芪參益氣滴丸對(duì)心臟后負(fù)荷增加大鼠不同階段心臟全基因表達(dá)的影響

田國(guó)祥，姚璐，張薇，李彥川，馬曉慧，魏萬(wàn)林，武云濤

作者單位：1 100700 北京,解放軍總醫(yī)院第七醫(yī)學(xué)中心干四科;2 300410 天津,天士力研究院藥理毒理研究中心;3 100700 北京,解放

我們課題組前期的研究已表明，后負(fù)荷增加的大鼠在不同的心力衰竭（心衰）階段心臟全基因表達(dá)譜存在較大的差異[1]。中醫(yī)研究認(rèn)為，慢性心衰階段屬本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜之證，以心之氣陽(yáng)虛衰為本，血脈瘀滯、水飲內(nèi)停、痰濁不化為標(biāo)[2]，其基本治法應(yīng)是：溫陽(yáng)、益氣與利水化飲法等。而益氣活血化瘀組方芪參益氣滴丸是一種新型純中藥制劑，由黃芪、丹參、三七、降香配伍制成，具有益氣通脈、活血止痛的功效，臨床上已開(kāi)始用于冠心病、心絞痛、心功能不全的治療。前期臨床及基礎(chǔ)研究中觀察到：芪參益氣滴丸可降低急性冠脈綜合征（ACS）患者經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈（冠脈）介入術(shù)（PCI）后血清炎癥趨化因子的水平[3]；改善腎血管性高血壓大鼠的心肌肥厚[4,5]；并且可改善心力衰竭（心衰）患者的癥狀及心功能指標(biāo)等。為此，本項(xiàng)目研究了芪參益氣滴丸對(duì)后負(fù)荷增加心衰大鼠不同時(shí)段段基因表達(dá)的影響，結(jié)果將有利于揭示其作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和影響心臟基因表達(dá)的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組選擇雄性SD大鼠，體重200～220 g，SPF級(jí)，110只。購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。屏障動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度20～25℃，相對(duì)濕度40%～60%，每籠5只，自由飲食，每日更換墊料。110只大鼠，術(shù)前隨機(jī)取10只進(jìn)行處理（基線組，Basel組），相關(guān)參數(shù)作為基線數(shù)據(jù)；其余100只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（SHAM group，S組，30只），模型組（Model group，M組，30只）和芪參益氣滴丸低劑量組（L組，20只）、芪參益氣滴丸高劑量組（H組，20只）。其中模型組和假手術(shù)組有分別分為2周亞組、8周亞組、18周亞組，芪參益氣滴丸組分為8周亞組、18周亞組，每個(gè)亞組包含10只大鼠。

1.2 方法

1.2.1 心臟后負(fù)荷增加大鼠造模及給藥方法采用縮窄腹主動(dòng)脈的方法建立大鼠后負(fù)荷增加心衰模型，具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[1]。模型組及芪參益氣滴丸高、低劑量組大鼠采用縮窄腹主動(dòng)脈的方法建立心臟后負(fù)荷增加模型，假手術(shù)組大鼠腹主動(dòng)脈只穿線不進(jìn)行縮窄。芪參益氣滴丸組大鼠造模術(shù)后2周開(kāi)始每日給予芪參益氣滴丸流浸膏灌胃處理，低劑量組大鼠給予150 mg/kg·d，高劑量組大鼠給予300 mg/kg·d。

1.2.2 大鼠心臟結(jié)構(gòu)及血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)方法造模術(shù)前及術(shù)后2周、8周、18周采用小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像系統(tǒng)及頸動(dòng)脈插管檢測(cè)以下指標(biāo)：左室舒張末壓（LVEDP）、收縮期左心室內(nèi)壓上升的最大變化速率（+dp/dtmax），舒張期左心室內(nèi)壓下降的最大變化速率（-dp/dtmax），平均動(dòng)脈壓等，具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[1]。

1.2.3 大鼠心臟組織取材造模術(shù)前及術(shù)后2周、8周、18周，剖殺動(dòng)物，快速取心臟、沖凈、稱(chēng)重，取左心室，切成綠豆大，裝入凍存管，放入液氮中保存。送北京諾和致源生物信息科技有限公司進(jìn)行高通量測(cè)序。

1.2.4 大鼠心臟標(biāo)本建庫(kù)及全基因組測(cè)序流程由北京諾和致源生物信息科技有限公司按照?qǐng)D1所示步驟進(jìn)行：①Total RNA樣品檢測(cè)；②文庫(kù)構(gòu)建；③文庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)；④上機(jī)測(cè)序。

1.2.5 大鼠心臟基因表達(dá)分析流程及差異基因的篩選所有樣本均使用Illumina HiSeqTM2500/MiseqTM對(duì)文庫(kù)進(jìn)行高通量測(cè)序，具體由北京諾和致源生物信息科技有限公司按照?qǐng)D2所示步驟進(jìn)行。其中基因表達(dá)水平對(duì)比：通過(guò)所有基因的RPKM（Reads Per Kilo bases per Million reads）分布圖以及盒形圖對(duì)不同實(shí)驗(yàn)條件下的基因表達(dá)水平進(jìn)行比較。對(duì)于同一實(shí)驗(yàn)條件下的重復(fù)樣品，最終的RPKM為所有重復(fù)數(shù)據(jù)的平均值。差異表達(dá)基因列表：基因差異表達(dá)的輸入數(shù)據(jù)為基因表達(dá)水平分析中得到的readcount數(shù)據(jù)。對(duì)于有生物學(xué)重復(fù)的樣品，采用DESeq進(jìn)行分析。差異表達(dá)基因篩選：用火山圖可以推斷差異基因的整體分布情況，對(duì)于無(wú)生物學(xué)重復(fù)的實(shí)驗(yàn)，為消除生物學(xué)變異，從差異倍數(shù)和顯著水平兩個(gè)方面進(jìn)行評(píng)估，對(duì)差異基因進(jìn)行篩選，閾值設(shè)定一般為：|log2(FoldChange)| ＞1且qvalue＜0.005。對(duì)于有生物學(xué)重復(fù)的實(shí)驗(yàn)，由于DESeq已經(jīng)進(jìn)行了生物學(xué)變異的消除，對(duì)差異基因篩選的標(biāo)準(zhǔn)一般為：padj＜0.05。[log2FoldChange：log2(Sample1/Sample2)；Sample1：校正后樣品1的readcount值；Sample2：校正后樣品2的readcount值；log2FoldChange＞0為高表達(dá)，log2FoldChange＜0為低表達(dá)；pvalue(pval)：統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性檢驗(yàn)指標(biāo)；qvalue(padj/p-adjusted)：校正后的pvalue，qvalue越小，表示基因表達(dá)差異越顯著]。

圖1 大鼠心臟標(biāo)本建庫(kù)流程圖

圖2 大鼠心臟基因表達(dá)高通量測(cè)序及差異表達(dá)分析流程圖

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 15.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)算各組動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，不同時(shí)間段多組間均數(shù)的比較采用方差分析，組間均數(shù)的比較采用q檢驗(yàn)。P＜0.05被認(rèn)為為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 芪參益氣滴丸對(duì)后負(fù)荷增加大鼠不同時(shí)間點(diǎn)心臟重構(gòu)及血流動(dòng)力學(xué)的影響芪參益氣滴丸低劑量組大鼠平均動(dòng)脈壓術(shù)后第8周、第18周較同時(shí)間段假手術(shù)組明顯增加（P均＜0.05），較模型組降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；芪參益氣滴丸高劑量組大鼠平均動(dòng)脈壓術(shù)后第8周、第18周較同時(shí)間段假手術(shù)組增加（P＞0.05），較模型組明顯降低（P＜0.05）。芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組大鼠SV術(shù)后第8周、第18周較同時(shí)間段假手術(shù)組降低（P均＜0.05），較模型組顯著增加（P＜0.05）；芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組大鼠左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）術(shù)后第8周與同時(shí)間段假手術(shù)組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05），較模型組顯著增加（P＜0.05），術(shù)后第18周較同時(shí)間段假手術(shù)組和模型組均明顯增加（P＜0.05）。芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組大鼠左室重量術(shù)后第8周較同時(shí)間段假手術(shù)組明顯增加（P均＜0.05），與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組大鼠術(shù)后第18周與同時(shí)間段假手術(shù)組及模型組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組大鼠左室舒張末內(nèi)徑（LVIDd）術(shù)后第8周與同時(shí)間段假手術(shù)組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05），芪參益氣滴丸低劑量組LVIDd與同時(shí)間段模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）、高劑量組大鼠較模型組明顯降低（P＜0.05）；芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組大鼠LVIDd術(shù)后第18周與同時(shí)間段假手術(shù)組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05），高劑量組大鼠LVIDd術(shù)后第18周較模型組明顯降低（P＜0.05）。芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組大鼠LVEDP術(shù)后第8周、18周較同時(shí)間段假手術(shù)組明顯增加（P均＜0.05），芪參益氣滴丸低劑量組大鼠LVEDP術(shù)后第8周、18周與同時(shí)間段模型組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05），芪參益氣滴丸高劑量組大鼠術(shù)后第8周較同時(shí)間段模型組明顯降低（P＜0.05）。芪參益氣滴丸低劑量組大鼠BPM術(shù)后第8周、18周與同時(shí)間段假手術(shù)組及模型組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05），芪參益氣滴丸高劑量組大鼠BPM術(shù)后第8周、18周較同時(shí)間段假手術(shù)組及模型組明顯降低（P均＜0.05）。芪參益氣滴丸低劑量組大鼠Max dP/dt術(shù)后第8周、18周較同時(shí)間段假手術(shù)組明顯降低（P均＜0.05），芪參益氣滴丸低劑量組Max dP/dt術(shù)后第8周較同時(shí)間段模型組明顯增加（P＜0.05）；芪參益氣滴丸高劑量組大鼠Max dP/dt術(shù)后第8周與同時(shí)間段假手術(shù)組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），較同時(shí)間段模型組增加（P＜0.05），術(shù)后第18周較同時(shí)間段假手術(shù)組明顯降低（P＜0.05），較同時(shí)間段模型組明顯增加（P＜0.05）（表1）。表明后負(fù)荷增加可引起大鼠心臟發(fā)生顯著的心肌重構(gòu)及血流動(dòng)力學(xué)變化，而芪參益氣滴丸能夠改善后負(fù)荷增加大鼠血流動(dòng)力學(xué)及心臟重構(gòu)。

2.2 不同時(shí)間和組別大鼠心臟差異表達(dá)基因數(shù)量比較

2.2.1 芪參益氣滴丸組與基線大鼠心臟差異表達(dá)基因數(shù)量芪參益氣滴丸低劑量組（L組）、高劑量組（H組）大鼠在造模術(shù)后第8周與基線時(shí)全基因表達(dá)差異表達(dá)基因的個(gè)數(shù)增高，分別為2050、1710個(gè)基因，至第18周差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)回落，分別為1741、1558個(gè)基因。造模術(shù)后第8周芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組與基線差異表達(dá)基因個(gè)數(shù)較同時(shí)間點(diǎn)模型組與基線差異表達(dá)基因個(gè)數(shù)有顯著下降，其中芪參益氣滴丸高劑量組下降更顯著。術(shù)后第18周芪參益氣滴丸低劑量組、高劑量組較基線差異表達(dá)基因個(gè)數(shù)回落，與同時(shí)間段模型組相似，但都高于假手術(shù)組（表2）。

2.2.2 芪參益氣滴丸組與模型組2周亞組大鼠心臟差異表達(dá)基因數(shù)量芪參益氣滴丸低劑量組（L組）大鼠在第8周（L_8W）、第18周（L_18W）較模型組2周亞組（M_2W）差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)呈降低趨勢(shì)，分別為2011、1557個(gè)基因。芪參益氣滴丸高劑量組（H組）大鼠在第8周（H_8W）、第18周（H_18W）較M_2W亞組差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)呈升高趨勢(shì)，分別為1183、1554個(gè)基因。結(jié)果顯示，與M_2W亞組比較，芪參益氣滴丸低劑量組（L_8W）及高劑量組（H_8W）尤其是高劑量組心臟基因表達(dá)差異基因數(shù)量較模型組8周亞組（M_8W）顯著降低，而術(shù)后18周時(shí)，芪參益氣滴丸低劑量組（L_18W）心臟基因表達(dá)差異基因數(shù)量下降幅度小于模型組（M_18W），高劑量組（H_18W）差異基因數(shù)量甚至升高（表2）。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)大鼠心臟結(jié)構(gòu)及血流動(dòng)力學(xué)相關(guān)指標(biāo)比較（每組n=10）

2.2.3 芪參益氣滴丸組術(shù)后8W、18W與同時(shí)間段模型組心臟基因表達(dá)比較差異基因數(shù)量術(shù)后8周，芪參益氣滴丸低劑量組（L_8W）、高劑量組（H_8W）大鼠，較模型組（M_8W）差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)分別為46、78個(gè)基因；術(shù)后18周，芪參益氣滴丸低劑量組（L_18W）、高劑量組（H_18W）大鼠，較模型組（M_18W）差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)分別為52、32個(gè)基因。結(jié)果顯示，術(shù)后第8周，與模型組M_8W心臟基因表達(dá)比較，芪參益氣滴丸高劑量組（H_8W）差異表達(dá)基因數(shù)量高于芪參益氣滴丸低劑量組（L_8W），而術(shù)后18周時(shí)，芪參益氣滴丸高劑量組（H_18W）與模型組（M_18W）比較差異基因數(shù)量迅速下降（表2）。

表2 不同時(shí)間和組別大鼠心臟差異表達(dá)基因數(shù)量比較

2.3 芪參益氣組大鼠心臟差異表達(dá)基因及功能通路分析

2.3.1 術(shù)后8周時(shí)，芪參益氣滴丸組與模型組心臟差異表達(dá)基因造模術(shù)后8周時(shí)，芪參益氣滴丸組（H_8W、L_8W）與模型組（M_8W）大鼠心臟差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)分別為78、46個(gè)基因，其中重復(fù)基因9個(gè)，因此差異基因總個(gè)數(shù)為115個(gè)，具體差異基因名稱(chēng)及基因表達(dá)情況如圖3。

2.3.2 術(shù)后18周時(shí)，芪參益氣滴丸組與模型組心臟差異表達(dá)基因造模術(shù)后18周時(shí)，芪參益氣滴丸組（H_18W、L_18W）與模型組（M_18W）大鼠心臟差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)分別為32、52個(gè)基因，其中重復(fù)基因10個(gè)，因此差異基因總個(gè)數(shù)為74個(gè)，具體差異基因名稱(chēng)及基因表達(dá)情況如圖4。

圖3 8W時(shí)芪參益氣滴丸組與模型組大鼠比較心臟差異表達(dá)基因（橫坐標(biāo)為差異基因，縱坐標(biāo)為log2FoldChange）

圖4 18W時(shí)芪參益氣滴丸組與模型組大鼠比較心臟差異表達(dá)基因（橫坐標(biāo)為差異基因，縱坐標(biāo)為log2FoldChange）

2.3.3 芪參益氣滴丸高劑量組與模型組不同時(shí)間段心臟差異表達(dá)基因在造模術(shù)后8周、18周，芪參益氣滴丸高劑量組（H_8W、H_18W）與同時(shí)間點(diǎn)模型組（M_8W、M_18W）大鼠心臟差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)分別為78、32個(gè)基因，其中重復(fù)基因5個(gè)，因此差異基因總個(gè)數(shù)為105個(gè)，具體差異基因名稱(chēng)及基因表達(dá)情況如圖5。

2.4 芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠心臟差異表達(dá)基因功能通路分析

2.4.1 兩組大鼠心臟不同時(shí)間點(diǎn)差異表達(dá)基因GO富集柱狀圖基因本體（Gene Ontology，GO）分為生物過(guò)程（biological process）、細(xì)胞組成（cellular component）以及分子功能（molecular Function）三個(gè)部分。通過(guò)差異基因GO（Gene Ontology，GO）富集柱狀圖，可直觀觀察到芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠心臟在造模術(shù)后第8周和第18周時(shí)在生物過(guò)程、細(xì)胞組分和分子功能富集的GO term上差異基因的個(gè)數(shù)分布情況（圖6）。從圖6a中可以看出，造模術(shù)后第8周，芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠差異基因主要集中于生物過(guò)程中的離子轉(zhuǎn)運(yùn)、化學(xué)刺激反應(yīng)、金屬離子運(yùn)輸以及分子功能中水解酶活力、結(jié)合功能等。從圖6b中可以看出，造模術(shù)后第18周，芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠差異基因相對(duì)分散，主要集中于分子功能中的催化活性、肽酶活性、細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合等。

圖5 芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠比較心臟差異表達(dá)基因（橫坐標(biāo)為差異基因，縱坐標(biāo)為log2FoldChange）

圖6a H_8W vs. M_8W

圖6b H_18W vs. M_18W

2.4.2 兩組大鼠心臟不同時(shí)間點(diǎn)差異基因KEGG富集分析結(jié)果KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）是系統(tǒng)分析基因功能、基因組信息數(shù)據(jù)庫(kù)一種工具。從圖7a中可看出，造模術(shù)后第8周，芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠差異基因主要富集于晝夜節(jié)律、甘油磷脂代謝等通路中；從圖7b中可看出，造模術(shù)后第18周，芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠差異基因主要主要富集于HIF-1信號(hào)通路中等。

圖7a H_8W vs. M_8W

圖7b H_18W vs. M_18W

3 討論

在中醫(yī)傳統(tǒng)文獻(xiàn)中并無(wú)“心力衰竭”之名，根據(jù)其臨床特征，主要涉及中醫(yī)“喘證”、“水腫”、“心悸”、“怔忡”、“痰飲”、“心痹”等范疇。多數(shù)研究認(rèn)為，慢性心衰階段屬本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜之證，以心之氣陽(yáng)虛衰為本，血脈瘀滯、水飲內(nèi)停、痰濁不化為標(biāo)[2]。其基本治法應(yīng)是：溫陽(yáng)、益氣與利水化飲法。中醫(yī)認(rèn)為，黃芪每能益氣，可以補(bǔ)肺氣、益正氣、升陽(yáng)氣，心衰病人應(yīng)用黃芪，一是水腫明顯時(shí)，取黃芪有益氣行水之功，二是有氣虛血瘀時(shí)，取黃芪有益氣行血之功。中醫(yī)理論“氣為血之帥，血為氣之母”，概括“氣”與“血”的關(guān)系。氣血都是構(gòu)成人體生命活動(dòng)的基本物質(zhì)，“氣為血之帥”包括氣能生血，氣能行血?！把獮闅庵浮笔侵秆獮闅庵d體，血能生氣。二者互根互用，相互依存。益氣活血化瘀組方芪參益氣滴丸是一種新型純中藥制劑，由黃芪、丹參、三七、降香配伍制成，具有益氣通脈、活血止痛的功效，臨床上已開(kāi)始用于冠心病、心絞痛、心功能不全的治療。我們課題組前期臨床及基礎(chǔ)研究中觀察到：芪參益氣滴丸可降低ACS患者PCI后血清炎癥趨化因子的水平[3]；改善腎血管性高血壓大鼠的心肌肥厚[4,5]；并且可改善心衰患者的癥狀及心功能指標(biāo)。目前利用基因芯片技術(shù)研究心衰的基因表達(dá)譜已見(jiàn)報(bào)道[6,7]，但用其研究中醫(yī)藥對(duì)心衰相關(guān)基因譜差異表達(dá)的干預(yù)影響的研究較少見(jiàn)。

本項(xiàng)目采用縮窄腹主動(dòng)脈的方法建立大鼠心臟后負(fù)荷增加模型[8,9]，前面的研究已經(jīng)顯示模型組大鼠平均動(dòng)脈壓顯著上升、心臟重構(gòu)及心功能進(jìn)行衰退，而假手術(shù)組大鼠血流動(dòng)力學(xué)及心臟結(jié)構(gòu)無(wú)顯著變化，因此通過(guò)縮窄腹主動(dòng)脈建立的心臟后負(fù)荷增加大鼠模型造模成功[1]。本次研究中進(jìn)一步觀察了益氣活血化瘀中藥芪參益氣滴丸對(duì)后負(fù)荷增加大鼠心臟和血流動(dòng)力學(xué)的影響，結(jié)果顯示芪參益氣滴丸能夠改善后負(fù)荷增加大鼠心臟每搏輸出量、LVEF、+dp/dtmax，減小平均動(dòng)脈壓、LVIDd、左室舒張末壓，從而改善大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)及心臟重構(gòu)。

本研究顯示，芪參益氣滴丸組大鼠在造模術(shù)后第8周較基線時(shí)心臟全基因譜差異表達(dá)基因的個(gè)數(shù)呈升高趨勢(shì)，至第18周差異表達(dá)的基因個(gè)數(shù)回落。造模術(shù)后第8周芪參益氣滴丸組與基線時(shí)差異表達(dá)基因個(gè)數(shù)較同時(shí)間點(diǎn)模型組與基線差異表達(dá)基因個(gè)數(shù)有顯著下降，其中芪參益氣滴丸高劑量組下降更顯著。另外，與模型組M_2W亞組心臟基因表達(dá)比較，芪參益氣滴丸低劑量組（L_8W）及高劑量組（H_8W）尤其是高劑量組心臟基因表達(dá)差異基因數(shù)量較模型組8周亞組（M_8W）顯著降低，而術(shù)后18周時(shí)，芪參益氣滴丸低劑量組（L_18W）心臟基因表達(dá)差異基因數(shù)量下降幅度小于模型組（M_18W），高劑量組（H_18W）差異基因數(shù)量甚至升高。術(shù)后第8周，與模型組M_8W亞組心臟基因表達(dá)比較，芪參益氣滴丸高劑量組（H_8W）差異表達(dá)基因數(shù)量高于芪參益氣滴丸低劑量組（L_8W），而術(shù)后18周時(shí)，芪參益氣滴丸高劑量組（H_18W）與模型組（M_18W）比較差異基因數(shù)量迅速下降。以上結(jié)果表明，益氣活血化瘀中藥芪參益氣滴丸在術(shù)后8周和18周，可引起造模大鼠心臟基因表達(dá)譜的顯著變化，從而引起心肌細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的巨大變化，這可能是大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)及心臟重構(gòu)變化的基礎(chǔ)。

本研究中，還對(duì)芪參益氣滴丸組與模型組大鼠心臟差異表達(dá)基因功能通路進(jìn)行了分析。其中基因本體（Gene Ontology，GO）富集柱狀圖顯示，造模術(shù)后第8周，芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠差異基因主要集中于生物過(guò)程中的離子轉(zhuǎn)運(yùn)、化學(xué)刺激反應(yīng)、金屬離子運(yùn)輸以及分子功能中水解酶活力、結(jié)合功能等；造模術(shù)后第18周，芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠差異基因相對(duì)分散，主要集中于分子功能中的催化活性、肽酶活性、細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合等。另外，KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）富集分析結(jié)果顯示，造模術(shù)后第8周，芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠差異基因主要富集于晝夜節(jié)律、甘油磷脂代謝等等通路中；造模術(shù)后第18周，芪參益氣滴丸高劑量組與模型組大鼠差異基因主要主要富集于HIF-1信號(hào)通路中等。

綜上，本研究初步顯示，益氣活血化瘀中藥芪參益氣滴丸可以改善后負(fù)荷增加大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)及心臟重構(gòu)，可能與藥物引起造模大鼠心臟基因表達(dá)譜的顯著變化，導(dǎo)致心肌細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞等生物過(guò)程、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、分子功能等一系列信號(hào)通路的變化有關(guān)，但具體的信號(hào)通路還有待于進(jìn)一步的深入研究。