許曉敬 唐培培 禹寶成 郭傳濱 楊立均 孫會(huì)忠
摘要? ? 采用平板分離技術(shù)從煙草根際土壤中分離到一個(gè)菌株,編號(hào)為XXJ15,并對(duì)該菌株的幾種活性功能進(jìn)行了評(píng)估。結(jié)果表明,XXJ15在魔芋粉液體鑒別培養(yǎng)基經(jīng)過48 h發(fā)酵后,發(fā)酵液中的β-甘露聚糖酶活性達(dá)到4.6 U/mL;在解磷液體鑒別培養(yǎng)基中培養(yǎng)72 h后,培養(yǎng)基上清液中游離態(tài)磷含量達(dá)到102 μg/mL;XXJ15不具備解鉀活性。因此,菌株XXJ15可作為后期誘變育種、煙草專用菌肥和土壤保育劑開發(fā)等研究的備用菌株。
關(guān)鍵詞? ? 植煙土壤;酶活性;解磷菌;分離;活性評(píng)估
中圖分類號(hào)? ? S182? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? ? A
文章編號(hào)? ?1007-5739(2020)02-0174-01? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識(shí)碼(OSID)
Abstract? ? A strain named XXJ15 was isolated from tobacco rhizosphere soil by plate separation,and the activity function of the strain were evaluated.The results showed that after 48 h fermentation in the liquid identification medium of konjac powder,the activity of β-mannanase in the fermentation broth reached 4.6 U/mL.After culture for 72 h in the phosphorus solution identification medium,the free phosphorus content in the supernatant of the medium reached 102 μg/mL.XXJ15 didn′t have potassium activity.Therefore strain XXJ15 can be used as a backup strain for later mutagenesis breeding,tobacco special bacterial fertilizer and soil conservation agent development.
Key words? ? tobacco-growing soil;enzyme activity;phosphate-solubilizing bacteria;isolation;activity evaluation
煙草是我國一種傳統(tǒng)的經(jīng)濟(jì)作物,但在實(shí)際栽培過程中,耕作層土壤的劣變給煙葉生產(chǎn)造成了很大的困擾,成為制約產(chǎn)量和品質(zhì)提高的不利因素[1-2]。盡管微生物肥料或制劑起效普遍較慢,但通過一系列綠色或有機(jī)栽培技術(shù)的使用,保證煙葉品質(zhì)和特色成為第一要?jiǎng)?wù)[3]。我國約有74%的耕地缺磷,難溶性磷酸鹽是土壤中絕大部分磷主要的存在形式,植物不能直接吸收利用[4-6];土壤中的有效鉀易流失,需及時(shí)補(bǔ)充,尤其是對(duì)于嗜鉀作物煙草來說補(bǔ)充鉀肥更為重要[7-8];活性多糖對(duì)植物生長和土壤中的微生物活性起著重要作用。本研究對(duì)從煙草根際土壤中分離到的一株菌的生物學(xué)活性進(jìn)行了初步評(píng)估,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1? ? 材料與方法
1.1? ? 試驗(yàn)材料
土壤樣品采自駐馬店市植煙區(qū)煙田。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基[9]:牛肉膏3 g/L,蛋白胨5 g/L,氯化鈉10 g/L,瓊脂20 g/L,pH值7。
魔芋粉鑒別培養(yǎng)基[10]:魔芋精粉5 g,硫酸鎂5 g,硝酸鈉3 g,磷酸鉀1 g,硫酸鐵0.01 g,瓊脂粉20 g,蒸餾水1 000 mL,自然pH值。
解磷菌鑒別培養(yǎng)基[6]:硫酸銨0.5 g,葡萄糖5.0 g,氯化鈉0.5 g,氯化鉀0.3 g,硫酸鐵0.03 g,硫酸鎂0.3 g,硫酸錳0.03 g,雞蛋黃10 mL,菊糖1.0 g,瓊脂粉18.0 g,蒸餾水1 000 mL,自然pH值。
解鉀菌發(fā)酵培養(yǎng)基[8]:按100 g培養(yǎng)基計(jì),分別含有鉀長石0.3 g(超純水水洗5次),磷酸氫二鈉0.2 g,碳酸鈣0.01 g,七水硫酸鎂0.5 mg,三氯化鐵0.5 mg,蔗糖0.5 g,海藻糖0.1 g,瓊脂粉1.8 g,pH值控制在7.0~7.5。
LB培養(yǎng)基[9]:斜面和活化培養(yǎng)基。
1.2? ? 試驗(yàn)方法
1.2.1? ? 菌株的獲得。稱取土樣5 g,無菌操作加入裝有45 mL生理鹽水的250 mL三角瓶中,振蕩20 min,靜置30 s,制成10-1土壤稀釋液。再按10倍梯度稀釋至10-6濃度。取10-6、10-5、10-4 3個(gè)梯度稀釋液各0.1 mL涂布牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板,于37 ℃恒溫培養(yǎng)3 d。用接種環(huán)挑取單菌落并劃線純化,獲得目標(biāo)菌株,斜面培養(yǎng)基4 ℃保藏。