不同宮頸病變特征人群HPV感染及與不孕癥相關因素分析

趙 娟 鄭 錦 韓曉兵

西安交通大學第一附屬醫(yī)院(710061)

現(xiàn)已明確高危型人乳頭狀瘤病毒(HPV)持續(xù)感染為宮頸癌及癌前病變發(fā)生的主要病因[1]。研究宮頸癌女性HPV感染及主要型別可為HPV防治及疫苗開發(fā)提供依據(jù)[2]。目前全球已發(fā)現(xiàn)HPV感染亞型100余種，其中約有30種在宮頸組織發(fā)現(xiàn)[3]。調(diào)查顯示，宮頸癌患者HPV感染率超過95%，其中超過半數(shù)同時感染高危及低危HPV亞型，導致治療難度增加[4]。越來越多證據(jù)顯示，HPV感染與不孕不育存在關聯(lián)，HPV感染可能影響女性生殖能力及輔助生殖技術效果[5-6]。但臨床尚缺乏不孕與HPV感染相關性的系統(tǒng)報道。本研究擬對醫(yī)院就診的宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)、不孕癥、正常女性等不同特征人群行HPV感染調(diào)查，探究宮頸癌HPV感染特點及不孕癥與HPV感染的關系，為不同特征人群宮頸癌防治提供臨床證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2016年4月—2019年5月本院婦科門診或體檢的女性共255例。入選女性均有3年以上性生活史；因不孕癥、CIN、宮頸癌或婦科體檢就診；自愿接受宮頸細胞學(TCT)及HPV分型檢查；近3個月內(nèi)未接受宮頸物理治療或其他抗病毒治療；非妊娠期；不孕癥女性無宮頸癌或CIN病史；宮頸癌及CIN診斷參照相關標準[7]；無自身免疫性疾病；無免疫抑制藥物應用史；主要臟器官功能基本正常。經(jīng)組織學確診CIN 65例(CIN組)，年齡(37.5±10.2)歲(24～68歲)；宮頸癌78例(宮頸癌組)，年齡(39.9±11. 7)歲(25～71歲)；不孕癥62例(不孕組)，年齡(32.8±6.5)歲(23～39歲)；體檢無自覺癥狀50例(正常組)，年齡(37.5±11.2)歲(24～71歲)。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會審批，所有對象均知情且自愿簽署研究同意書。

1.2 主要儀器與試劑

ABI 7500型實時熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR)擴增儀(美國Applied Biosystems公司)，HPV PCR試劑盒(RQ-HPV HR)(意大利AB Analitica公司)，QIA mini試劑盒(德國QIAGEN公司)，HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀及配套試劑盒(廣州凱普生物技術股份有限公司)。

1.3 檢測方法

所有對象均于月經(jīng)干凈3～7 d后采集宮頸脫落細胞樣本。QIAmini試劑盒提取標本DNA，PCR擴增，反應體系：AB mix 25 μl+DNA模板5 μl+標記物2 μl+上下游引物1 μl+H2O 17 μl共50 μl，反應條件：95℃3 min，50℃ 2 min，共40個循環(huán)，快速導流雜交法檢測HPV亞型，包括15種高危HPV亞型(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、66、68、83)及6種低危HPV亞型(HPV 6、11、42、43、44、81)，嚴格按試劑使用說明操作。并收集所有不孕癥女性的臨床資料，包括年齡、初次性生活年齡、孕產(chǎn)次、宮頸糜爛、盆腔炎及宮腔手術史情況，篩選高危型HPV感染的可能危險因素。

1.4 統(tǒng)計學方法

經(jīng)SPSS 20.0分析數(shù)據(jù)，多組計數(shù)資料比較行χ2檢驗或Fisher確切概率分析；計量資料采用t檢驗；多因素logistic回歸分析高危HPV感染影響因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同特征人群HPV感染率及高危分型情況

HPV感染率及高危型HPV感染率CIN組、宮頸癌組、不孕癥組均高于正常組(χ2=18.491、69.194、23.748；16.498、65.285、25.259，P<0.05)，且宮頸癌組感染率最高(χ2=21.305、15.207；22.151、12.313，P<0.05)，見表1。

表1 不同特征組HPV及高危型HPV感染率比較[例(%)]

2.2 不同特征人群HPV感染亞型分布

正常組HPV檢出頻次為13例次(單一感染7例、雙重感染3例)；CIN組HPV總檢出頻次為80例次(單一感染20例、雙重感染3例、三重感染11例、多重感染5例)；宮頸癌組總感染頻次118例次(單一感染45例、雙重感染13例、三重感染9例、多重感染5例)；不孕癥組總檢出頻次為74例次(單一感染22例，雙重感染11例，三重感染3例，多重感染5例)。各組HPV亞型感染分布見表2。

2.3 宮頸癌組宮頸病理特點與HPV感染關系

宮頸癌患者不同宮頸病理類型、臨床分期及分化程度，其HPV單一感染、多重感染率比較未見差異(P>0.05)；但臨床分期Ⅲ期者高危型HPV感染率高于Ⅰ+Ⅱ期者，伴淋巴管浸潤宮頸癌者的多重感染率及高危型HPV感染率均高于不伴淋巴管浸潤患者(P<0.05)。見表3。

表2 不同特征人群HPV感染亞型分布[頻次(%)]

表3 宮頸癌組不同宮頸組織特點與HPV感染關系[例(%)]

2.4 不孕癥組高危HPV感染因素分析

不孕癥組患者不同年齡、孕次、產(chǎn)次、盆腔炎病史及宮頸手術治療史者高危HPV感染率比較未見差異(P>0.05)；初次性生活年齡<20歲、有宮頸糜爛史患者高危HPV感染率高于初次性生活年齡≥20歲、無宮頸糜爛史患者(P<0.05)(表4)。將有統(tǒng)計學意義因素進行賦值，初次性生活年齡(≥20歲=0，<20歲=1)、宮頸糜爛(否=0，是=1)，進入多因素回歸方程。結(jié)果顯示，初次性生活年齡、宮頸糜爛均為不孕癥患者高危型HPV感染的危險因素(P<0.05)(表5)。

表4 不孕癥組不同高危HPV感染者臨床情況比較[例(%)]

表5 不孕癥患者高危型HPV感染的危險因素分析

3 討論

宮頸癌具備高發(fā)病率、死亡率等特點，且有年輕化發(fā)展趨勢[8,9]。已成為我國女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤防控重點[10]。已知HPV感染、尤其是高危型HPV感染與宮頸癌及癌前病變發(fā)生密切相關[11-12]。HPV隨感染程度增加，CIN逐漸進展為宮頸癌[13-14]。前期文獻報道，持續(xù)感染高危型HPV亞型可增加宮頸細胞惡性表型轉(zhuǎn)化風險，誘導宮頸癌發(fā)病[15]。本研究對正常人群、CIN、宮頸癌及不孕癥HPV感染情況調(diào)查，HPV感染率及高危型HPV感染率為宮頸癌>不孕癥>CIN>正常人群，尤其宮頸癌患者HPV感染率高達92.3%，其中高危型HPV感染率達84.6%，進一步驗證了高危型HPV持續(xù)感染是造成宮頸癌發(fā)病的主要原因。與Karim等[16]報道結(jié)果相近。HPV亞型分型發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者的高危型HPV亞型以HPV 16、52、58為主，且HPV多重感染率略高，與國外相關研究報道[17]主要亞型HPV 16、18亞型有一定區(qū)別，可能與地域差異及樣本數(shù)量較少有關。本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌高危HPV感染及多重感染與臨床分期及淋巴管浸潤有關，提示這種感染與宮頸癌病情進展存在關聯(lián)，或可能作為預測宮頸癌進展的依據(jù)。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，不孕癥女性有較高的HPV感染率。近年來隨宮腔操作的增加及性傳播疾病發(fā)病率的上升，我國女性不孕癥發(fā)病率逐漸增加[18-19]。諸多文獻報道，HPV感染可能造成不孕[20-21]。劉明月等[22]調(diào)查發(fā)現(xiàn)不孕女性HPV感染率超過20%，其中高危型HPV感染超過3/5。本研究不孕癥女性HPV感染率高達66.1%，其中高危型HPV感染率超過50%，主要高危HPV亞型為HPV 16、58、52，與宮頸癌組HPV高危型類似，且HPV多重感染率較正常人群組高。提示不孕女性是HPV感染高危人群，需予以高度關注并重視對不孕癥患者HPV感染的篩查。不孕癥育齡女性多處于性活躍期，本研究分析初次性生活年齡提前、有宮頸糜爛史不孕女性高危型HPV感染風險較高，可能與初次性生活年齡過早的女性性知識缺乏，不潔性生活或性生活過度均可能導致機體免疫抵抗力下降，增加病原微生物易感性，增加高危型HPV感染風險[23]。而宮頸糜爛女性常伴宮頸組織細菌感染，鱗狀上皮脫落，宮頸局部抵抗力降低，增加HPV易感性[24]；同時宮頸糜爛女性宮頸分泌物多，影響了精子活性和受精，增加不孕不育風險[25-26]。故必須重視對不孕女性HPV感染篩查，重點關注初次性生活年齡早、宮頸糜爛史患者的感染情況，以改善不孕癥結(jié)局。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)，HPV感染尤其是高危型HPV感染與CIN、宮頸癌及不孕癥發(fā)生密切相關，3種宮頸病變的HPV感染亞型皆以高危型為主，且隨宮頸癌病情的進展，高危型HPV感染率上升，多重感染率增加。同時初次性生活年齡、宮頸糜爛均與不孕癥女性高危型HPV感染有關，臨床治療不孕癥時應加強對患者HPV感染的篩查。