PCOS患者血清微小RNA-146a、性激素及子宮內(nèi)膜容受性與妊娠關(guān)系

李愛香 李永樂 季清云 郭偉光

河南省人口和計劃生育科學(xué)技術(shù)研究院，國家衛(wèi)生健康委出生缺陷預(yù)防重點實驗室(鄭州，450000)

多囊卵巢綜合征(PCOS)主要特征為長期稀發(fā)排卵和(或)無排卵及高雄激素血癥，是排卵障礙性不孕癥的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)微小RNA-146a(mir-146a)在PCOS患者血清和卵泡液中大量存在，其異常表達(dá)參與了PCOS的發(fā)生發(fā)展[1]。相關(guān)研究報道[2]，雌激素水平紊亂會抑制卵巢發(fā)育或排卵，導(dǎo)致PCOS患者不孕。子宮內(nèi)膜容受性包括子宮內(nèi)膜螺旋動脈搏動指數(shù)(PI)、阻力指數(shù)(RI)及子宮內(nèi)膜厚度(Em)等，在雌激素作用下可隨月經(jīng)呈周期性變化，影響胚胎著床[3-4]。但mir-146a、雌激素及子宮內(nèi)膜容受性與PCOS關(guān)系尚不十分明確。本研究通過檢測女性血清mir-146a水平、雌二醇(E2)、促黃體生成素(LH)及卵泡刺激素(FSH)水平，及子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)PI、RI、Em，分析血清mir-146a、雌激素水平及子宮內(nèi)膜容受性與PCOS關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 基本資料

選取2016年9月-2018年9月本院附屬醫(yī)院收治的140例PCOS患者為PCOS組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合PCOS臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②已婚育齡婦女，有正常性生活；③入組前未接受治療；④臨床資料完善。排除標(biāo)準(zhǔn)：①先天性卵巢發(fā)育異常；②伴有甲狀腺疾病、高泌乳素血癥等內(nèi)分泌疾??；③對本研究治療藥物過敏；④嚴(yán)重肝、腎功能障礙；⑤婦科腫瘤病史。另選同期因排卵障礙接受治療的非PCOS患者110例為對照組。本研究符合本院倫理委員會要求，患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2 治療方法及樣本采集

所有患者均接受促排卵治療?；颊叻謩e于月經(jīng)周期或黃體酮撤退性出血第3 d開始，口服氯米芬(西南藥業(yè)股份有限公司， 50 mg)，50 mg/d，連續(xù)用藥5 d；月經(jīng)第8天，肌注人絕經(jīng)期尿促性腺激素(麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠，75 IU)，75 IU/d，根據(jù)卵泡發(fā)育情況決定用藥劑量，當(dāng)卵泡直徑≥18 mm，尿LH(+)時，肌注絨毛膜促性腺激素針(麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠，2000 IU)，6000 IU扳機，圍排卵期同房。分別于排卵后6～8 d清晨抽取空腹外周靜脈血離心取上清液， -80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 血清mir-146a測定

利用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測血清mir-146a水平。按照TRIzol總RNA提取試劑盒(北京百泰克生物技術(shù)有限公司)提取血清總RNA，分光光度計檢測其純度，并按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(上海玉博生物科技有限公司)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以U6為內(nèi)參進(jìn)行擴增，引物均由南京科佰生物科技有限公司合成。mir-146a正向引物5'-GGAGACATGAGAGCTGCCAAC-3'，反向引物5'-CCAGCAGCATGTCGAAGATC-3'；U6正向引物5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3'，反向引物5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'。反應(yīng)條件：94℃、3 min，92℃、30 s，60℃、30 s，75℃、30 s，共40個循環(huán)。每樣品設(shè)6個復(fù)孔，反應(yīng)結(jié)束后采用2-△△Ct計算血清mir-146a相對表達(dá)量。

1.4 血清雌激素及子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)測定

采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測血清E2、LH及FSH水平。陰道B超檢測患者子宮內(nèi)膜容受性，觀察指標(biāo)為子宮內(nèi)膜螺旋動脈PI、RI及Em。

1.5 妊娠的判斷及隨訪

于排卵后第14 d檢測血清人絨毛膜促性腺激素，當(dāng)人絨毛膜促性腺激素明顯升高為生化妊娠；排卵后30～35 d陰道B超提示有妊娠囊，即確定臨床妊娠。通過門診對入組患者隨訪1年，截止至2019年9月30日，記錄隨訪期間患者妊娠情況，包括體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、空腹血糖、孕周、早產(chǎn)兒及不良妊娠情況，使用胰島素抵抗的穩(wěn)態(tài)模型(HOMA-IR)檢測胰島素抵抗(IR)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般臨床情況

PCOS組年齡(29.0±4.0)歲(21～37歲)，BMI(24.3±2.1)kg/m2(20.2～27.3 kg/m2)，PCOS病程(5.2±1.2)年(2～7年)。對照組年齡(29.1±4.1)歲(20～37歲)，BMI(24.2±2.2)kg/m2(19.9～27.1 kg/m2)。兩組年齡和BMI比較無差異，兩組患者配偶精液指標(biāo)比較無差異(均P>0.05)。

2.2 血清mir-146a及性激素水平比較

PCOS組血清mir-146a及LH、FSH水平均高于對照組，E2水平低于對照組(均P<0.05)。見表1、圖1。

表1 兩組血清mir-146a及性激素水平比較

M:DNA Marker 600；C：對照組；1～6：PCOS組mir-146a 6孔重復(fù)

2.3 子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)比較

PCOS組子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)PI、RI均高于對照組，Em低于對照組(均P<0.05)。見表2。

2.4 PCOS患者妊娠結(jié)局與各指標(biāo)

根據(jù)妊娠情況將140例PCOS患者分為妊娠組、非妊娠組。非妊娠組血清mir-146a及LH、FSH水平均高于妊娠組， E2水平低于妊娠組(均P<0.05)；子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)PI、RI等均高于妊娠組，Em低于妊娠組(P<0.05)。見表3。

表2 兩組子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)比較

表3 PCOS患者妊娠結(jié)局與各指標(biāo)比較

2.5 妊娠結(jié)局比較

BMI、空腹血糖、HOMA-IR在對照組、妊娠組與非妊娠組依次升高(P<0.05)；與對照組相比，妊娠組孕周降低，早產(chǎn)兒、胎死宮內(nèi)比例上升(P<0.05)。見表4。

表4 各組妊娠結(jié)局比較

2.6 影響PCOS患者治療后妊娠結(jié)局的多因素分析

經(jīng)多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，mir-146a、E2、LH、FSH、PI、RI、Em均是影響PCOS患者治療后不能妊娠的獨立危險因素(P<0.05)。見表5。

表5 影響PCOS患者治療后不能妊娠的多因素logistic回歸分析

3 討論

PCOS發(fā)病原因復(fù)雜。研究發(fā)現(xiàn)PCOS患者經(jīng)治療后排卵率可達(dá)90%，妊娠成功較多[6]。因此，尋找與PCOS發(fā)生發(fā)展相關(guān)指標(biāo)，可為個體化治療PCOS提供幫助，提高妊娠率。

微小RNA(miRNA)在生物體胚胎發(fā)育等多種生理、病理過程中發(fā)揮至關(guān)重要作用。mir-146a作為miRNA家族重要成員之一，異常表達(dá)與胰島素抵抗發(fā)生有關(guān)[7]。Salimi-Asl等[8]研究發(fā)現(xiàn)，PCOS小鼠模型中mir-146a表達(dá)明顯升高，其水平異常升高可能是PCOS發(fā)生的主要原因之一。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[9]，排卵功能障礙患者子宮內(nèi)激素環(huán)境發(fā)生變化，雌激素水平異常，可能導(dǎo)致PCOS的發(fā)生發(fā)展。E2、LH和FSH均參與卵泡發(fā)育與成熟。賀俠琴等[10]研究，PCOS患者血清LH水平高于對照組，LH可作為診斷PCOS的有效指標(biāo)之一。劉俠等[11]研究發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，PCOS患者血清LH水平顯著升高，異常升高與胰島素抵抗有關(guān)。子宮內(nèi)膜容受性降低可能是PCOS患者不良妊娠結(jié)局的重要原因之一[12-13]。李杏英等[14]研究報道，PCOS患者經(jīng)治療后，PI、RI顯著降低，Em明顯升高，PI、RI及Em均可有效評估PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性。綜上發(fā)現(xiàn)，研究血清mir-146a表達(dá)與血清性激素水平及子宮內(nèi)膜容受性可能與PCOS的發(fā)生及妊娠結(jié)局有關(guān)。

本研究中，PCOS組血清mir-146a及LH、FSH水平均遠(yuǎn)高于對照組， E2水平低于對照組，提示血清mir-146a、LH及FSH水平升高及血清E2水平降低，可能在PCOS發(fā)生中起重要作用；PCOS組患者子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)PI、RI均高于對照組，Em低于對照組，與李杏英等[14]研究結(jié)果相似，提示PCOS患者發(fā)生了子宮內(nèi)膜容受性異常變化。進(jìn)一步分析PCOS患者妊娠結(jié)局顯示，非妊娠組患者血清mir-146a、LH、FSH水平及PI、RI均高于妊娠組，血清E2水平及Em低于妊娠組，提示血清mir-146a及性激素水平異?？赡芘cPCOS患者治療后妊娠有關(guān)，子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)PI、RI、Em在PCOS患者妊娠中起重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)IR與PCOS發(fā)病密切相關(guān)[15]。本研究對照組、妊娠組與非妊娠組BMI、空腹血糖、IR依次升高；與對照組相比，妊娠組孕周降低，早產(chǎn)兒、胎死宮內(nèi)比例上升。推測由于mir-146a過量表達(dá)并參與胰島素抵抗，造成患者機體雌激素水平異常變化，并共同導(dǎo)致子宮激素內(nèi)環(huán)境的變化，引起子宮內(nèi)膜容受性改變。雖然部分PCOS患者能夠妊娠，但胚胎發(fā)育也可能受到影響，從而引起不良妊娠結(jié)局。多因素logistic回歸分析，mir-146a、E2、LH、FSH、PI、RI及Em均是影響PCOS患者治療后妊娠的獨立危險因素，提示臨床通過檢測上述指標(biāo)可能在一定程度上預(yù)測PCOS患者的妊娠情況。

綜上所述，血清mir-146a表達(dá)水平升高、血清雌激素水平及子宮內(nèi)膜容受性異常，可能與PCOS發(fā)病及治療后妊娠情況有關(guān)，均為影響PCOS患者治療后不能妊娠的獨立危險因素。由于影響PCOS患者妊娠結(jié)局的因素較多，本研究結(jié)果可能有一定偏差，尚需深入研究予以驗證。