HPLC法測(cè)定蕁麻疹丸中歐前胡素的含量

蔡伊麗 周修森

（河南省信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，信陽(yáng)464000）

HPLC法測(cè)定蕁麻疹丸中歐前胡素的含量

蔡伊麗 周修森

（河南省信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，信陽(yáng)464000）

目的建立蕁麻疹丸中歐前胡素含量的測(cè)定方法。方法采用反相高效液相色譜法，使用DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以甲醇：水（55∶45）作為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)300nm，流速1.0 ml/min，柱溫為30℃。結(jié)果歐前胡素在0.02～0.2μg范圍內(nèi)線性較好（r=0.9999），平均回收率為98.72%(RSD為0.75%)。結(jié)論該方法快速、簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定，可用于蕁麻疹丸中歐前胡素含量測(cè)定。

蕁麻疹丸；歐前胡素；HPLC；含量測(cè)定

蕁麻疹丸是由吉林龍?chǎng)嗡帢I(yè)有限公司生產(chǎn)，其處方由白芷、防風(fēng)、白蘚皮等中藥組成，具有清熱祛風(fēng)，除濕止癢作用。用于風(fēng)、濕、熱而致的蕁麻疹、濕疹和皮膚瘙癢。蕁麻疹丸中君藥白芷來源于傘形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm）Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan的干燥根。具有解表散寒，祛風(fēng)止痛，宣通鼻竅，燥濕止帶，消腫排膿功效[1]，歐前胡素是被分離出來的白芷有效成分之一[2]，具有多種藥理作用，為重要的天然活性物質(zhì)。蕁麻疹丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載在衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)中無含量測(cè)定項(xiàng)，為了控制藥品質(zhì)量，本文建立了高效液相色譜法測(cè)定蕁麻疹丸中歐前胡素含量的方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器Agilent1200液相色譜儀，UV檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫公司）；METTLER AE-240電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ-300型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；基因型1850D超純水機(jī)（重慶摩爾制水設(shè)備有限公司）。

1.2 材料歐前胡素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110826-200511），蕁麻疹丸（吉林龍?chǎng)嗡帢I(yè)有限公司，批號(hào)：110202，111016，130612）。甲醇為色譜醇（SIGMA-ALDRICH，批號(hào)：SHBC0053V），水為純化水，其它化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（55∶45）[1]，檢測(cè)波長(zhǎng)：300nm，流速：1.0ml/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣體積為10μl，理論板數(shù)不低于10000。

2.2 試驗(yàn)溶液的制備

2.2.1 供試品溶液取本品適量，研細(xì)，取約4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25ml，精密稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷至室溫，再精密稱定重量，用甲醇溶液補(bǔ)足減失重量，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，備用。

2.2.2 對(duì)照品溶液精密稱定歐前胡素對(duì)照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶液適量，振搖使溶解，用甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液，精密量取貯備液5ml，置50ml量瓶中，用甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為10μg/ml的歐前胡素溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 陰性供試品溶液取不含白芷的空白制劑樣品，按照2.2.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別吸取2.2項(xiàng)下對(duì)供試品溶液，對(duì)照品溶液，陰性供試品溶液各10μl注入色譜儀記錄色譜圖，結(jié)果：供試品溶液和對(duì)照品溶液在9.2分鐘出現(xiàn)歐前胡素峰，該峰與其它峰分離完全（見圖1A、B）；陰性供試品溶液在歐前胡素出峰位置未見峰出現(xiàn)，對(duì)試驗(yàn)不產(chǎn)生干擾（見圖1C）。

圖1 蕁麻疹丸HPLC色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系取上述對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣2、5、10、15、20μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖2），線性回歸方程為：y＝1701.6x+1.0671（r= 0.9999）。表明歐前胡素在0.02～0.2μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 歐前胡素線性關(guān)系圖

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品（批號(hào)：110202），按2.2.1項(xiàng)下方法制備。分別于0、4、8、12、16h進(jìn)樣分析，記錄峰面積，其RSD為0.62%，其結(jié)果表明供試品溶液在16h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.3 精密度試驗(yàn)精密吸取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μl，分別重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果歐前胡素峰面積的平均值為344，其RSD為0.43%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(110202)的樣品5份，按2.2.1項(xiàng)下方法制備，測(cè)定含量，結(jié)果見表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)

結(jié)果表明方法重復(fù)性較好。

2.4.5 回收率試驗(yàn)取本品（批號(hào)：110202）適量，共9份，約為2g的80%、100%、120%，精密稱定，精密加入2.2.2項(xiàng)下貯備液1.0ml，按2.2.1項(xiàng)下方法制備，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算回收率。測(cè)得歐前胡素平均加樣回收率(n=9)為98.72%，RSD=0.75%。測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)（n=9）

結(jié)果表明，用高效液相色譜法測(cè)定歐前胡素含量準(zhǔn)確度高。2.4.6含量測(cè)定按2.2.1項(xiàng)下方法制備，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算含量。(見表3)。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇選用了甲醇、75%乙醇、95%乙醇作為提取溶劑[3-4]，測(cè)定歐前胡素的含量，結(jié)果基本一致，參照藥典相關(guān)品種項(xiàng)下方法，選用甲醇作為提取溶劑。

3.2 提取方式選擇提取方法比較了超聲提取和回流提取，結(jié)果接近，因超聲相對(duì)簡(jiǎn)單易操作，且節(jié)省能源，故選用超聲提取。

3.3 提取時(shí)間選擇超聲處理時(shí)間比較了15、30、60分鐘，結(jié)果超聲15分鐘不能將歐前胡素提取完全，而超聲30、60分鐘均能將歐前胡素提取完全，考慮到節(jié)省時(shí)間，故選用超聲處理30分鐘作為供試品的提取時(shí)間。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:97-98.

[2]楊小花，胡曉.歐前胡素與異歐前胡素的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012，95(3):95-96.

[3]戚繼紅，岳莉，沈偉.高效液相色譜法測(cè)定風(fēng)濕定膠囊中歐前胡素和異歐前胡素的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20(8):93-95.

[4]劉笑笑，曹蔚，王四旺.歐前胡素的提取分離方法和藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，10(20):3954-3956.

Content Determination of Imperatorin in Urticaria Pill by HPLC

Cai Yili Zhou Xiusen
(Xinyang institute of food and drug control,Xinyang464000,China)

Objective To establish a method for content determination of imperatorin in Urticaria Pill by HPLC.Methods The experimental condition of the RP-HPLC method was as follows:DIONEX Acclaim 120 C18 column(5μm,250×4.6mm),with linear gradient elution using methanol and Water（55：45）;Detected wavelength was 300 nm.，The flow rate was 1.0ml/min，Column temperature was 30℃.Results Imperatorin demonstrated good linear relationship in the range 0.05～0.4μg（r=0.9999）,The average recovery rate was 98.72%with RSD of 0.75%.Conclusion The method is simple,reliable,accurate,reproducible and stable，and It could be used in the determination of Imperatorin in Urticaria Pill.

urticaria Pill;imperatorin,HPLC;content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2014.24.089

1672-2779（2014）-24-0157-02

張文娟 本文校對(duì)：周修森

2014-10-22）