GM-CSF對胃癌細胞增殖和遷移的影響

常仕林，蔡輝

（1.寧夏醫(yī)科大學，寧夏 銀川；2.甘肅省人民醫(yī)院普外科，甘肅 蘭州）

0 引言

粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）是主要造血細胞生長因子之一，為分子量為14-22 KD的廣譜效應多肽生長因子。目前人們認為GM-CSF可能通過結合特定的受體而起作用，在調節(jié)造血和白細胞功能等方面具有重要作用[1]。但是，GM-CSF對腫瘤進展有何影響目前還不是很清楚，部分研究人員認為GMCSF對腫瘤進展有抑制作用[2-5]，另外一部分研究者認為GMCSF對腫瘤進展有促進作用[6-9]。因此，我們設計實驗方案，通過檢測GM-CSF對胃癌SGC7901細胞的增殖和遷移的影響來探究其對胃癌細胞進展有何作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 細胞株

人胃癌SGC7901細胞來源于中國科學院蘭州分院空間輻射生物學實驗室。

1.1.2 主要試劑

RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清購于新西蘭Hyclone公司；胰蛋白酶購于美國Amresco公司；四甲基偶氮唑藍（MTT）、二甲基亞砜（DMSO）購自美國Sigma公司；GM-CSF購于美國Peprotech公司。

1.1.3 主要儀器

細胞恒溫培養(yǎng)箱、高速臺式離心機（賽默飛世爾科技公司），DMIL-BFC295倒置顯微鏡（德國Leica公司），Infinite 200 Pro酶標分析儀（瑞士Tecan公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)及藥物配制

對數(shù)生長期胃癌SGC7901細胞，含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基，于恒溫37.5℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。人重組GM-CSF溶解濃度為4 mg/L，于-80℃保存，工作液濃度為20μg/L。

1.2.2 實驗分為兩組

GM-CSF刺激組，加入20μg/L GM-CSF刺激；空白對照組，加等量培養(yǎng)基，未做其他處理。

1.2.3 MTT檢測細胞活性

將胃癌SGC7901細胞總數(shù)8×103接種在96孔板至貼壁。按以上分組繼續(xù)細胞培養(yǎng)48 h后，在570nm波長下檢測吸光度（A），比較各組細胞活性，細胞活性率=（各實驗組平均A值/空白對照組平均A值）×100.0%。

1.2.4 平板克隆實驗檢測細胞增殖

取對數(shù)生長期細胞接種在60mm培養(yǎng)皿，進行不同分組處理。持續(xù)培養(yǎng)14 d后去掉培養(yǎng)液，PBS清洗，75%乙醇固定，結晶紫染色?？寺⌒纬陕?（形成克隆數(shù)/種植細胞數(shù)）×100.0%。

1.2.5 細胞劃痕實驗

取對數(shù)期細胞接種在35mm培養(yǎng)皿，培養(yǎng)24 h后取無菌牙簽沿培養(yǎng)皿底部進行劃痕，使用無菌PBS洗細胞3次，洗去不貼壁的細胞后重新加入培養(yǎng)基。在劃痕第0h、24h倒置相差顯微鏡下觀察細胞遷移情況并攝影。比較各組細胞遷移率，細胞遷移率=（0h劃痕寬度-培養(yǎng)后劃痕寬度）/0h劃痕寬度×100%。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，兩樣本均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 GM-CSF對胃癌細胞活性和增殖的促進作用

與空白對照組相比較，GM-CSF刺激組胃癌細胞活性、克隆形成率均有明顯升高（P＜0.05）（圖1）。提示GM-CSF處理具有促進胃癌細胞活性和細胞增殖的作用。

圖1 胃癌SGC7901細胞活性和細胞增殖的影響

2.2 GM-CSF對胃癌細胞遷移效果的促進作用

與空白對照組相比較，GM-CSF刺激組胃癌細胞遷移進程有明顯加快（P＜0.05）（圖2）。提示GM-CSF處理具有促進胃癌細胞遷移進展的作用。

圖2胃癌SGC7901細胞遷移的影響

3 討論

GM-CSF是人體主要造血細胞生長因子之一。早期臨床數(shù)據(jù)表明，GM-CSF具有提升腫瘤患者化療藥物最大耐受劑量、減少感染和促進造血恢復等作用[10,11]，是臨床上常用的化療輔助藥物[12]。然而，有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境中的GM-CSF可刺激腫瘤生長，促進腫瘤細胞的發(fā)展[6,13]。本文中的克隆形成實驗和MTT細胞活性實驗結果表明，GM-CSF能夠刺激胃癌細胞增殖并增強細胞活性，與之前的報道一致。同時，我們的細胞劃痕實驗還發(fā)現(xiàn)了GMCSF 能夠促進胃癌細胞遷移，這一發(fā)現(xiàn)對臨床上研究胃癌的轉移和侵襲有重要的參考價值。

綜上所述，GM-CSF促進胃癌細胞增殖的同時促進胃癌細胞遷移。表明GM-CSF對胃癌的發(fā)生發(fā)展過程具有重要作用。但是，GM-CSF促進胃癌進展的相關通路和途徑目前還不清楚，有待進一步研究。