冠心病患者血清miR-145、TREML4水平變化及臨床意義

蔡曉航

·臨床論著·

冠心病患者血清miR-145、TREML4水平變化及臨床意義

蔡曉航*

（河南省南陽市第一人民醫(yī)院心內(nèi)二科，河南 南陽 473010）

探討冠心病患者血清miR-145、TREML4水平變化及臨床意義。選取2015年1月至2019年1月126例初診冠心病患者為研究組，50例健康志愿者作為對照組。分別以qRT-PCR法測定血清miR-145水平，Western blot法測定TREML4水平，觀察不同Gensini評分患者的血清miR-145、TREML4水平。同時采用Pearson相關(guān)性分析血清miR-145、TREML4水平與Gensini 評分相關(guān)性。研究組患者的miR-145水平明顯低于對照組（P<0.05），而TREML4明顯高于對照組（P<0.05）。Gensini評分<20分、20-40分、>40分患者的miR-145水平呈現(xiàn)下降趨勢，而TREML4水平呈現(xiàn)上升趨勢，且各組間比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Pearson相關(guān)性分析顯示，血清miR-145與冠心病患者Gensini積分呈負相關(guān)（P＜0.05），而TREML4與Gensini積分呈正相關(guān)（P＜0.05），而且血清miR-145與TREML4水平呈負相關(guān)（P＜0.05）。冠心病患者存在miR145低表達，TREML4高表達，兩者聯(lián)合檢測能反應冠心病患者的病情的嚴重程度。

冠心?。籱iR-145；TREML4；臨床意義

冠心病又稱為冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，為臨床常見疾病，男性發(fā)病率明顯高于女性，并趨于年輕化[1]。該病如不及時治療，易導致不穩(wěn)定心絞痛和急性心肌梗死的發(fā)生，嚴重時危及患者的生命。因此，尋求早期診斷和監(jiān)測病情進展的手段尤其重要。

目前，臨床上冠心病診斷的金標準是冠狀動脈造影，但該法對人易產(chǎn)生創(chuàng)傷，且無法用于早期診斷，也無法反映病情的進展[2]。研究顯示，冠心病發(fā)病與動脈粥樣硬化程度有關(guān)，是一種進展性動脈壁增厚的慢性炎性反應過程[3]。隨著研究的深入發(fā)展，越來越多的證據(jù)證明，微小核糖核酸（microRNA，miRNA）與心血管疾病有關(guān)，并穩(wěn)定存在于血清中[4]。

miR-145為miRNAs亞型之一，主要在血管平滑肌細胞中表達，通過影響平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)換，進而影響血管平滑肌細胞的增殖和遷移，從而影響動脈粥樣硬化的形成和進展，有望成為冠心病診斷的標記物[5]。

TREML4屬于髓樣細胞觸發(fā)受體（Triggering receptors expressed on myeloid cells，TREM）家族成員，與銜接分子DAP12相關(guān)聯(lián)，在CD8α+樹突細胞和脾巨噬細胞中高度表達。已有研究證明，TREML4參與動脈粥樣硬化過程，可能具有作為心血管風險生物標志物的潛力[6]。本研究重點分析冠心病患者血清miR-145、TREML4水平，為臨床冠心病的診斷、治療及預后提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年1月至2019年1月在我院接受治療的126例冠心病患者作為研究對象，均經(jīng)冠脈造影確診。其中男性78例，女性48例；年齡45~81歲，平均60.25±6.37歲；急性心肌梗死21例，不穩(wěn)定型心絞痛 47例，穩(wěn)定型心絞痛58例。選擇同期參加體檢的50例健康志愿者作為對照組，其中男32例，女18例；年齡45~82歲，平均60.47±6.52歲。兩組成員在性別、年齡等方面比較，無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。研究前所有成員均簽署知情同意書，并經(jīng)院倫理委員會的批準。

1.2 納入和排除標準

納入標準：①符合WHO的診斷標準；②冠脈血管狹窄≥50%血管≥1支；③均未治療。

排除標準：①血液系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)疾病；②心肝腎等嚴重疾病患者；③惡性腫瘤。

1.3 Gensini評分及標準

依據(jù)冠脈狹窄程度評分，無：0分，0%~25%為1分，26%~50%為2分，51%~75%為4分，76%~90%為8分，91%~99%為16分，100%為32分，各個分支積分相加，既得Gensini積分。

1.4 血清miR-145、TREML4蛋白測定

抽空腹靜脈血10 mL置于非抗凝管，3500 rpm離心15 min，分離血清。

1.4.1 qRT-PCR法測定miR-145水平

TRIzol試劑提取總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。U6作為內(nèi)部參考基因，引物序列由上海生物工程公司合成。反應體系包括10μL SYBR預混物Ex Taq?（2×），5 μmol·L-1上游和下游引物各2 μL，2 μL逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和4 μLddH2O。95℃變性30 s，55℃30 s，72℃30 s，45個循環(huán)。采用相對定量2-△△Ct法比較目的基因水平。

1.4.2 Western blot法檢測TREML4蛋白水平

常規(guī)方法提取蛋白質(zhì)，參照說明書行SDS-PAGE凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉2 h，加入一抗（TREML4，1: 1000，美國Sigma公司）4℃孵育過夜后，孵育二抗（1: 1000，上海碧云天生物技術(shù)有限公司），Bio-Rad凝膠成像系統(tǒng)成像拍照，以β-actin為內(nèi)參分析待測蛋白相對表達值。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 miR-145、TREML4水平比較

研究組miR-145蛋白表達水平明顯低于對照組，而TREML4明顯高于對照組（P<0.05），見圖1A和表2。

表1 miR-145引物序列

表2 miR-145、TREML4水平（±SD）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

2.2 不同 Gensini 評分患者血清miR-145、TREML4水平

表3顯示，Gensini 評分>40分、20-40分患者的miR-145水平均明顯低于<20分患者，而TREML4水平均高于<20分患者（P<0.05）；Gensini 評分>40分患者的miR-145水平明顯低于20-40分患者，而TREML4水平高于20-40分患者（P<0.05），見圖1B。

圖1 TREML4水平蛋白水平

注：A：1. 研究組，2. 對照組；B：1 <20分；2 20-40分；3 >40分

2.3 Gensini 評分相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析顯示，血清miR-145與Gensini積分呈負相關(guān)（r=-0.674，P＜0.05），而TREML4呈與Gensini積分正相關(guān)（r=0.638，P＜0.05），而且血清miR-145與TREML4水平呈負相關(guān)（r=-0.709，P＜0.05）。

表3 不同Gensini評分患者血清miR-145、TREML4水平

注：與<20分比較，*P<0.01；與20-40分比較，#P<0.01。

3 討論

冠心病為臨床常見病，其發(fā)生與冠狀動脈粥樣硬化有關(guān)。臨床上主要采用冠狀動脈造影進行確診，但存在一定的局限性，對患者的創(chuàng)傷較大，檢查費用高。因此，尋求一種無創(chuàng)、廉價、方便的檢查手段是必要的[7]。有研究顯示，動脈粥樣硬化的發(fā)生和炎癥、免疫機制、脂質(zhì)浸潤等因素相關(guān)，而miR145能調(diào)控血管平滑肌的增殖和遷移，其還能降低血管緊張素轉(zhuǎn)換酶水平，協(xié)調(diào)血管緊張度，并能通過抑制炎癥保護細胞[8]。TREML4來源于髓樣細胞觸發(fā)受體（TREM）家族，其存在類似于免疫球蛋白細胞外結(jié)構(gòu)域，并與銜接分子DAP12相關(guān)聯(lián)。并且已有免疫組織化學技術(shù)證明它在冠狀動脈斑塊巨噬細胞中高表達[6]。目前有關(guān)miR145、TREML4在冠心病中鮮有報道。

本文研究發(fā)現(xiàn)，研究組患者的miR145明顯低于對照組，而TREML4 蛋白的表達水平明顯高于對照組。說明miR145在冠心病患者血清中低表達，而TREML4 蛋白高表達，提示miR145和TREML4可能成為評價冠心病嚴重程度的標記物。miR145低表達主要通過血管平滑肌細胞的增殖和遷移傷害血管，并通過炎癥加重冠狀動脈硬化，促進冠心病的發(fā)生和進展。TREML4的高表達，與其參與介導促炎反應有關(guān)，并與感染性刺激炎性細胞因子或其他炎癥介質(zhì)誘導內(nèi)源反應，促進炎癥反應放大過程。但是，國內(nèi)外不少文獻報道m(xù)iR145在多種腫瘤疾病中表達異常，說明miR145用于冠心病的診斷特異性較低[9]。因此，對冠心病早期的診斷，還需要miR145和TREML4聯(lián)合檢測，才能提高檢測的特異性和靈敏度。有學者研究血管平滑肌細胞發(fā)現(xiàn)，miR-145可能通過下調(diào)LRRFIP1抑制血管平滑肌細胞的增殖和遷移[10]。而Duarte VHR等研究發(fā)現(xiàn)，TREML4 mRNA在血液白細胞中的表達和多態(tài)性與冠狀動脈疾病中動脈粥樣硬化病變的延伸相關(guān)[11]，這些都為miR145和TREML4成為冠心病早期診斷指標提供依據(jù)。

本研究中，Gensini 評分<20分、20-40分、>40分患者的miR145逐漸降低，而患者的TREML4水平呈現(xiàn)上升趨勢，提示伴隨冠心病患者病情的加重程度，miR145反應越低，TREML4越高，說明miR145和TREML4兩者能反應冠心病的嚴重程度。Pearson相關(guān)性分析顯示，血清miR-145與冠心病患者Gensini積分呈負相關(guān)，而TREML4呈與Gensini積分正相關(guān)，而且血清miR-145與TREML4水平呈負相關(guān)。同時也提示miR145和TREML4能反應冠心病患者的嚴重程度，并隨著病情發(fā)生變化。同時也提示臨床上可以通過聯(lián)合檢測miR145和TREML4水平，反應冠心病患者的早期病情，為臨床早期治療提供依據(jù)。

總之，冠心病患者miR145低表達，TREML4高表達，兩者聯(lián)合檢測能反應冠心病患者的病情的嚴重程度。但本研究也存在一定的缺點，選取的樣本量過少，因此，在后續(xù)的研究中，需要不斷的增加樣本量，以獲取準確、可靠的信息。

1 楊璇妹, 陳曉虎, 史海波. 運用“雙心同治”理論治療冠心病[J]. 中國中醫(yī)急癥, 2018, 27(1): 97-100.

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5 仲威. miR-145在動脈粥樣硬化發(fā)展中的作用[J]. 中國動脈硬化雜志, 2015, 23(5): 522-526.

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Clinical significance of changes of serum miR-145 and TREML4 in patients with coronary heart disease

Cai Xiao-hang*

(Department of Cardiology, The First People's Hospital of Nanyang, Nanyang 437010, Henan)

To investigate the changes of serum miR-145 and TREML4 levels in patients with coronary heart disease and its clinical significance.126 patients with newly diagnosed coronary heart disease were selected as the study group And 50 healthy volunteers served as the control group. Serum miR-145 level was determined by qRT-PCR and TREML4 level was determined by Western blot. According to difference of Gensini scores, serum miR-145 and TREML4 levels were analyzed. Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between serum miR-145 and TREML4 levels with Gensini score.The level of miR-145 in the study group was significantly lower than that in the control group (P<0.05), while TREML4 was significantly higher than the control group (P<0.05). The levels of miR-145 in patients with Gensini scores <20, 20-40, and >40 showed a downward trend, while the level of TREML4 showed an upward tendency. Pearson correlation analysis results showed that serum miR-145 was negatively correlated with the Gensini score in patients with coronary heart disease (P<0.05), while TREML4 was positively correlated with the Gensini score (P<0.05). The serum miR-145 was negatively correlated with TREML4 level (P<0.05).Patients with coronary heart disease have low expression of miR145 and high expression of TREML4. The combined detection can reflect the severity of the condition of patients with coronary heart disease.

Coronary heart disease; miR-145; TREML4; Clinical significance

蔡曉航，女，主治醫(yī)師，主要從事心血管病研究，Email：cxhangny@163. com。

（2019-7-26）