老年急性心肌梗死患者血清微小核糖核酸-302b 表達及其臨床意義

劉錄明，王 玲，何寶珍，吳 彪

（1.海南三林旅業(yè)開發(fā)有限公司澄邁富力紅樹灣醫(yī)院內科，海南澄邁 571926；2.海南省人民醫(yī)院內科，?？?570311）

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┲凶顕乐氐囊环N心血管疾病，具有發(fā)病急驟、病情進展迅速和致死率較高的特點，嚴重威脅人類的生命健康［1］。微小核糖核酸（microRNA，miR）對心肌細胞功能具有調節(jié)作用，其表達異?？赡芘c心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關，并有望成為診斷AMI 潛在的生物標志物［2-3］。近年來研究發(fā)現，miR-302b 與心血管疾病關系密切，參與心肌損傷的發(fā)生、發(fā)展，并起著重要的基因調控作用［4］。為此，本研究通過檢測老年AMI 患者血清miR-302b的濃度，分析其對AMI 的診斷價值，旨在為早期預測老年AMI 發(fā)生提供參考依據。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2015 年1 月至2018 年10 月海南三林旅業(yè)開發(fā)有限公司澄邁富力紅樹灣醫(yī)院和海南省人民醫(yī)院收治的老年AMI 患者136 例，其中男86 例，女50 例，年齡（72.15±7.46）歲。納入標準：（1）符合世界衛(wèi)生組織心肌梗死診斷和治療指南制定的標準［5］；（2）在發(fā)病12 h 內采集血樣。排除標準：（1）陳舊性心肌梗死病史、慢性心力衰竭及心功能不全病史患者；（2）急性心肌炎、肺源性心臟病、阻塞性肺部疾病及重度感染患者；（3）惡性腫瘤、嚴重肝及腎功能不全及自身免疫性疾病患者；（4）近期有腦血管事件、重大外傷及手術的患者等。另選取同期來我院體檢健康者50 名作為對照組，男34 名，女16 名，年齡（61.50±7.28）歲。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，并與所有研究對象簽署知情同意書。

1.2 觀察指標

所有研究對象均于空腹抽取靜脈血5 mL 置于未加抗凝劑的離心管中，離心分離血清，-80℃低溫冰箱保存待測。應用TaqMan MicroRNA Reverse Transcription 試劑盒逆轉錄已定量的RNA，選用U6 作為內參，反應體系為15 μL，反應參數：16℃30 min；42℃30 min，85℃5 min。在ABI 7500型熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）儀（美國ABI 公司）上進行實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-PCR）。反應體系為20 μL：TaqMan MicroRNA Assay 1.00 μL，cDNA 1.33 μL，TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00 μL，ddH2O 7.67 μL，混合后離心放入定量PCR 儀。擴增條件：95℃預熱10 min，95℃變性15 s，60℃退火60 s，45 個循環(huán)，最后38℃延伸5 s，實驗重復3 次。以U6 為內參照，采用2-△△Ct法計算miR 的相對濃度，其中△Ct=Ct 目的基因-CtU6。心肌肌鈣蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）采用化學發(fā)光法，在貝克曼DXI800 型全自動免疫分析儀上檢測；總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDLC）及肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）濃度檢測采用貝克曼AU5800 型全自動生化分析儀及配套試劑，操作過程中均嚴格按照儀器及試劑說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件分析數據。計量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗，組內比較采用重復測量的方差分析。計數資料以［n（%）］表示，組間比較采用χ2檢驗。繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）分析miR-302b、cTnI 及CK-MB 對老年AMI 診斷的價值，曲線下面積（area under curve，AUC）的比較采用Z檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2 組受試者臨床基線資料比較

AMI 組和對照組受試者的性別、年齡、體質量指數、收縮壓、舒張壓、吸煙史、高血壓史、糖尿病史、高脂血癥及血清TC、TG、LDL-C 及HDL-C 濃度比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），詳見表1和表2。

表1 AMI 組和對照組受試者計量基線比較 ［±s］

表1 AMI 組和對照組受試者計量基線比較 ［±s］

表2 AMI 組和對照組受試者計數基線比較 ［n（%）］

2.2 2 組受試者血清miR-302b、cTnI 及CK-MB濃度比較

AMI組血清miR-302b、cTnI及CK-MB濃度均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），詳見表3。

2.3 miR-302b、cTnI、CK-MB 及三項聯合診斷老年AMI 的價值

miR-302b、cTnI 及CK-MB診斷AMI的臨界值分別為2.64、1.48 ng/mL、60.75 U/L。三項聯合診斷老年AMI 的AUC（95%CI）明顯高于單項miR-302b、cTnI或CK-MB，差異有統(tǒng)計學意義（Z=4.872，4.563，7.628，P＜0.05），其敏感度和特異度為94.6%和89.0%。miR-302b 及cTnI 診斷老年AMI 的AUC相當，而且均明顯高于CK-MB，差異有統(tǒng)計學意義（Z=6.275，6.613，P＜0.05），詳見表4 和圖1。

表3 AMI 組和對照組受試者血清miR-302b、cTnI 及CK-MB 濃度比較 ［±s］

表3 AMI 組和對照組受試者血清miR-302b、cTnI 及CK-MB 濃度比較 ［±s］

表4 miR-302b、cTnI、CK-MB 及三項聯合老年診斷AMI 的價值

3 討論

AMI 是臨床上常見的急危重癥，早期診斷及早期干預可有效改善患者的預后。目前cTnI、CK-MB 等傳統(tǒng)心肌損傷標志物在AMI 的診療中發(fā)揮著重要的作用，但這些標志物診斷AMI 的敏感度和特異度不高［6］。因此，仍然有必要進一步挖掘新的心肌損傷標志物，以期為AMI 的早期診斷、早期治療提供有利的佐證。近期研究表明，miR 在細胞增殖、分化、發(fā)育及死亡過程中發(fā)揮重要作用，有可能作為診斷心肌病變的新型潛在生物標志物，也為AMI 的發(fā)生機制提供了研究的新思路［7］。cTnI 是心肌特有的結構蛋白，對心肌損傷有高度敏感性和特異性，是歐洲和美國指南中診斷AMI 的首選生物學標志物［8］。AMI 患者的心肌發(fā)生壞死時，cTnI 才會釋放到血液中，而miR 可以穩(wěn)定存在于血液中，比cTnI 更早釋放入血液。CK-MB 是一種與心肌梗死密切相關的酶類，也是臨床上診斷AMI 的常用指標，但其在早期AMI 預測中的效能具有一定局限［9］。

本研究結果顯示，miR-302b 的表達未受增齡因素影響，AMI 組血清miR-302b、cTnI 及CK-MB濃度均明顯高于對照組，提示血清miR-302b 在老年AMI 患者中高表達，其可能參與AMI 的發(fā)生、發(fā)展。陳勁松等［10］對73 例AMI 患者，49 例不穩(wěn)定型心絞痛患者和29 例健康老人血清miR 進行分析，結果顯示血清miR 在老年AMI 患者中的表達明顯升高，高表達miRNA 可能與心肌損傷或者壞死有關。Guo 等［11］研究發(fā)現，AMI 患者外周血中的miR濃度顯著升高，與cTnI、CK-MB 均呈正相關，而且miR 達峰時間早于cTnI 及CK-MB，可作為AMI 早期診斷的一種新的生物學標志物。本研究ROC分析結果顯示，miR-302b 及cTnI 診斷老年AMI 的AUC 相當，而且均明顯高于CK-MB，三項聯合診斷老年AMI 的AUC（0.933，95%CI：0.870～0.982）最大，其敏感度和特異度為94.8%和89.2%。說明miR-302b 有望作為診斷老年AMI 的潛在標志物，與cTnI 及CK-MB 三項聯合檢測有助于提高老年AMI 診斷的準確性。Yang 等［12］研究表明，血清miR-302b 是診斷AMI 的新型生物標志物，在未來有廣闊的應用前景。因此，患者被高度懷疑AMI，且cTnI、CK-MB 濃度升高不明顯時，應當檢測其血清miR-302b 濃度。

綜上所述，血清miR-302b 濃度在老年AMI 患者中明顯升高，其診斷老年AMI 的效能與cTnI相當，可作為診斷老年AMI 的生物學標志物，miR-302b 與cTnI、CK-MB 聯合檢測有助于提高老年AMI 診斷的敏感度和特異度。但目前在臨床實踐中還缺乏隨訪大樣本資料支持，miR 的分析技術與結果判斷標準不統(tǒng)一，三項聯合是否應成為常規(guī)，未來仍需更多的臨床試驗研究以進一步證實miR-302b 在AMI 中的臨床應用價值。