HuR在胰腺癌中的表達(dá)及與其預(yù)后的相關(guān)性

張 策 姚 俊 李 強(qiáng)

胰腺癌是臨床上極其危重的惡性腫瘤[1]。Hu-抗原R(HuR)是1種轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)因子，屬于Hu/ELAV家族的RNA結(jié)合蛋白[2]。Hu/ELAV家族還包括HuB，HuC和HuD，它們主要在神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)，而HuR則是廣泛表達(dá)[3-4]。在大多數(shù)腫瘤類(lèi)型中，HuR蛋白水平增加，其細(xì)胞核到胞質(zhì)的易位表明HuR作為1種mRNA穩(wěn)定蛋白，在細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生過(guò)程中起著重要的作用[5]。細(xì)胞質(zhì)HuR可能是某些癌癥類(lèi)型的潛在預(yù)后標(biāo)志物，相關(guān)研究顯示到2030年，胰腺癌將成為第二個(gè)與癌癥相關(guān)的致死原因[6-7]。本文具體探討了HuR在胰腺癌中的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性，闡述了HuR預(yù)測(cè)預(yù)后的價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

選擇2016年1月至2018年1月期間我院診治的胰腺癌患者78例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理確診為胰腺癌；年齡40～80歲；首次發(fā)??；標(biāo)本采集前患者無(wú)經(jīng)歷任何治療；醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究；患者簽署了知情同意書(shū)；臨床與病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重心、肝、腎功能異常；臨床與病理資料缺乏者；妊娠與哺乳期間婦女；合并其它腫瘤患者。

在78例患者中，年齡40～78歲，平均年齡(58.22±3.19)歲；平均體重指數(shù)(23.47±1.27)kg/m2；臨床分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期8例，Ⅲ期65例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例；病理特征：導(dǎo)管腺癌70例，其他類(lèi)型癌8例；平均腫瘤大小(6.31±1.48)cm。

1.2 HuR表達(dá)檢測(cè)

取所有患者的癌組織與癌旁組織，予生理鹽水漂洗使血跡去除后馬上置于凍存管中，-80 ℃冰箱保存。組織標(biāo)本采用多聚甲醛固定，石蠟包埋，病理切片，免疫組化檢測(cè)HuR表達(dá)水平，試劑盒購(gòu)自科華生物工程股份有限公司，均嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行操作。所有病理組織的染色均在同一條件下進(jìn)行，用PBS代替一抗設(shè)立陰性對(duì)照。免疫組化具體過(guò)程：病理組織常規(guī)脫蠟水化、烘片、抗原修復(fù)、阻斷、加入一抗(按1∶1000稀釋抗HuR，4 ℃冰箱過(guò)夜)、加入二抗(1∶5000，室溫孵育30 min)、DAB顯色、蘇木精復(fù)染與封片，在鏡下觀察。

HuR的表達(dá)主要位于細(xì)胞核中，以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為陽(yáng)性染色。細(xì)胞染色百分率：0分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，1分：1%～25%陽(yáng)性細(xì)胞，2分：26%～50%陽(yáng)性細(xì)胞；3分：51%～75%陽(yáng)性細(xì)胞，4分：≥75%陽(yáng)性細(xì)胞；細(xì)胞染色強(qiáng)度：0分：未染色，1分：弱染色(淺棕黃色)，2分：中等染色(棕黃色)，3分：強(qiáng)染色(棕褐色)。以細(xì)胞染色百分率×胞染色強(qiáng)度為染色記分，強(qiáng)陽(yáng)性(9～12分)，弱陽(yáng)性(4～8分)，陰性(0～3分)，(強(qiáng)陽(yáng)性+弱陽(yáng)性)/本組例數(shù)×100.0%=陽(yáng)性率。

1.3 調(diào)查資料

通過(guò)查閱電子和紙質(zhì)版病歷檔案，收集患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類(lèi)型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、體重指數(shù)等。同時(shí)隨訪至2019年1月，調(diào)查患者的死亡狀況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用IBM SPSS Statistics 22.00統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以樣本率、陽(yáng)性率示，計(jì)量資料的對(duì)比采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)的對(duì)比采用四格表資料的確切概率法或χ2檢驗(yàn)，多因素采用COX回歸分析，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HuR表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比

在78例患者中，癌組織HuR表達(dá)陽(yáng)性率為85.6%，顯著高于癌旁組織的19.2%(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 不同組織HuR表達(dá)陽(yáng)性情況對(duì)比

2.2 HuR表達(dá)陽(yáng)性與臨床特征的相關(guān)性

在78例患者中，不同性別、年齡、體重指數(shù)、病理類(lèi)型患者的 HuR表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而不同腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的HuR表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 胰腺癌患者HuR陽(yáng)性表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性(例，%)

2.3 預(yù)后情況

所有患者隨訪至2019年1月，平均隨訪時(shí)間(11.53±1.28)個(gè)月，78例患者中死亡51例，死亡率為65.4%。直線相關(guān)分析顯示：患者的預(yù)后與HuR表達(dá)陽(yáng)性率、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成顯著正相關(guān)性(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 胰腺癌患者預(yù)后與其他指標(biāo)的相關(guān)性

2.4 影響因素分析

以患者隨訪預(yù)后作為因變量，COX回歸分析顯示：HuR表達(dá)陽(yáng)性率、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都為影響患者預(yù)后的主要因素(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 影響胰腺癌患者預(yù)后的因素

3 討論

胰腺癌是我國(guó)癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，雖有該病的治療方法比較多，但是其預(yù)后生存率一直比較低，1年生存率不到20%，5年生存率不到10%[8]。并且部分患者首次診斷時(shí)已是局部晚期或轉(zhuǎn)移性疾病，失去了根治性手術(shù)切除的機(jī)會(huì)[9]。胰腺癌的侵襲性比較強(qiáng)，細(xì)胞惡性增殖和腫瘤血管形成是胰腺癌發(fā)生與發(fā)展的基礎(chǔ)。

HuR結(jié)合許多mRNA之后，可增強(qiáng)細(xì)胞增殖、細(xì)胞存活、局部血管生成、逃避免疫識(shí)別、癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移[10]。乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌中HuR都呈現(xiàn)表達(dá)升高的趨勢(shì)，小鼠異種移植模型中培養(yǎng)的具有異位升高的HuR的癌細(xì)胞發(fā)展成更大的腫瘤，而減少HuR表達(dá)則減小了腫瘤的大小[11]。本研究顯示，胰腺癌組織的HuR表達(dá)陽(yáng)性率為85.6%，顯著高于癌旁組織的19.2%；不同腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等患者的HuR表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明胰腺癌中HuR呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，且與臨床特征顯著相關(guān)。當(dāng)前也有研究顯示，與缺乏HuR的細(xì)胞相比，高HuR細(xì)胞利用較少的葡萄糖，產(chǎn)生更多的乳酸；而急性葡萄糖剝奪是HuR從細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)移位的有效刺激物，從而穩(wěn)定mRNA靶標(biāo)[12]。細(xì)胞質(zhì)HuR高表達(dá)與較高的腫瘤分級(jí)以及晚期T分期密切相關(guān)，HuR過(guò)表達(dá)細(xì)胞可使得細(xì)胞增殖增加；HuR沉默可使得細(xì)胞集落形成顯著減少[13]。

胰腺癌的發(fā)生是個(gè)多基因、多步驟、多階段性的演變過(guò)程，在其癌變過(guò)程中涉及到許多基因的表達(dá)異常。HuR蛋白具有3種典型的RNA識(shí)別基序(RRM)，與其他家族成員具有> 90%的同一性；HuR結(jié)合并穩(wěn)定靶mRNA，間接增加蛋白質(zhì)的產(chǎn)生[14]。在正常細(xì)胞中，HuR主要集中在細(xì)胞核內(nèi)；而在惡性細(xì)胞中，無(wú)論是細(xì)胞系還是組織樣本，都觀察到細(xì)胞質(zhì)HuR的水平升高[15]。有研究顯示細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)HuR均與原發(fā)腫瘤增加、腫瘤分期、組織學(xué)分級(jí)以及血管侵犯程度顯著相關(guān)，也是1個(gè)整體無(wú)轉(zhuǎn)移生存率較差的陰性預(yù)后因素[16-17]。也有研究顯示細(xì)胞質(zhì)HuR表達(dá)與預(yù)后無(wú)關(guān)，不過(guò)高細(xì)胞質(zhì)HuR的腫瘤患者可能受益基于5-Fu的輔助治療，而那些低細(xì)胞質(zhì)HuR的患者，GEM似乎沒(méi)有生存優(yōu)勢(shì)[18-19]。本研究直線相關(guān)分析顯示患者的預(yù)后死亡與HuR表達(dá)陽(yáng)性率、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成顯著正相關(guān)性；COX回歸分析顯示HuR表達(dá)陽(yáng)性率、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都為影響患者預(yù)后死亡的主要因素。還有研究顯示當(dāng)癌基因和/或細(xì)胞周期因子的穩(wěn)定性增加時(shí)，高HuR細(xì)胞質(zhì)積累預(yù)示著一種惡性行為，并可作為某些癌癥預(yù)后不良和腫瘤侵襲性的獨(dú)立標(biāo)志[20-21]。不過(guò)本次研究只納入了較少的病例，可能存在一定的研究偏倚，將在下一步進(jìn)行深入分析。

總之，胰腺癌組織中HuR呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與患者的病理特征與預(yù)后顯著相關(guān)，是影響患者預(yù)后的重要指標(biāo)。