保證了顯微特征檢出的重現(xiàn)性.本研究所用的顯微鑒別法,可以宏觀全面的把握中成藥的質(zhì)量,完善了中藥制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)一步較全面地補(bǔ)充了藥典中對(duì)于中成藥顯微鑒別的內(nèi)容,為今后中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定起了示范性作用.

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