馬腎果葉的化學(xué)成分及其細(xì)胞毒活性

楊淑敏，王 霞，劉錫葵

（1.首都醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，北京 100069；2.中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650204）

楝科米仔蘭屬植物（Aglaia Lour.）全世界有約130多種，主要分布于中國南部、斯里蘭卡、印度和越南的熱帶雨林[1]。該屬的許多物種是傳統(tǒng)的民間中草藥，當(dāng)?shù)厝藗冇闷渲委熆人浴㈩^暈、發(fā)熱、哮喘和皮膚炎癥疾病等癥。米仔蘭屬植物中存在多種結(jié)構(gòu)特殊的次生代謝產(chǎn)物，如：環(huán)戊四氫苯丙呋喃類（Rocs）[2]、環(huán)戊四氫苯丙吡喃類[3]、肉桂酸二胺衍生物[4]、高度氧化的木脂素類和三萜類等[5-6]。其中，Rocs是米仔蘭屬植物中的特征性成分。各種體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)及作用機(jī)制研究證明，Rocs已成為抗腫瘤領(lǐng)域新型的極具應(yīng)用前景的先導(dǎo)化合物[7-10]。

馬腎果（A.testicularis C.Y.Wu）是云南東南部石灰?guī)r地區(qū)的長綠闊葉林中的特有物種，Pannell在其專著中將其定為 A.edulis[1，11]。Wang 等[12]曾從其枝葉中分離得到6個(gè)化合物，其中包括3個(gè)Rocs。筆者也從馬腎果枝條中分離得到過11個(gè)化合物，但未發(fā)現(xiàn)Rocs[13]。文章將繼續(xù)報(bào)導(dǎo)馬腎果葉中的化學(xué)成分。從馬腎果葉的乙醇提取物中分離得到了18個(gè)化合物，包括3個(gè)aglain衍生物，aglain C（1），aglaxiflorin D（2），10-O-acetylaglain C（3），1 個(gè)rocaglamide，rocaglaol（4），兩個(gè)肉桂酸二胺衍生物，odorine（5）和 odorinol（6），3 個(gè)木脂素，（2R，3R）-2，3-di-（3，4-dimethoxybenzyl）-butyrolactone（7），secoisolariciresinol dimethyl ether（8），pinoresinol（9），5 個(gè)三萜，richenone（10），richenol（11），ursolic acid（12），eichlerianic acid（13），shoreic acid（14），2 個(gè)甾體，3β-hydroxy-5α，8α-epidioxyergosta-6，22-diene（15） 和 stimast-5-en-3β，7α-diol（16），1 個(gè)黃酮，4β，10α-dihydroxy aromadendrane（17），以及 1 個(gè)倍半萜，3-hydroxy-4’，6，8-trimethoxyflavon（18）。其中，化合物 1，3-5，7，9-12，17，18 為首次從該植物中分離得到。此外首次采用二甲基四氮唑鹽（MTT）法測定了化合物1-4和6對(duì)人肺癌細(xì)胞AGZY 83-a和人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的細(xì)胞毒活性。結(jié)果顯示，化合物4對(duì)兩種細(xì)胞株均表現(xiàn)出顯著的細(xì)胞毒活性，IC50值分別為 0.013 μg/mL 和 1.571 μg/mL。見圖1。

1 儀器與材料

Bruker AM-400型和DRX-500型核磁共振儀；API Qstar Pulsar I質(zhì)譜儀；VG Auto Spec-3000質(zhì)譜儀；Bio-rad MODEL 680型酶標(biāo)儀。

柱層析硅膠和GF254薄層色譜硅膠、活性炭由青島海洋化工有限公司購買；C18反相層析硅膠為日本YMC公司生產(chǎn)；甲醇、石油醚、乙酸乙酯、丙酮均購自國藥集團(tuán)；順鉑由云南個(gè)舊生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；DMSO和MTT購自美國Sigma公司；RPMI 1640培養(yǎng)基購自美國Gibic公司。

圖1 化合物1-18的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structural formula of compound 1-18

人肺癌細(xì)胞AGZY 83-a和人肝癌細(xì)胞SMMC-7721由昆明醫(yī)學(xué)院云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室贈(zèng)送。

馬腎果葉采自云南省麻栗坡縣，植物樣品經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所分類室陶德定研究員鑒定為Aglaia testicularis C.Y.Wu的葉。

2 方法

2.1 提取與分離 干燥的馬腎果葉（5.8 kg）粉碎后用95%的乙醇浸提3次，合并提取液，減壓蒸餾至無乙醇味。所得浸膏懸浮于水，用乙酸乙酯萃取3次，減壓回收溶劑，將所得物溶于甲醇，加入90 g活性炭，在回流狀態(tài)下脫色1 h，過濾，減壓蒸餾甲醇，得棕色膏狀固體（66 g）。將其進(jìn)行硅膠常壓柱層析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫（1∶0→1∶1），得到 9 個(gè)組分（Fr1-Fr9）。Fr3經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（CHCl3-Me2CO，98∶2）及 RP-18 反相硅膠柱層析（CH3OH-H2O，1∶1→1∶0）得到化合物 4（33 mg）、7（192 mg）、10（15 mg）、11（19 mg）、12（338 mg）、13（36 mg）、14（56 mg）、15（21 mg）。Fr4經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（CHCl3-Me2CO，95∶5）和 RP-18 反相硅膠柱層析（CH3OH-H2O，1∶1→1∶0）純化，得到化合物 8（7 mg）、9（132 mg）、16（14 mg）、17（29 mg）。Fr5經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（CHCl3-Me2CO，95∶5）后用丙酮重結(jié)晶得到化合物 5（558 mg）。Fr6經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（CHCl3-Me2CO，9∶1）和 RP-18 反相硅膠柱層析（CH3OH-H2O，1∶1→1∶0）得 1（170 mg），3（11 mg），期間析出白色細(xì)小針晶，用丙酮重結(jié)晶得到化合物6（325 mg）；Fr7經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（CHCl3-Me2CO，9∶1）和 RP-18 反相硅膠柱層析（CH3OH-H2O，1∶1→1∶0）得到化合物 2（34 mg）和 18（6 mg）。

2.2 細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn) 將化合物1～4、6及對(duì)照品DDP分別用DMSO溶解，配制成50 mg/mL的母液備用。將對(duì)數(shù)生長期的人肺癌細(xì)胞AGZY 83-a和人肝癌細(xì)胞SMMC-7721調(diào)整至1×105/mL的密度種植于96孔培養(yǎng)板中，參照文獻(xiàn)[14]，采用改良的MTT法，測定各個(gè)化合物的細(xì)胞毒活性。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.38（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.11（2H，m，H-2″，6″），6.95（3H，m，H-3″，4″，5″），6.60（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.54（1H，m，H-13），6.07（1H，d，J=1.9 Hz，H-9），6.02 （1H，d，J=1.9 Hz，H-7），5.70（1H，s，OH-5），5.30（1H，d，J=6.0 Hz，NH），4.75（1H，s，H-10），4.50（1H，d，J=10.0 Hz，H-3），4.14（1H，d，J=10.0 Hz，H-4），3.85（1H，s，OH-10），3.76（3H，s，OCH3-6），3.70（3H，s，OCH3-8），3.65（3H，s，OCH3-4′），3.60（1H，m，H-16a），3.19（1H，m，H-16b），2.00（2H，m，H-14），1.74（1H，m，H-19），1.95（1H，m，H-15），1.70（1H，m，H-15），1.74（1H，m，NH），1.35（1H，m，H-20a），1.25（1H，m，H-20a），0.80（3H，d，J=7.0 Hz，H-22），0.75（3H，t，J=7.0 Hz，H-21）；13C NMR 譜數(shù)據(jù)詳見表 1；FAB-MS m/z 631[M+1]+；EIMS m/z 442（3），415（1），375（3），329（4），313（100），301（9），283（4），269（4），238（5），209（5），200（45），181（26），131（49），103（9），85（6），70（18），57（12）；（48），603（7），530（4），461（6），433（4），376（1），329（1），313（100），200（7），181（15），131（13），99（2），70（25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]對(duì)照基本一致，因此化合物1被鑒定為aglain C。

化合物 2：無色針晶；1HNMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.39（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′），7.19（2H，d，J=6.8 Hz，H-2″，6″），7.02（3H，m，H-3″，4″，5″），6.66（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′），6.51（1H，d，J=7.1 Hz，NH-17），6.37（1H，m，H-13），6.07（1H，d，J=0.8 Hz，H-9），6.05（1H，d，J=0.8 Hz，H-7），5.83 （1H，s，OH-5），4.84（1H，s，H-10），4.57 （1H，d，J=9.0 Hz，H-3），4.05（1H，d，J=9.0 Hz，H-4），3.81 （3H，s，OCH3-6），3.71（3H，s，OCH3-8），3.70 （3H，s，OCH3-4′），3.63（1H，m，H-16a），3.20 （1H，m，H-16b），2.06 （1H，m，H-14a），1.97 （1H，m，H-14b），1.91 （1H，m，H-15a），1.74（1H，m，H-15b），1.62（1H，m，H-20a），1.41（1H，m，H-20b），1.24（3H，s，H-22），0.74（3H，t，J=7.4 Hz，H-21）；13C NMR 譜數(shù)據(jù)詳見表 1；FAB-MS m/z 647[M+1]+；EIMS m/z 442（3），415（1），375（2），329（2），313（100），283（2），269（2），248（2），223（2），210（4），200（31），181（14），131（34），103（5），91（2），70（22），55（2）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[16]對(duì)照基本一致，因此化合物2被鑒定為aglaxiflorin D。

化合物 3：無色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.11（5H，m，H-2″，3″，4″，5″，6″），7.05（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），6.62（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.07（1H，d，J=1.9 Hz，H-9），6.05（1H，d，J=1.9 Hz，H-7），5.68 （1H，s，H-10），5.18，（1H，d，J=8 Hz，NH），4.60（1H，d，J=10 Hz，H-4），4.13（1H，d，J=10 Hz，H-3），3.72，3.75，3.70 （each 3H，s，OCH3×3），3.70（3H，s，OCH3-4′），2.45（3H，s，CH3COO），0.85（3H，d，J=7.0 Hz，H-22），0.80（3H，t，J=7.0 Hz，H-21）；13C NMR 譜數(shù)據(jù)詳見表1；FAB-MS m/z 673[M+1]+。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[15]對(duì)照基本一致，因此化合物3被鑒定為aglain acetate。

表1 化合物1～3的核磁共振碳譜數(shù)據(jù)（CDCl3）Tab.1 13C NMR data of compound 1～3（CDCl3）

化合物 4：無色油狀固體；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.08（2H，m，H-2′，6′），7.05（3H，m，H-3″，4″，5″），6.94（2H，d，J=9.0 Hz，H-2″，6″），6.62（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.24（1H，d，J=1.9 Hz，H-5），6.08（1H，d，J=2.0 Hz，H-7），4.73（1H，d，6.8 Hz，H-1），3.93 （1H，dd，J=11.3，6.5 Hz，H-3），3.81（3H，s，OMe-6），3.77（3H，s，OMe-8），3.63（3H，s，OMe-4′），2.66（1H，td，J=11.3，6.4 Hz，H-2a），2.08（1H，m，H-2b）；13C NMR（CDCl3，100 MHz）δ：163.6，160.7，158.3，156.9（C-6，8，4′，4a），138.6（C-1″），128.8（C-2′，6′），127.9（C-2″，6″），127.5（C-3″，5″），126.8（C-1′），126.1（C-4″），112.4（C-3′，5′），107.8（C-8a），103.3（C-3a），94.6（C-8b），92.2（C-7），89.2（C-5），78.9（C-1），53.0 （C-3），55.7，55.6，54.8 （OMe×3），36.1（C-2）；EIMS m/z 434[M]+（11），416（13），313（15），300（100），285（48），269（7），242（8），193（10），181（25），165（9），151（21），135（22），121（6），91（7），77（4）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[17]對(duì)照基本一致，因此化合物4被鑒定為Rocaglaol。

化合物 5：白色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.60（1H，d，J=15.4 Hz，H-3″），6.92（1H，d，J=15.4 Hz，H-2″），6.47，7.28，7.46（5H，m，aromatic protons），7.3（lH，d，J=15 Hz，H-3"），6.61（lH，d，J=15 Hz，H-2"），5.82（2H，m，H-2'and NH），3.69，3.44（each 1H，m，H-5′），6.08 （1H，t，J=7.5 Hz，H-2′），3.01-3.82（2H，m，H-5'），1.59-2.22（5H，m，H-3'，H-4'and H-2），1.08 （3H，d，J=6.8 Hz，H-5），0.73 （3H，t，J=7.4 Hz，H-4）；1.42 （2H，m，H-3）；.13C NMR（CDCl3，100 MHz）δ：176.0（C-1），42.6（C-2），26.8（C-3），11.6（C-4），17.1（C-5），62.5（C-2′），34.2（C-3′），21.4（C-4′），45.9（C-5′），166.0（C-1″），142.9（C-2″），117.8（C-3″），134.6（C-4″），128.0（C-5″，9″），128.6（C-6″，8″），129.8（C-7″）；EIMS m/z 300[M]+（2），215（11），199 （22），169 （30），131 （100），103（36），85（42），77（17），57（16）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[18]對(duì)照基本一致，因此化合物5被鑒定為odorine。

化合物 6：白色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.57（1H，d，J=15.4 Hz，H-3″），7.20-7.50（5H，m，aromatic protons），6.94（1H，d，J=15.4 Hz，H-2″），6.22（lH，m，H-2'），6.10（1H，t，J=7.5 Hz，H-2′），3.50-3.70（2H，m，H-5′），3.20-3.91（2H，m，H-5′），1.60（2H，q，J=7.0 HZ，H-3），1.49-2.43（4H，m，H-3′and H=4′），1.35（3H，s，H-5），0.90（3H，t，J=7.0 Hz，H-4）；13C NMR （CDCl3，100 MHz）δC:174.9 （C-1），76.1（C-2），21.9（C-3），7.8（C-4），26.1（C-5），62.5（C-2′），33.2（C-3′），34.7（C-4′），46.1（C-5′），165.9（C-1″），142.9（C-2″），118.2（C-3″），135.0（C-4″），128.7 （C-5″，9″），128.3 （C-6″，8″），129.8 （C-7″）；EIMS m/z 316[M]+（7），298（1），244（11），215（14），201（52），199（59），185（45），172（10），139（12），131（100），103（53），85（30），77（32），70 935），55（19）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[18]對(duì)照基本一致，因此化合物6被鑒定為odorinol。

化合物 7：白色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：6.44-6.73（6H，m，H-2，2′，5，5′，6，6′），4.08（1H，dd，J=8.2，6.5 Hz，H-9a），3.82（1H，dd，J=9.3，7.8 Hz，H-9b），3.80（6H，s，OMe×2），3.77（3H，s，OMe），3.79（3H，s，OMe），2.88-2.91（2H，m，H-8，8′），2.44-2.60（4H，m，H-7，7′）；13C NMR （CDCl3，100 MHz） δ：130.3（C-1），111.7（C-2），148.9（C-3），147.8（C-4），111.0（C-5），120.4（C-6），38.0（C-7），40.9（C-8），71.2（C-9），130.1（C-1′），112.2（C-2′），148.9（C-3′），147.8（C-4′），111.2（C-5′），121.2（C-6′），34.3（C-7′），46.4（C-8′），178.6（C-9′），55.7（OMe×4）；EIMS m/z 386[M]+（100），355（1），337（1），325（1），309 （1），285 （2），269 （1），248 （6），235（20），222（12），208 （18），189 （21），177 （41），151（93），137（21），121（20），107（33），91（23），77（13），69（11）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[19]對(duì)照基本一致，因此化合物7 被鑒定為（2R，3R）-2，3-Di-（3，4-dimethoxybenzyl）-butyrolactone。

化合物 8：白色針晶；1H NMR（CDCl3，400 MHz）δ：6.6-6.9 （6H，m，H-2，2′，5，5′，6，6′），3.83（6H，s，OMe×2），3.80（6H，s，OMe×2），3.7（2H，brd，H-9a，9a′），3.5 （2H，brd，H-9b，9b′），2.75 （4H，brd，H-7，7′），1.70-2.15 （2H，m，H-8，8′）；13CNMR（CDCl3，100 MHz）δ：132.9（C-1），111.1（C-2），148.7（C-3），147.0（C-4），112.0（C-5），120.8（C-6），35.7（C-7），43.8（C-8），60.3（C-9），132.9（C-1′），111.1（C-2′），148.7（C-3′），147.0（C-4′），112.0（C-5′），120.8（C-6′），35.7（C-7′），43.8（C-8′），60.3（C-9′），55.7（OMe×4）；EIMS m/z 390[M]+（36），372（7），221（9），203（34），177（33），151（100）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[20]對(duì)照基本一致，因此化合物8被鑒定為secoisolariciresinol dimethyl ether。

化合物 9：白色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：6.77-6.87 （6H，m，H-2，2′，5，5′，6，6′），4.72（2H，d，J=4.0 Hz，H-7，7′），4.23（2H，dd，J=8.8，6.6 Hz，H-8，8′），3.86（2H，d，J=3.3 Hz，H-9a，9a′），3.84（6H，s，OMe×2），3.75（2H，d，J=3.3 Hz，H-9b，9b′）；13C NMR（CDCl3，100 MHz）δ：132.7 （C-1，1′），108.6 （C-2，2′），146.7（C-3，3′），145.1（C-4，4′），114.4（C-5，5′），118.8 （C-6，6′），85.8 （C-7，7′），54.0 （C-8，8′），71.5（C-9，9′），55.8（OMe×2）；EIMS m/z 358[M]+（31），327（4），221（5），205（17），189（9），175（10），163（27），151（100），137（86），131（48），124（19），103（13），91（10），81（11），69（8），55（12）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[20]對(duì)照基本一致，因此化合物9被鑒定為pinoresinol。

化合物 10：白色針晶；1H NMR（C5D5N，500 MHz）δ：5.27 （1H，s，H-26a），4.96 （1H，s，H-26b），4.44（1H，dd，J=12.0，4.9 Hz，-HHhH-24），1.93（3H，s，H-27），1.44 （3H，s，H-21），1.12 （3H，s，H-19），1.04（3H，s，H-29），0.94 （3H，s，H-18），0.91 （3H，s，H-30），0.82（3H，s，H-28）；13C NMR（C5D5N，100 MHz）δ：40.0（C-1），34.3（C-2），216.6（C-3），47.4（C-4），55.3（C-5），19.9（C-6），34.8（C-7），40.5（C-8），50.3（C-9），36.9（C-10），22.3（C-11），25.4（C-12），42.7（C-13），50.6（C-14），31.5（C-15），28.1（C-16），50.4（C-17），15.3（C-18），16.7（C-19），76.3（C-20），26.4（C-21），38.3（C-22），30.6（C-23），74.0（C-24），149.6（C-25），110.2（C-26），17.8（C-27），26.8（C-28），21.0（C-29），16.1（C-30）；EIMS m/z 440[M]+（1），425（1），359（2），341（2），316（2），301（3），283（2），245（3），205（10），189（6），163（7），147（8），143（30），125（100），107（43），95（20），81（17），67（17），55（11）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[21]對(duì)照基本一致，因此化合物10被鑒定為richenone。

化合物 11：白色針晶；1H NMR（C5D5N，500 MHz）δ：5.28 （1H，s，H-26a），4.96 （1H，s，H-26b），4.44（1H，dd，J=12.0，4.9 Hz，-HHhH-24），3.44（1H，dd，J=11.0，5.5 Hz，H-3），1.91 （3H，s，H-27），1.43（3H，s，H-19），1.23 （3H，s，H-21），1.04 （3H，s，H-30），0.97（3H，s，H-18），0.94（3H，s，H-29），0.85（3H，s，H-28）；13C NMR（C5D5N，125 MHz）δ：39.6 （C-1），28.4（C-2），78.1（C-3），39.7（C-4），56.4（C-5），18.8（C-6），35.8（C-7），40.7（C-8），51.2（C-9），37.4（C-10），22.0（C-11），25.4（C-12），42.6（C-13），50.7（C-14），31.7（C-15），28.2（C-16），50.6（C-17），16.4（C-18），16.9（C-19），76.1（C-20），26.3（C-21），38.2（C-22），30.0（C-23），74.1（C-24），149.6（C-25），110.1（C-26），18.3（C-27），15.8（C-28），28.7（C-29），16.6（C-30）；EIMS m/z 442[M]+（1），424（2），409（1），371（1） 353（2），343（2），315（2），343（2），315（2），302（2），247（5），229（4），207（5），189（13），175（6），163（8），149（10），143（14），125（100），107（43），95（21），81（26），69（10），55（11）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[21]對(duì)照基本一致，因此化合物11被鑒定為richenol。

化合物 12：白色粉末；1H NMR（C5D5N，400 MHz）δ：5.50（1H，s，H-12），3.46（1H，m，H-3），2.65（1H，brd，J=11.4 Hz，H-18），1.25，1.25，1.08，1.03，0.91（each 3H，s，Me5），0.98 （3H，d，J=6.0 Hz，Me-29），0.93 （3H，d，J=6.2 Hz，Me-30）；13C NMR（CDCl3，100 MHz）δ：39.4（C-1），28.2（C-2），78.2（C-3），39.1（C-4），55.8（C-5），18.8（C-6），33.6（C-7），40.0（C-8），48.1（C-9），37.5（C-10），23.7（C-11），125.7（C-12），139.3（C-13），42.5（C-14），28.7（C-15），24.9（C-16），48.1（C-17），39.5（C-18），39.4（C-19），39.4（C-20），31.1（C-21），37.3（C-22），28.8（C-23），17.6（C-24），15.7（C-25），16.6（C-26），24.0（C-27），180.0（C-28），21.5（C-29），17.5（C-30）；EIMS m/z 456[M]+（3），423（1），410（1），395（1），300（5），248（100），233（10），219（26），203（76），189（34），175（20），147（21），133（61），119（31），105（25），69（23），55（21）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[21]對(duì)照基本一致，因此化合物12被鑒定為ursolic acid。

化合物 13：白色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：4.78，4.60（each 1H，s，H-28），3.55（1H，m，H-24），1.67（3H，s，Me-29），1.23（3H，s，Me-27），1.09（3H，s，Me-26），1.07（3H，s，Me-21），0.96（3H，s，Me-30），0.83（3H，s，Me-18），0.79 （3H，s，Me-19）；13C NMR（CDCl3，100 MHz）δ：24.5（C-1），34.3（C-2），177.2（C-3），147.5（C-4），41.0（C-5），31.3（C-6），33.7（C-7），39.8（C-8），49.6（C-9），38.9（C-10），22.2（C-11），25.7（C-12），42.8（C-13），50.3（C-14），28.1（C-15），26.7（C-16），50.5（C-17），15.2（C-18），20.1（C-19），86.6（C-20），23.8（C-21），34.5（C-22），26.3（C-23），83.2（C-24），70.5（C-25），24.5（C-26），27.3（C-27），113.2（C-28），23.1（C-29），16.1（C-30）；FABMS m/z 473[M-1]-（100），371（12），339（5）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[22]對(duì)照基本一致，因此化合物13被鑒定為eichlerianic acid。

化合物 14：白色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：4.87，4.66（each 1H，brs，H-28），3.65（1H，m，H-24），1.73（3H，s，Me-29），1.19（3H，s，Me-27），1.14（3H，s，Me-21），1.11 （3H，s，Me-26），1.01（3H，s，Me-18），0.89（3H，s，Me-30），0.85（3H，s，Me-19）；13C NMR（CDCl3，100 MHz）δ：28.2（C-1），33.9（C-2），179.2（C-3），147.5（C-4），41.2（C-5），24.6（C-6），34.3（C-7），40.1（C-8），50.8（C-9），39.1（C-10），22.2（C-11），26.9（C-12），42.9（C-13），50.4（C-14），31.5（C-15），25.8（C-16），49.8（C-17），15.3（C-18），20.2（C-19），86.6（C-20），27.1（C-21），34.8（C-22），26.3（C-23），86.3（C-24），70.4（C-25），27.8（C-26），24.0（C-27），113.4（C-28），23.2（C-29），16.3（C-30）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[23]對(duì)照基本一致，因此化合物14被鑒定為shoreic acid。

化合物 15：白色針晶；1H NMR（CDCl3，500 MHz）δ：6.48（1H，d，J=8.1 Hz，H-7），6.22（1H，d，J=8.3 Hz，H-6），5.19（1H，dd，J=15.2，7.6 Hz，H-23），5.12（1H，dd，J=15.2，7.6 Hz，H-22），3.94 （1H，m，H-3），0.91（3H，d，J=6.4 Hz，Me-28），0.88（3H，s，Me-19），0.84（3H，d，J=6.6 Hz，Me-26），0.83（3H，s，Me-18），0.82（3H，d，J=6.4 Hz，Me-27）；13C NMR（CDCl3，100 MHz）δ：34.6（C-1），30.1（C-2），66.4（C-3），36.9（C-4），82.1（C-5），135.4（C-6），130.7（C-7），79.4（C-8），51.4（C-9），37.1（C-10），23.4（C-11），39.3（C-12），44.5（C-13），51.6（C-14），20.6（C-15），28.6（C-16），56.2（C-17），12.8（C-18），18.2（C-19），39.7（C-20），20.9（C-21），135.1（C-22），132.4（C-23），42.7（C-24），33.0（C-25），19.9（C-26），19.6（C-27），17.6（C-28）；EIMS m/z 428[M]+（2），410（4），396（100），376（5），363（17），352（3），337（8），271（4），253（8），197（2），175（2），143（3），107（3），95（4），69（10），58（15）。上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[24]對(duì)照基本一致，因此化合物15 被鑒定為 3β-hydroxy-5α，8α-epidioxyergosta-6，22-diene。

化合物 16：白色針晶；1H NMR（CDCl3，400 MHz）δ：5.58（1H，dd，J=6.5，1.8 Hz，H-6），3.83（1H，brs，H-7），3.56（1H，m，H-3），1.03（3H，s，Me），0.90（3H，d，J=6.4 Hz，Me），0.82 （3H，t，J=7.8 Hz，Me），0.78（3H，d，J=4.4 Hz，Me），0.77 （3H，d，J=6.7 Hz，Me），0.66（3H，s，Me）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：37.1（C-1），31.4（C-2），71.4（C-3），42.1（C-4），46.3（C-5），123.9（C-6），65.4（C-7），37.6（C-8），42.2（C-9），37.3（C-10），20.8（C-11），39.2（C-12），42.3（C-13），49.5（C-14），24.3（C-15），29.3（C-16），55.8（C-17），11.7（C-18），19.1（C-19），36.1（C-20），18.3（C-21），34.0（C-22），28.3（C-23），45.9（C-24），29.3（C-25），18.8（C-26），19.8（C-27），23.1（C-28），12.0 （C-29）；EIMS m/z 430[M]+（25），412（100），398（35），271（8），252（7），229（6），211（6），175（8），161（12），147（11），135（15），109（10），93（13），81（19），69（21），55（35）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[25]對(duì)照基本一致，因此化合物 16被鑒定為 stigmast-5-en-3β，7α-diol in the literature。

化合物 17：無色針晶；1H NMR（CDCl3，400 MHz）δ：1.72（1H，m，H-5），1.65（2H，m，H-8a，H-9b），1.52（1H，m，H-9a），1.38 （1H，m，H-8b），1.24（3H，s，H-14），1.16（3H，s，H-15），1.09（3H，s，H-12），1.02（3H，s，H-13），0.57 （1H，m，H-7），0.34（1H，brt，J=13.0 Hz，H-6）；13C NMR （CDCl3，100 MHz）δ：56.3（C-1），23.8（C-2），41.1（C-3），80.3（C-4），48.4（C-5），28.2（C-6），26.6（C-7），20.1（C-8），44.4（C-9），75.0（C-10），19.5（C-11），16.4（C-12），28.6（C-13），20.3（C-14），24.5（C-15）；EIMS m/z 238[M]+（32），（2），202 （32），187 （28），177 （30），162（90），147（55），93（14）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[26]對(duì)照基本一致，因此化合物17被鑒定為4β，10α-dihydroxyaromadendrane。

化合物 18：黃色針晶；1H NMR（C5D5N，500 MHz）δ：7.79（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），6.71（1H，s，H-5），6.42（1H，s，H-7），3.75-3.87 （9H，3s，OMe×3）；13C NMR（CD3OD，100 MHz）δ：160.0 （C-2），136.6 （C-3），178.3 （C-4），126.0（C-4a），107.1（C-5），156.4（C-6），106.9（C-7），154.2（C-8），141.2（C-8a），122.7（C-1′），127.2（d，2′，6′），114.2 （C-3′，5′），159.8 （C-4′），56.2，55.9，55.8（OCH3×3）；EIMS m/z 328[M]+（72），317（14），310（24），299（15），285（20），282（100）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[27]對(duì)照基本一致，因此化合物18 被鑒定為 3-hydroxy-4′，6，8-trimethoxyflavone。

4 細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果參見表2，從中可以看出，化合物6對(duì)SMMC-7721細(xì)胞株有很強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，而化合物4對(duì)兩種細(xì)胞株表現(xiàn)出顯著的細(xì)胞毒活性，IC50值分別為 0.013 μg/mL 和 1.571 μg/mL，甚至強(qiáng)于抗癌藥物順鉑。

表2 化合物1-4和6的細(xì)胞毒活性Tab.2 Cytotoxicity of compound 1-4 and 6

5 討論

Rocs是人類繼喜樹堿、紫杉醇后從米仔蘭植物中分離得到的另一類具有顯著活性的抗腫瘤活性化合物，是當(dāng)前天然藥物研究的熱點(diǎn)之一。此次實(shí)驗(yàn)從馬腎果葉中分離得到18個(gè)化合物，包括1個(gè)Rocs和 3個(gè) aglains化合物，其中化合物 1，3-5，7，9-12，17，18 為首次從該植物中分離得到。我們曾從馬腎果枝條中分離得到過了11個(gè)化合物，但未發(fā)現(xiàn)Rocs，表明馬腎果枝條中不含Rocs或含量很低。研究結(jié)果也證明了同種植物不同部位次生代謝產(chǎn)物的生成與累積也可能不同，這為植物資源的合理利用提供了依據(jù)。

MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物4對(duì)人肺癌細(xì)胞AGZY 83-a和人肝癌細(xì)胞SMMC-7721表現(xiàn)出顯著的細(xì)胞毒活性，IC50值分別為0.013 μg/mL和1.571 μg/mL。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為馬腎果的進(jìn)一步開發(fā)研究提供了基礎(chǔ)科學(xué)數(shù)據(jù)。