TNIK基因多態(tài)性與抗精神病藥療效關聯(lián)研究☆

李瑤婧 徐青青 禹順英

精神分裂癥患者對抗精神病藥物的治療反應存在顯著差異[1]。研究顯示基因多態(tài)性在藥物療效的個體差異中起重要作用，或可作為藥物療效預測的重要標記以指導臨床用藥[2]。多項研究表明腫瘤壞死因子受體相關因子-2和NCK相互作用蛋白激酶（traf2-and NCK-interacting kinase，TNIK）基因是重要的精神分裂癥候選基因[3-4]，近期有研究則指出TNIK基因還是抗精神病藥療效相關基因，TNIK rs6444970和rs2088885與抗精神病藥物療效存在關聯(lián)[5-6]。但目前有關TNIK基因多態(tài)性與抗精神病藥療效的關聯(lián)研究較少，因此本研究選擇既往文獻報道過與精神分裂癥相關的TNIK基因單核苷酸多態(tài)性位點 （single nucleotide polymorphism，SNP），就其與抗精神病藥療效的關聯(lián)在中國漢族人群中進行探索。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2016年6月至2017年10月在上海市精神衛(wèi)生中心確診及治療的住院患者。納入標準：①符合《美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊第四版》（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，F(xiàn)ourth Edition，DSM-Ⅳ）精神分裂癥診斷標準；②性別不限；③年齡16～65歲；④中國漢族；⑤未經(jīng)藥物治療，或經(jīng)藥物清洗期長于5個代謝半衰期。排除標準：①存在嚴重并發(fā)癥或有藥物濫用；②既往就診記錄顯示存在抗精神病藥抵抗；③具有明顯的自殺或沖動行為；④生命體征顯著異常，或存在未控制的重大疾?。ㄈ缛毖孕呐K病、心肌梗塞史等）。本研究方案經(jīng)上海市人類遺傳資源倫理委員會審查認證。所有入組受試者本人知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 SNPs選擇 SNPs選擇標準：①來源于TNIK基因；②既往研究證實與精神分裂癥發(fā)生相關；③在中國漢族人群中該SNP位點最小等位基因頻率（minorallele frequency，MAF）＞0.1。通過系統(tǒng)檢索文獻和數(shù)據(jù)庫 （dbSNP，HapMap，1000 Genome），共篩選出3個SNP位點（表1）。

1.2.2 外周血DNA抽提及基因分型 受試者服藥前以EDTA抗凝管采集外周靜脈血，-20℃保存。以血液基因組DNA提取試劑盒（上海萊楓生物科技有限公司）提取受試者全基因組DNA。利用AssayDesigner軟件設計引物：rs2088885正向引物序列為 5＇-ACGTTGGATGGTGATGAGGTCTCAAC TTGC-3＇，反向引物序列為5＇-ACGTTGGAT GTCAGCAATTTGGTCACAAGC-3＇；rs7627954 正向引物序列為 5＇-ACGTTGGATGAGACCTAGAGGCT TACCTTC-3＇，反向引物序列為 5＇-ACGTTGGAT GACATGAGGACAGGCAAACAC-3＇；rs13065441 正向引物序列為 5＇-ACGTTGGATGCAAGGCCTAA CACTATTTTG-3＇，反向引物序列為 5＇-ACGTTG GATGAAACTCCTCTGGTAAGTTGC-3＇。引物委托上海捷瑞生物工程有限公司合成。DNA樣本質(zhì)量檢測合格后，以Sequenom MassARRAY技術進行基因分型。

1.2.3 藥物干預及臨床療效評估 受試者予以單一抗精神病藥物治療6周，服用藥物包括利培酮（150 例）、喹硫平（37 例）、阿立哌唑（34 例）、奧氮平（10例）及奮乃靜（29例）。其中，利培酮初始用藥劑量為1 mg/d，第1周逐漸增至2～6 mg/d；喹硫平初始用藥劑量為100～200 mg/d，第1周逐漸增至400～800 mg/d；阿立哌唑初始用藥劑量為10 mg/d，第1周逐漸增至10～30 mg/d；奧氮平初始用藥劑量為 5 mg/d，第 1周逐漸增至 5～20 mg/d；奮乃靜初始用藥劑量為 4 mg/d，第 1周逐漸增至 20～60 mg/d。按以上藥物劑量維持治療至第2周結束，然后根據(jù)個體耐受情況調(diào)整用藥劑量。

表1 TNIK基因位點一般信息

藥物療效的評估采用陽性與陰性癥狀量表（positive and negative syndrome scale，PANSS），在入組當天和第6周治療結束時各評估一次，由2名經(jīng)過嚴格培訓的高年資精神科醫(yī)師獨立進行，意見統(tǒng)一后產(chǎn)生一致評分，兩位醫(yī)師對受試者基因型并不知情。PANSS減分率評估藥物療效，PANSS減分率=（PANSS終點得分-PANSS基線得分）/（PANSS 基線得分-30）×100%，PANSS 減分率≥50%為有效，＜50%為未顯效[8]。

1.3 統(tǒng)計學方法 利用SPSS 20.0進行統(tǒng)計學分析。有效組和未顯效組中SNP位點基因分布頻率是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡采用檢驗。年齡、PANSS評分組間比較采用獨立樣本t檢驗；性別、等位基因和基因型頻率分布組間比較采用檢驗，多重檢驗采用Bonferroni法進行校正。單倍型分析，以及5種遺傳模型（共顯性、顯性、隱性、超顯性及加性遺傳模型）下SNP位點基因型與藥物療效的關系，采用logistic回歸分析。統(tǒng)計效能用Quanto 1.2.4（Gauderman and Morrison 2006）計算。檢驗水準α=0.05，雙側檢驗。

2 結果

2.1 一般資料招募260例精神分裂癥患者，最終232例完成治療并隨訪。79例治療有效，153例治療未顯效，兩組患者性別及PANSS基線評分差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05），未顯效組年齡大于有效組（t=-3.391，P=0.001），治療 6周有效組的 PANSS評分低于未顯效組（t=-13.582，P＜0.001）（表 2）。

2.2 Hardy-Wemberg遺傳平衡檢驗 有效組與未顯效組中3個SNPs的基因型分布均符合Hardy-Wemberg遺傳平衡（均P＞0.05），即研究樣本具有群體代表性。

2.3 抗精神病藥物不同療效組TNIK基因多態(tài)性rs2088885等位基因（=2.039，P=0.153）及基因型（=2.001，P=0.368）分布組間差異均無統(tǒng)計學意義；rs7627954等位基因（=0.949，P=0.330）及基因型（=1.598，P=0.450）分布組間差異無統(tǒng)計學意義；rs13065441等位基因（=4.501，P=0.034）及基因型（=4.601，P=0.032）分布組間差異均有統(tǒng)計學意義，但經(jīng)Bonferroni校正后差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表 3）。

表2 有效組和未顯效組精神分裂癥患者一般資料

表3 有效組和未顯效組等位基因和基因型頻率

2.4 連鎖不平衡與單倍型分析 連鎖不平衡分析顯示rs2088885與rs7627954兩個位點處于同一個單倍型區(qū)塊中，存在較強連鎖不平衡（D=0.958，r2=0.898），可進行單倍型分析。對頻率大于0.05的單倍型進行分析：rs2088885與rs7627954組成的單倍型中，CT、AC頻率分別為0.614和0.361，2種單倍型在有效組和未顯效組間分布差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表 4）。

2.5 5種遺傳模型分析 在校正性別和年齡的情況下，5種遺傳模型中rs2088885與rs76279545基因型分布在有效組和未顯效組間的差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.6 統(tǒng)計效能 3個SNP位點最小等位基因頻率為 0.1～0.5，OR＞1.5，α=0.05[9]，在當前樣本量下（n=232），rs2088885、rs7627954、rs13065441基因分布比較分析的統(tǒng)計效能分別為87.13%、87.13%和81.83%。

3 討論

本研究選擇探索TNIK基因與抗精神病藥療效的關聯(lián)，是基于TNIK基因是一種重要的精神分裂癥易感基因[3，10]，且與抗精神病藥物療效相關，可能是精神分裂癥治療潛在的藥物靶點[11]。既往有研究對995例精神分裂癥患者SNP位點分型結果與抗精神病藥療效做關聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)TNIK基因rs2088885與氯氮平療效之間有關聯(lián)（=4.450，P=0.035）[5]。另有抗精神病藥療效相關的全基因組關聯(lián)研究，針對奧氮平、利培酮、喹硫平等常用抗精神病藥，招募3792例精神分裂癥患者（發(fā)現(xiàn)隊列2413例，驗證隊列1379例）進行藥物臨床試驗，最終確定5個位點與抗精神病藥治療反應相關，且達到全基因組顯著性水平，其中便包括 TNIK rs6444970（P=4.85×10-9）[6]。

表4 TNIK rs2088885-rs7627954模塊單倍型頻率

本研究根據(jù)既往報道選擇3個與精神分裂癥相關的SNPs（rs2088885、rs7627954、rs13065441），探究TNIK基因多態(tài)性與抗精神藥物療效的聯(lián)系。rs13065441位點等位基因C及基因型C/T的頻率分布在治療有效組及未顯效組間存在差異，但遺憾的是，經(jīng)Bonferroni校正后差異不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05），同時也未能證實 rs2088885 及 rs7627954等位基因和基因型分布在組間有統(tǒng)計學差異 （均P＞0.05）。這與既往研究報道結論不同，本研究未能證實TNIK基因位點多態(tài)性與抗精神病藥物療效的關聯(lián)。這可能是由于研究所選位點確實與抗精神病藥物療效無關，但也有可能是由于利培酮、奧氮平、奮乃靜、喹硫平、阿立哌唑作用機制存在差異，所以并不能完全排除這些基因位點與藥物療效相關的可能。

綜上，有關TNIK基因位點多態(tài)性與抗精神病藥物的關聯(lián)仍值得做進一步探究。在今后的探索中，可擴大TNIK基因SNP位點的選擇范圍，同時將藥物種類細分，以獲得更具說服力的結果。此外，由于目前相關研究都局限在中國漢族人群，今后研究在擴大樣本量的同時，還應在不同人群中開展，以進一步確認TNIK基因?qū)τ诰穹至寻Y病因研究、用藥指導及新藥研發(fā)的意義。