• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蒼術(shù)揮發(fā)油殺菌活性評(píng)價(jià)及抑菌機(jī)制

    2020-03-22 07:53:50蔣圓婷靳羽含趙晨宇劉艷麗梁寒峭馬國(guó)需
    關(guān)鍵詞:埃希氏蒼術(shù)菌體

    王 喆, 蔣圓婷, 靳羽含, 趙晨宇, 劉艷麗, 梁寒峭*, 馬國(guó)需

    (1. 北京城市學(xué)院 生物醫(yī)藥學(xué)部, 北京100094;2. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所, 北京100093)

    蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea(Thunb.) DC. 或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根莖。 味辛、苦,性溫,入脾、胃、肝經(jīng),具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒、明目之功[1]。 蒼術(shù)作為常用中藥在我國(guó)擁有2000 多年的應(yīng)用歷史, 最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,被列為上品。 《本草備要》記載其有辟穢之功。 《名醫(yī)別錄》中記載運(yùn)用含有蒼術(shù)的復(fù)方,來治療皮膚瘙癢,達(dá)到止癢效果[2]。 經(jīng)過現(xiàn)代科學(xué)研究證明, 蒼術(shù)的主要?dú)⒕钚猿煞譃閾]發(fā)油,其中包括蒼術(shù)素(atractylodin)、茅術(shù)醇(hinesol)、蒼術(shù)酮(atractylone)、核桉油醇(eudesmol)等[3]。 大量研究表明,蒼術(shù)揮發(fā)油具有較強(qiáng)的抗菌活性,對(duì)大腸埃希氏菌、酵母、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等臨床常見致病菌具有良好的抑制作用,且抑菌效果與揮發(fā)油濃度正相關(guān),揮發(fā)油中的蒼術(shù)素比蒼術(shù)酮具有更強(qiáng)的抑菌活性[4]。 本研究中對(duì)蒼術(shù)揮發(fā)油的體外殺菌活性進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以常見的大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、白假絲酵母作為供試菌,從藥物對(duì)菌體生長(zhǎng)的影響、AKP 的含量變化、胞外大分子物質(zhì)蛋白質(zhì)含量的測(cè)定等多個(gè)方面闡述蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)供試菌的作用機(jī)制,從而為拓展中藥蒼術(shù)的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

    1 儀器與材料

    1.1 儀器

    BSA2202S 電子天平:德國(guó)Sartorius 公司產(chǎn)品;DNP-9052BS-Ⅲ恒溫培養(yǎng)箱: 上海新苗公司產(chǎn)品;分光光度計(jì):Spectrum 公司產(chǎn)品;ZWYR-2102C 恒溫培養(yǎng)搖床: 上海智城公司產(chǎn)品;SW-CJIF 超凈工作臺(tái):天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司產(chǎn)品;立式壓力蒸汽滅菌器:上海博迅公司產(chǎn)品;麥?zhǔn)媳葷峁埽簭V東環(huán)凱微生物科技有限公司產(chǎn)品。

    1.2 藥材

    蒼術(shù)飲片(批號(hào)20180403):產(chǎn)地河南信陽。

    1.3 試劑

    堿性磷酸酶試劑盒(批號(hào)20181228):南京建成生物工程研究所提供;甘氨酸(批號(hào)080702):上??颠_(dá)氨基酸廠制造; 吐溫-80 (批號(hào)2017052):Biotopped 公司產(chǎn)品;酵母浸粉(批號(hào)20130728):北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品; 胰蛋白胨(批號(hào)20181022):北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品;蛋白胨(批號(hào)20170306):北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品;牛肉膏(批號(hào)20150102):北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品; 葡萄糖(批號(hào)20160828):北京化工廠制造;十二烷基硫酸鈉(檔案編號(hào)069709005200):山東優(yōu)索化工科技有限公司產(chǎn)品;瓊脂粉、氯化鈉(批號(hào)20140623):北京化工廠制造;磷酸二氫鉀(分析純):北京化工廠制造;氫氧化鈉(分析純):北京化工廠制造。

    1.4 指示菌和培養(yǎng)基

    CICC 21530 大腸埃希氏菌Escherichia coliEHECO157:H7、CICC 21600 金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus:胰酪大豆胨瓊脂斜面培養(yǎng)基(TSA);CICC 32380 白假絲酵母Candida albicans:沙氏瓊脂斜面培養(yǎng)基(SDA)。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 蒼術(shù)揮發(fā)油的制備

    研究發(fā)現(xiàn),水蒸氣蒸餾法提取的蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)各供試菌體的抑制作用要強(qiáng)于微波萃取法和索氏提取法[6]。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)合前期考察的揮發(fā)油提取方法,將蒼術(shù)飲片粉碎為干粉, 裝入盛有10 倍量水的水蒸氣蒸餾提取器中,溫度控制在100 ℃左右,6 h 后提取器支管中流出的液體變?yōu)闊o色, 隨即停止提取。 用分液漏斗分離去除下部蒸餾水,上部棕黃色液體即為蒼術(shù)揮發(fā)油粗提物,于4 ℃冰箱中密封保存[5]。

    2.2 抑菌活性研究

    2.2.1 平板的制備 指示菌平板分上下兩層。 先加入8 mL 瓊脂培養(yǎng)基作為下層培養(yǎng)基, 待培養(yǎng)基完全凝固后,在其上擺放4~6 只牛津杯,再加入20 mL相應(yīng)培養(yǎng)基。 待上層培養(yǎng)基完全凝固后,將牛津杯取出。

    2.2.2 抑菌實(shí)驗(yàn) 用新鮮培養(yǎng)的指示菌株菌懸液,調(diào)至菌液濃度0.5 McFarland,均勻涂布在雙層平板上,孔內(nèi)加入100 μL 的樣品、陰性對(duì)照(100 μL 新鮮培養(yǎng)基)和陽性對(duì)照(阿莫西林溶液),置于4 ℃冰箱4 h 后,放置在37 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)24 h(或28 ℃培養(yǎng)48 h),觀測(cè)抑菌圈形成情況,使用游標(biāo)卡尺精密測(cè)量抑菌圈的外徑d(cm),以反映抑菌活性強(qiáng)弱。

    制備含揮發(fā)油提取物的培養(yǎng)基平皿:將揮發(fā)油提取物用DMSO 稀釋,每一菌株制備7 個(gè)系列質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 將不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的試液分別定量地加到熱溶解后的相應(yīng)培養(yǎng)基中,混勻,制成分別含揮發(fā)油提取物 (質(zhì)量分?jǐn)?shù))0.01%、0.025%、0.05%、0.10%、0.25%、0.50%、1.0%共7 個(gè)不同的平皿。

    用新鮮培養(yǎng)的指示菌株將菌懸液濃度調(diào)至0.5 McFarland,而后均勻涂布在上述平板上,放置相應(yīng)溫度下培養(yǎng)24 h, 觀察各平皿的菌落生長(zhǎng)情況,確定出揮發(fā)油提取物的最小抑菌濃度(MIC)[7-8]。

    2.3 懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn)

    2.3.1 揮發(fā)油溶液的配制 分別取蒼術(shù)揮發(fā)油純品和醇提物與無水乙醇混溶,分別制成含揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)25%和2.5%的溶液, 醇提物質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%和1%的溶液,備用。

    2.3.2 菌懸液制備 將各實(shí)驗(yàn)菌經(jīng)過分離培養(yǎng),選取單個(gè)典型菌落, 白假絲酵母接種于SDA 培養(yǎng)基,大腸埃希氏菌、 金黃色葡萄球菌接種于TSA 培養(yǎng)基,培養(yǎng)24 h,用磷酸鹽緩沖液洗下斜面培養(yǎng)物,經(jīng)充分混勻, 稀釋配制成實(shí)驗(yàn)菌懸液, 含菌量為1×107~5×107CFU/mL[9]。

    2.3.3 中和劑的制備及選擇 中和劑的制備:準(zhǔn)確量取0.68 g 磷酸二氫鉀、1.415 g 無水磷酸氫二鈉,加水稀釋至1 000 mL,配制成磷酸鹽緩沖液。 準(zhǔn)確稱量甘氨酸、吐溫-80,按實(shí)驗(yàn)需要,配制成含0.5 g/dL甘氨酸,3 g/dL 吐溫-80 的磷酸鹽緩沖液[10]。

    實(shí)驗(yàn)菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌和白假絲酵母,設(shè)計(jì)6 組實(shí)驗(yàn),按懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn)程序進(jìn)行中和劑選擇實(shí)驗(yàn)[11-12]。 當(dāng)?shù)? 組不長(zhǎng)菌,第3—5 組組間菌數(shù)差不超過10%,第1 組不長(zhǎng)菌或菌數(shù)遠(yuǎn)少于第2 組,第2 組菌數(shù)超過100 CFU/mL 時(shí),連續(xù)3 次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,表明所試中和劑及其濃度適宜。

    2.3.4 懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)在20 ℃條件下進(jìn)行, 用質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%DMSO 將各蒼術(shù)揮發(fā)油乙醇溶液溶解,再用無菌蒸餾水稀釋成實(shí)驗(yàn)濃度。 在無菌試管內(nèi)加入0.5 mL 菌懸液與4 mL 不同濃度的蒼術(shù)揮發(fā)油溶液以及0.5 mL 硬水混勻,作用至規(guī)定時(shí)間,吸取0.5 mL 反應(yīng)液,加入4.5 mL 中和劑,混勻。中和作用10 min,取混合后的樣液1 mL 接種培養(yǎng),接種于事先準(zhǔn)備好的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)皿上,放入37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),48 h 后對(duì)菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)[11]。

    制劑溶劑對(duì)照實(shí)驗(yàn)是將0.5 mL 菌懸液與4 mL稀釋液及0.5 mL 硬水混勻,作用10 min 后,按上述程序進(jìn)行活菌計(jì)數(shù),計(jì)算平均殺滅率。

    陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)是將0.5 mL 菌懸液與4 mL 阿莫西林或氟康唑溶液及0.5 mL 硬水混勻,作用10 min后,按上述程序進(jìn)行活菌計(jì)數(shù),計(jì)算平均殺滅率。

    2.4 抑菌機(jī)制研究

    2.4.1 對(duì)菌體生長(zhǎng)曲線的影響 分別將不同濃度的蒼術(shù)揮發(fā)油溶液加入菌懸液中,使得揮發(fā)油終質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.5%、1.0%、2.0%,菌體濃度為1×107CFU/mL 的NB 培養(yǎng)基,對(duì)照組加滅菌雙蒸水,將以上培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱,37 ℃、120 r/min 的搖床中培養(yǎng)12 h,每隔1 h 取樣,于600 nm 處測(cè)定吸光度[13]。

    2.4.2 對(duì)菌體細(xì)胞壁的影響 分別將不同濃度的蒼術(shù)揮發(fā)油溶液加入菌懸液中,揮發(fā)油終質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.5%、1.0%、2.0%, 菌體濃度為1×107CFU/mL 的NB 培養(yǎng)基,對(duì)照組加滅菌雙蒸水;將以上培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱,37 ℃、120 r/min 的搖床中培養(yǎng),定時(shí)于0、1、2、3、4、5、6、7、8 h 取樣,離心10 min,速度4 000 r/min,吸取上清液按照試劑盒方法測(cè)定堿性磷酸酶(AKP)的含量變化。 每個(gè)樣品平行實(shí)驗(yàn)3 次,取平均值[13-15]。

    2.4.3 對(duì)菌體可溶性蛋白質(zhì)泄露量的影響 分別將不同濃度的蒼術(shù)揮發(fā)油加入菌懸液中,使得揮發(fā)油終質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.5%、1.0%、2.0%, 菌體濃度為1×107CFU/mL 的NB 培養(yǎng)基,對(duì)照組加滅菌雙蒸水,將以上培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱,37 ℃、120 r/min 的搖床中培養(yǎng)。 分別于0、1、2、3、4、5、6、7、8 h 定時(shí)取樣,蛋白質(zhì)含量按照Bradford 的方法進(jìn)行。 每個(gè)樣品平行實(shí)驗(yàn)3 次,取平均值[15-16]。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 蒼術(shù)揮發(fā)油抑菌活性

    3.1.1 不同提取溶劑對(duì)提取物抑菌效果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%和25%蒼術(shù)蒸餾提取的揮發(fā)油具有抑菌效果,隨著質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加對(duì)菌體的抑制作用隨之增加。 蒼術(shù)醇提物無抑菌效果,助溶劑無抑菌效果。 陽性對(duì)照對(duì)細(xì)菌有抑制效果,對(duì)白假絲酵母無抑菌效果,見表1。

    3.1.2 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油抑菌效果 蒼術(shù)揮發(fā)油提取物對(duì)白假絲酵母的抑制活性最強(qiáng),MIC值為0.5%;對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌抑制活性較弱,MIC 值均為1.0%。 見表2。

    3.2 蒼術(shù)揮發(fā)油殺菌活性

    3.2.1 中和劑選擇實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,以含5 g/L甘氨酸、30 g/L 吐溫-80 的磷酸鹽緩沖液組成的中和劑, 可有效中和蒼術(shù)揮發(fā)油抑菌液殘余抑菌作用,且中和劑及其中和產(chǎn)物對(duì)實(shí)驗(yàn)菌和培養(yǎng)基無影響,結(jié)果見表3。 中和劑選擇含0.5 g/dL 甘氨酸,3 g/dL 吐溫-80 的磷酸鹽緩沖液符合要求。

    3.2.2 懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蒼術(shù)揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%時(shí)對(duì)大腸埃希氏菌具有一定抑制效果,對(duì)白假絲酵母和金黃色葡萄球菌的抑制質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于2%。 單方使用抑菌效果有限,由于受到蒼術(shù)揮發(fā)油溶解性的影響, 當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于2%時(shí),會(huì)產(chǎn)生分層現(xiàn)象,影響產(chǎn)品穩(wěn)定性和抑菌效果。 結(jié)果見表4。

    表1 蒼術(shù)揮發(fā)油的抑菌實(shí)驗(yàn)Table 1 Bacteriostasis experiment of volatile oil of Atractylodes chinensis

    表2 揮發(fā)油的最小抑菌濃度Table 2 Minimum bacteriostatic concentration of volatile oil

    表3 蒼術(shù)揮發(fā)油中和劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 Experimental results of volatile oil neutralizer in traditional Chinese medicine

    表4 蒼術(shù)揮發(fā)油殺菌效果Table 4 Germicidal effect of volatile oil of Atractylodes chinensis

    3.3 蒼術(shù)揮發(fā)油抑菌機(jī)制實(shí)驗(yàn)

    3.3.1 蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)菌體生長(zhǎng)曲線的影響 由圖1—3 可見,各菌體經(jīng)過蒼術(shù)揮發(fā)油處理后生長(zhǎng)趨勢(shì)與陰性對(duì)照組相比變化明顯,且蒼術(shù)揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)越大對(duì)生長(zhǎng)曲線的影響也越大。 在12 h 內(nèi),陰性對(duì)照組菌體數(shù)量呈現(xiàn)增加趨勢(shì),中低劑量樣品溶液吸光度雖略有增加, 但總體水平低于陰性對(duì)照組,說明菌體的繁殖受到一定程度的抑制;而當(dāng)蒼術(shù)揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加到2%時(shí),12 h 反應(yīng)結(jié)果與初始質(zhì)量分?jǐn)?shù)基本保持一致, 始終維持于0 點(diǎn)附近,表明蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)于各菌體均具有抑制作用,抑菌活性強(qiáng)弱與揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)。

    圖1 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)大腸埃希氏菌生長(zhǎng)曲線的影響Fig. 1 Effect of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on the growth curve of Escherichia coli

    圖2 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)曲線的影響Fig. 2 Effect of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on the growth curve of Staphylococcus aureus

    圖3 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)白假絲酵母生長(zhǎng)曲線的影響Fig. 3 Effect of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on the growth curve of Candida albicans

    3.3.2 蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)菌體細(xì)胞壁的影響 堿性磷酸酶是存在于細(xì)胞膜與細(xì)胞壁之間的一種酶,在正常情況下細(xì)胞外很難檢測(cè)到它的含量。 當(dāng)細(xì)胞膜或細(xì)胞壁被破壞后,細(xì)胞通透性增加,堿性磷酸酶泄露到細(xì)胞外,通過檢測(cè)細(xì)胞外酶的變化可以反映出細(xì)胞結(jié)構(gòu)及通透性的改變。 從圖4—6 中可以看出,從反應(yīng)最初開始,3 種菌在不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的蒼術(shù)揮發(fā)油的作用下堿性磷酸酶水平顯著高于對(duì)照組,堿性磷酸酶含量與蒼術(shù)精油質(zhì)量分?jǐn)?shù)成正相關(guān),且一直處于平穩(wěn)狀況。 通過觀察可以得知,蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)3 種指示菌細(xì)胞壁具有很強(qiáng)的破壞性。

    圖4 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)大腸埃希氏菌細(xì)胞壁的影響Fig. 4 Effect of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on cell wall of Escherichia coli

    圖5 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的影響Fig. 5 Effect of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on cell wall of Staphylococcus aureus

    圖6 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)白假絲酵母細(xì)胞壁的影響Fig. 6 Effect of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on cell wall of Candida albicans

    3.3.3 蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)菌體胞外蛋白質(zhì)的影響 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程在0~0.1 μg/mL 質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,x為蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度,y為吸光度,菌液蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y= 7.435 7x+0.022,R2=0.996 4。

    由圖7—9 可見, 經(jīng)不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的蒼術(shù)揮發(fā)油處理后,與對(duì)照組相比,在600 nm 處的吸光度值明顯增加,且胞外蛋白質(zhì)的吸光度隨著揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大而增大,說明隨著蒼術(shù)揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增高,菌體通透性屏障受損程度隨之增高,從而從胞內(nèi)流出的蛋白質(zhì)量越多,蒼術(shù)揮發(fā)油可通過破壞菌體細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),從而發(fā)揮抑菌殺菌的效果。

    圖7 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)大腸埃希氏菌胞外可溶性蛋白質(zhì)泄露量的影響Fig. 7 Effects of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on the extracellular soluble protein leakage of Escherichia coli

    圖8 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)金黃色葡萄球菌胞外可溶性蛋白質(zhì)泄露量的影響Fig. 8 Effect of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on the extracellular soluble protein leakage of Staphylococcus aureus

    圖9 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)白假絲酵母胞外可溶性蛋白質(zhì)泄露量的影響Fig. 9 Effects of different volatile oil concentrations of Atractylodes chinensis on the extracellular soluble protein leakage of Candida albicans

    4 結(jié) 語

    本研究中考察了蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌和白假絲酵母的體外抑菌活性、殺菌活性和抑菌機(jī)制。 從抑菌效果可知,蒼術(shù)蒸餾提取的揮發(fā)油對(duì)于3 種指示菌均具有抑菌效果,其中對(duì)白假絲酵母的抑制活性最強(qiáng),最小抑菌質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%,對(duì)大腸埃希氏菌和金黃色酵母菌的抑制活性相對(duì)較弱,最小抑菌質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0%。 通過體外殺菌實(shí)驗(yàn)可知,蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)大腸埃希氏菌表現(xiàn)出明顯殺菌效果, 但蒼術(shù)揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加到2%時(shí),對(duì)金黃色葡萄球菌和白假絲酵母雖有一定殺滅作用,但殺菌率仍未達(dá)到要求。 通過抑菌機(jī)制研究可以看出,蒼術(shù)揮發(fā)油能夠通過影響和破壞菌體細(xì)胞膜、細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),改變菌體正常滲透作用,導(dǎo)致菌體內(nèi)AKP、蛋白質(zhì)等胞內(nèi)物質(zhì)外泄,從而導(dǎo)致菌體死亡,發(fā)揮抑菌效果。 蒼術(shù)揮發(fā)油具有一定抑菌效果,但由于其水溶性有限,高濃度單獨(dú)使用容易分層析出,影響使用效果,因此以蒼術(shù)揮發(fā)油為原料的復(fù)配制劑還有待進(jìn)一步研究。

    猜你喜歡
    埃希氏蒼術(shù)菌體
    埃希氏菌的遺傳演化關(guān)系分析
    菌體蛋白精養(yǎng)花鰱高產(chǎn)技術(shù)探析
    東北酸菜發(fā)酵過程中菌體的分離與鑒定
    蒼術(shù)行情疲軟運(yùn)行
    食品中大腸埃希氏菌O26血清型檢測(cè)方法的建立
    GC法同時(shí)測(cè)定不同種類蒼術(shù)中6種成分
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:59
    關(guān)蒼術(shù)根莖中蒼術(shù)酮含量及變化規(guī)律研究
    菌體蛋白水解液應(yīng)用于谷氨酸發(fā)酵的研究
    鹽酸克倫特羅生物素化單鏈抗體在大腸埃希氏菌中的表達(dá)
    黃芩苷對(duì)一株產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌體內(nèi)外抗菌作用的研究
    免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 插阴视频在线观看视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 色5月婷婷丁香| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一级a做视频免费观看| 插阴视频在线观看视频| 成人美女网站在线观看视频| 日本黄大片高清| 观看av在线不卡| 欧美精品国产亚洲| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 18禁动态无遮挡网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久免费观看电影| 97超视频在线观看视频| 大片免费播放器 马上看| 色视频www国产| 国产欧美日韩精品一区二区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av福利片在线| 9色porny在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美精品一区二区大全| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 男人舔奶头视频| 一级片'在线观看视频| 最后的刺客免费高清国语| 成年av动漫网址| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久ye,这里只有精品| 简卡轻食公司| h视频一区二区三区| 大话2 男鬼变身卡| 男女边吃奶边做爰视频| 精品人妻熟女av久视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产免费又黄又爽又色| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲国产最新在线播放| 91成人精品电影| 亚洲成色77777| 精品久久久久久久久亚洲| 18禁在线播放成人免费| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 久久久久久伊人网av| 国精品久久久久久国模美| 亚洲精品456在线播放app| 熟女av电影| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久国产一区二区| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久久久国产网址| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久青草综合色| 国产精品国产三级国产专区5o| 久热这里只有精品99| 我的老师免费观看完整版| 一本色道久久久久久精品综合| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美丝袜亚洲另类| 高清视频免费观看一区二区| 观看av在线不卡| 久久精品久久精品一区二区三区| 自线自在国产av| www.av在线官网国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 综合色丁香网| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 有码 亚洲区| 在线 av 中文字幕| 秋霞伦理黄片| 日本av免费视频播放| 青青草视频在线视频观看| 欧美日韩av久久| h视频一区二区三区| 一级,二级,三级黄色视频| 大片电影免费在线观看免费| 97精品久久久久久久久久精品| 青春草视频在线免费观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 青春草视频在线免费观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 在线精品无人区一区二区三| 国内揄拍国产精品人妻在线| 一区二区三区乱码不卡18| av在线app专区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 男女边吃奶边做爰视频| 一级av片app| 亚洲久久久国产精品| 深夜a级毛片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲精品一二三| 国产极品天堂在线| 日韩av免费高清视频| 亚洲国产色片| 国产伦精品一区二区三区四那| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲av不卡在线观看| 久久av网站| 久久国产乱子免费精品| 性色avwww在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 天堂中文最新版在线下载| 国产男人的电影天堂91| av女优亚洲男人天堂| 午夜视频国产福利| freevideosex欧美| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 2021少妇久久久久久久久久久| av在线老鸭窝| 国产av精品麻豆| 国产精品人妻久久久影院| 下体分泌物呈黄色| 亚洲久久久国产精品| 搡女人真爽免费视频火全软件| 中文字幕av电影在线播放| 色婷婷久久久亚洲欧美| 街头女战士在线观看网站| 免费黄频网站在线观看国产| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 丁香六月天网| 国产成人一区二区在线| 亚洲av日韩在线播放| 极品人妻少妇av视频| 一级毛片久久久久久久久女| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲人成网站在线播| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲色图综合在线观看| 人妻系列 视频| 赤兔流量卡办理| 男女免费视频国产| 少妇被粗大猛烈的视频| 大香蕉97超碰在线| 麻豆成人av视频| 成人国产麻豆网| 男人和女人高潮做爰伦理| 两个人免费观看高清视频 | 国产精品久久久久久久久免| 精品熟女少妇av免费看| 激情五月婷婷亚洲| 十八禁高潮呻吟视频 | 超碰97精品在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚州av有码| 久久精品夜色国产| h日本视频在线播放| 久久久久视频综合| 特大巨黑吊av在线直播| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产精品一区二区在线不卡| 国产日韩欧美亚洲二区| 只有这里有精品99| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产欧美日韩精品一区二区| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品一区www在线观看| 伦精品一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 在现免费观看毛片| 国产精品99久久久久久久久| 在线观看三级黄色| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲中文av在线| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产爽快片一区二区三区| 制服丝袜香蕉在线| 国产av国产精品国产| 一个人免费看片子| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 人妻一区二区av| 亚洲av男天堂| 亚洲精品日本国产第一区| 尾随美女入室| 成人国产av品久久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久久a久久爽久久v久久| 久久久精品免费免费高清| 99国产精品免费福利视频| 一区二区三区精品91| 欧美少妇被猛烈插入视频| 老司机影院成人| 精品亚洲成国产av| 三级经典国产精品| 欧美bdsm另类| 91精品国产国语对白视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美高清成人免费视频www| 免费观看av网站的网址| 欧美bdsm另类| 免费观看无遮挡的男女| 伊人久久国产一区二区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 婷婷色综合大香蕉| 精品少妇久久久久久888优播| 性色av一级| av专区在线播放| 男的添女的下面高潮视频| √禁漫天堂资源中文www| 欧美精品亚洲一区二区| av视频免费观看在线观看| 欧美三级亚洲精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一区二区三区免费毛片| 人妻系列 视频| 亚洲久久久国产精品| 午夜av观看不卡| 色视频在线一区二区三区| 香蕉精品网在线| 伦理电影大哥的女人| av免费在线看不卡| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 熟妇人妻不卡中文字幕| 成人亚洲精品一区在线观看| 日本午夜av视频| 久久久久久久精品精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 午夜视频国产福利| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产成人精品婷婷| 国产黄色视频一区二区在线观看| 在线观看人妻少妇| 欧美三级亚洲精品| 高清av免费在线| 曰老女人黄片| 人妻 亚洲 视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 91久久精品国产一区二区三区| 99热6这里只有精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日本与韩国留学比较| 精品少妇久久久久久888优播| 自线自在国产av| 中文字幕人妻丝袜制服| 97在线视频观看| 最近的中文字幕免费完整| 久久毛片免费看一区二区三区| 草草在线视频免费看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 色网站视频免费| 综合色丁香网| 亚洲丝袜综合中文字幕| 91久久精品电影网| 丰满迷人的少妇在线观看| 午夜久久久在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产成人精品婷婷| 人妻少妇偷人精品九色| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲天堂av无毛| 久久97久久精品| 国产亚洲一区二区精品| 内射极品少妇av片p| 国产精品无大码| av天堂久久9| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲欧美日韩东京热| 欧美日韩精品成人综合77777| 一二三四中文在线观看免费高清| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 嫩草影院新地址| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲精品视频女| 国产视频首页在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 成人亚洲精品一区在线观看| 成人特级av手机在线观看| 高清毛片免费看| 在线观看av片永久免费下载| 在线观看国产h片| 麻豆乱淫一区二区| 国产91av在线免费观看| 插逼视频在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 有码 亚洲区| 久久99热6这里只有精品| 少妇高潮的动态图| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美+日韩+精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美精品一区二区免费开放| 嫩草影院入口| 国产淫语在线视频| 国产精品无大码| 免费观看性生交大片5| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费av中文字幕在线| 久久久a久久爽久久v久久| 视频区图区小说| 丝袜在线中文字幕| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美精品亚洲一区二区| 日韩人妻高清精品专区| 下体分泌物呈黄色| 伊人亚洲综合成人网| 春色校园在线视频观看| 最近中文字幕2019免费版| 国产av国产精品国产| 久久av网站| av一本久久久久| 成年女人在线观看亚洲视频| 午夜激情久久久久久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 日日撸夜夜添| 观看免费一级毛片| 视频区图区小说| 晚上一个人看的免费电影| 久久99蜜桃精品久久| 国产中年淑女户外野战色| 成人毛片a级毛片在线播放| 99久久精品国产国产毛片| av天堂中文字幕网| 丰满少妇做爰视频| 大陆偷拍与自拍| 嫩草影院入口| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产在视频线精品| 在线天堂最新版资源| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 日本黄色日本黄色录像| 久久精品久久精品一区二区三区| 黄色配什么色好看| 一区二区三区四区激情视频| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久 成人 亚洲| 黄色配什么色好看| 精品少妇内射三级| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 毛片一级片免费看久久久久| 三级经典国产精品| 成人无遮挡网站| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲色图综合在线观看| 久久久国产精品麻豆| 91在线精品国自产拍蜜月| 麻豆成人av视频| 9色porny在线观看| 国产探花极品一区二区| 久久 成人 亚洲| 黄色一级大片看看| 国产免费视频播放在线视频| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品久久久久成人av| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一区二区三区四区激情视频| 色94色欧美一区二区| 久久韩国三级中文字幕| 大陆偷拍与自拍| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲成人av在线免费| 能在线免费看毛片的网站| 波野结衣二区三区在线| 丰满少妇做爰视频| 国产免费福利视频在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 免费高清在线观看视频在线观看| 免费看av在线观看网站| 免费观看a级毛片全部| 极品教师在线视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲美女视频黄频| av在线老鸭窝| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久这里有精品视频免费| 一级毛片电影观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲,欧美,日韩| 日韩成人av中文字幕在线观看| 伦精品一区二区三区| 嫩草影院新地址| 岛国毛片在线播放| 能在线免费看毛片的网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一本一本综合久久| 午夜日本视频在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩精品有码人妻一区| 日本91视频免费播放| 中国三级夫妇交换| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 两个人免费观看高清视频 | 高清视频免费观看一区二区| 日日爽夜夜爽网站| 国产有黄有色有爽视频| 在线 av 中文字幕| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 91aial.com中文字幕在线观看| 免费看av在线观看网站| 精品国产一区二区久久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 一级片'在线观看视频| 精品视频人人做人人爽| 国产亚洲最大av| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久精品久久精品一区二区三区| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲色图综合在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 少妇 在线观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 超碰97精品在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 日韩欧美一区视频在线观看 | 免费av不卡在线播放| 99久久精品国产国产毛片| 欧美精品一区二区大全| 热re99久久精品国产66热6| 69精品国产乱码久久久| 高清毛片免费看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 免费人成在线观看视频色| a级毛片免费高清观看在线播放| 91精品一卡2卡3卡4卡| 69精品国产乱码久久久| 99热全是精品| 精华霜和精华液先用哪个| 久久久久久人妻| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久狼人影院| 99九九线精品视频在线观看视频| 九草在线视频观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 成人毛片60女人毛片免费| 秋霞在线观看毛片| 视频区图区小说| 一级爰片在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品人妻久久久久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久国产精品大桥未久av | 亚洲精品日韩av片在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 一边亲一边摸免费视频| 久久亚洲国产成人精品v| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产男女超爽视频在线观看| 乱系列少妇在线播放| 国产一区二区三区av在线| 亚洲人成网站在线播| 黑人高潮一二区| 另类亚洲欧美激情| 一区二区三区四区激情视频| 天堂中文最新版在线下载| 免费黄色在线免费观看| 精品久久久久久久久亚洲| 97在线人人人人妻| 久久久精品94久久精品| 看免费成人av毛片| 男人和女人高潮做爰伦理| 免费高清在线观看视频在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日韩视频在线欧美| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 欧美人与善性xxx| 久久午夜福利片| 伊人亚洲综合成人网| 男人狂女人下面高潮的视频| 日韩大片免费观看网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国模一区二区三区四区视频| 美女大奶头黄色视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日本vs欧美在线观看视频 | 国产黄片视频在线免费观看| 最近中文字幕2019免费版| 51国产日韩欧美| 日本色播在线视频| 日本欧美视频一区| 我要看日韩黄色一级片| av天堂中文字幕网| 亚洲精品第二区| 视频区图区小说| 亚洲丝袜综合中文字幕| 中文字幕av电影在线播放| 寂寞人妻少妇视频99o| 在线观看www视频免费| 99久久精品热视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 大片免费播放器 马上看| 91久久精品电影网| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美精品国产亚洲| 日本黄色日本黄色录像| av不卡在线播放| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产在线一区二区三区精| 免费av中文字幕在线| 看十八女毛片水多多多| 亚洲欧美一区二区三区国产| 一区二区av电影网| 欧美变态另类bdsm刘玥| 在线观看免费高清a一片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲av福利一区| 亚洲久久久国产精品| 久久国内精品自在自线图片| 一区二区三区精品91| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 在线观看国产h片| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产精品一二三区在线看| av免费在线看不卡| 高清视频免费观看一区二区| av不卡在线播放| 亚洲熟女精品中文字幕| 中文字幕久久专区| 一二三四中文在线观看免费高清| 久久热精品热| 亚洲图色成人| 久久久精品94久久精品| 亚洲成人av在线免费| 免费在线观看成人毛片| 亚洲国产精品专区欧美| 中国美白少妇内射xxxbb| 最近手机中文字幕大全| 在线观看免费日韩欧美大片 | 亚洲电影在线观看av| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日本vs欧美在线观看视频 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 乱人伦中国视频| 我要看日韩黄色一级片| 欧美三级亚洲精品| 晚上一个人看的免费电影| 日韩av免费高清视频| 看十八女毛片水多多多| 99热全是精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美+日韩+精品| 女性被躁到高潮视频| 日本午夜av视频| 精品一品国产午夜福利视频| 精品少妇内射三级| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 观看免费一级毛片| 久久青草综合色| 22中文网久久字幕| 又爽又黄a免费视频| 免费大片18禁| 久久人妻熟女aⅴ| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美国产精品一级二级三级 | 久久久久国产精品人妻一区二区| 日本wwww免费看| 亚洲国产精品999| 国产精品嫩草影院av在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 国产淫语在线视频| 久久午夜福利片| 中文欧美无线码| 精品视频人人做人人爽| 久久午夜福利片| 91aial.com中文字幕在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 高清不卡的av网站| 这个男人来自地球电影免费观看 | .国产精品久久| 性色av一级| 亚洲av福利一区| 色94色欧美一区二区| 99热这里只有是精品在线观看| 在线观看三级黄色| 成人亚洲精品一区在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲自偷自拍三级| 看十八女毛片水多多多| 国产视频内射| 高清av免费在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 久热久热在线精品观看| 色哟哟·www| 国产有黄有色有爽视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 日韩强制内射视频| 日本黄大片高清| 亚洲人成网站在线播| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 国产精品蜜桃在线观看| 免费av中文字幕在线|