高血壓人群中ACE、ADRB1基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性研究

孫艷，徐通達(dá)，宣皓晨，王超凡，陳軍紅，張延斌，李東野

高血壓是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（冠心?。┑闹匾ｋU(xiǎn)因素，血壓升高可使血流速度和流量增大，進(jìn)而激活血小板，異常激活的血小板可使冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，從而使冠狀動(dòng)脈（冠脈）狹窄，甚至堵塞，心肌細(xì)胞缺血缺氧引起冠心病[1]。研究報(bào)道顯示，高血壓和血管緊張素酶Ⅱ是冠心病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，二者共存可以進(jìn)一步增強(qiáng)冠心病的發(fā)病率[2]。在心肌細(xì)胞中，持續(xù)的β1腎上腺素能受體激活可以導(dǎo)致心肌細(xì)胞的損傷[3]。根據(jù)報(bào)道顯示，中國的心血管疾病的發(fā)病率依然在不斷攀升，死亡率居于各種疾病的首位，其中冠心病的發(fā)病率僅次于腦卒中，居于第二位[4]。本研究旨在探討高血壓人群中血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）基因多態(tài)性及β1腎上腺受體（ADRB1）基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性。

1 方法和材料

1.1 研究對象選取2017年7月至2019年4月于徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科住院的高血壓患者280例。診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《中國高血壓防治指南（2010年修訂版）》中有關(guān)高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡（30~70）歲；性別不限；患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：惡性腫瘤患者；心肺肝腎等臟器功能嚴(yán)重障礙；合并血液及免疫等系統(tǒng)疾病或急性感染者；孕婦或哺乳期女性；不按醫(yī)囑接受相關(guān)檢查等。對這280例患者行冠脈造影或冠脈CT血管造影（CTA）檢查判定其是否患有冠心?。–HD），并依據(jù)結(jié)果判定其冠脈病變支數(shù)及給予Gensini評分。根據(jù)冠脈檢查結(jié)果將上述患者分為對照組（n=135）和CHD組（n=145），這兩組患者的一般數(shù)據(jù)如表3所示。其中CHD組又分為：穩(wěn)定型心絞痛（SAP）組61例、急性冠脈綜合征（ACS）組84例；ACS病例中包括了2例非ST抬高型心肌梗死、16例ST抬高型心肌梗死和66例不穩(wěn)定型心絞痛。

1.2 方法所有入選病例均給予ACE及ADRB1基因多態(tài)性檢測，簡述方法如下：患者晨起空腹采血，EDTA抗凝后，采用DNA抽提試劑盒抽提全血樣本中的DNA；利用緩沖液GD、漂洗液PW和無水乙醇進(jìn)行DNA的提純?nèi)ルs；將提純后的DNA樣本加入到對應(yīng)的PCR反應(yīng)液中，通過PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增；在待檢標(biāo)本的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中，加入11 μl雜交液配成雜交混合液，而后取出20 μl加到芯片反應(yīng)區(qū)后放于雜交倉中，42℃下雜交1.5 h，最后將雜交好的芯片洗滌后放入掃描儀中掃描并獲得結(jié)果。采用的是湖南宏灝基因生物科技有限公司的CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB1（1165G＞C）、ACE（I/D）檢測試劑盒（基因芯片法），應(yīng)用GenePix4100A掃描圖像并進(jìn)行定量分析，利用genchiptes分析軟件進(jìn)行結(jié)果分析與整理，并根據(jù)結(jié)果分為ACE II型純合子、ID型雜合子、DD型純合子和ADRB1 GG型純合子、GC型雜合子、CC 型純合子。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)高血壓患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)：收縮壓（SBP）≥140 mmHg或舒張壓（DBP）≥90 mmHg（1 mmHg=0.133kPa），或正服用降壓藥物；CHD組的診斷標(biāo)準(zhǔn)為左主干、前降支、回旋支、第一對角支（D1）及右冠中至少有一支冠脈管腔狹窄≥50%，任一冠脈管腔狹窄＜50%為對照組；糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)為空腹（禁止攝入食物8 h）之后測靜脈血糖≥7.0 mmol/L或者口服葡萄糖耐量測試OGTT2 h后靜脈血糖≥ 11.1 mmol/L，或正在使用降糖藥物。

1.4 Gensini評分及分組標(biāo)準(zhǔn)首先根據(jù)冠脈狹窄程度確定基本評分，無任何異常發(fā)現(xiàn)記0分；狹窄直徑≤25%記1分；26%~50%記2分；51%~75% 記4分；76%~90%記8分；91%~99%記16分；完全閉塞記32分；再根據(jù)不同冠脈分支確定相應(yīng)系數(shù)，分別為：左主干病變×5、前降支近段×2.5、前降支中段×1.5、第一對角支×1、回旋支近段×2.5、回旋支中段×1、右冠脈近段×1、右冠脈中段×1。每例患者病變程度的最終積分為各分支積分之和。并根據(jù)得分將冠脈病變分為輕度病變組＜20分，中度病變組20~40分，重度病變組＞40分[5]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算CHD組及對照組ACE II、ID和DD及ADRB1 GG、GC和CC基因型的頻數(shù)，并檢驗(yàn)其是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。計(jì)數(shù)資料用率來表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)；兩組間年齡、體重指數(shù)、血脂水平、尿酸等計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，組間比較用t檢驗(yàn)。關(guān)于CHD組中ACE與ADRB1基因多態(tài)性與冠脈病變支數(shù)分組的相關(guān)性以及根據(jù)Gensini得分分組的相關(guān)性應(yīng)用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 ACE基因型的Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)

表2 ADRB1基因型的Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)

2.1 兩組中ACE和ADRB1基因型的Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)在所有的樣本中，ACE和ADRB1的基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P＞0.05），如表1~2所示，證明該樣本群體的選取具有一定的代表性。

2.2 一般信息高血壓患者中冠心?。–HD）組和對照組單因素分析，分析中顯示兩組患者年齡、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和糖尿病差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），性別、總膽固醇（TC）、尿酸和體質(zhì)指數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表3）。

2.3 CHD組中基因多態(tài)性與冠脈病變支數(shù)的比較在CHD組，冠脈單支和多支病變中，ACE的DD、ID和II基因型頻率及D、I等位基因頻率有顯著性差異（P＜0.05）（表4）；ADRB1基因的GG、GC和CC及G、C等位基因頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表5）。

表3 CHD組與對照組一般臨床資料的比較（±s）

表3 CHD組與對照組一般臨床資料的比較（±s）

注：TC：總膽固醇；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇

因素 CHD組（n=145） 對照組（n=135） P值男性（n，%） 94（64.82） 72（53.33） 0.050 年齡（歲） 66.78±10.42 58.39±11.83 0.000 TC（mmol/l） 4.51±1.19 4.69±0.87 0.133 HDL-C（mmol/l） 1.15±0.29 1.26±0.34 0.005尿酸（μmol/l） 334.04±97.73 328.51±87.41 0.619糖尿?。╪，%） 35（24.14） 17（12.59） 0.013體重指數(shù)（kg/m2） 26.36±3.61 26.17±3.19 0.430

表4 冠脈單支與多支病變組ACE基因型與等位基因頻率的分布

表5 冠脈單支與多支病變組ADRB1基因型與等位基因頻率的分布

表6 ACE基因多態(tài)性與Gensini得分分組之間比較

表7 ADRB1基因多態(tài)性與Gensini得分分組之間比較

2.4 CHD組中基因多態(tài)性與Gensini得分分組之間的比較CHD組的患者根據(jù)冠脈檢查結(jié)果給予Gensini評分，并根據(jù)評分結(jié)果將冠脈病變分為輕度病變組（＜20分）、中度病變組（20~40分）和重度病變組（＞40分）3組，結(jié)果顯示ACE DD基因型在重度病變組的占比為66.67%，較其他組偏高明顯，χ2=10.863，P=0.028，有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表6）。ADRB1基因多態(tài)性在Gensini得分分組中的對比中，應(yīng)用Fisher確切概率法測得P=0.154，提示ADRB1 GG、GC及CC這三種基因型在冠脈病變的程度對比中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表7）。

3 討論

高血壓是一種臨床常見的慢性疾病，需要長期治療，同時(shí)高血壓還會引起各種并發(fā)癥，其中冠心病是一種常見的并發(fā)癥。臨床已經(jīng)證明高血壓是冠心病發(fā)病的高危因素，二者可同時(shí)發(fā)生，且互相促進(jìn)。血壓持續(xù)升高，會造成血管內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)械性損傷，導(dǎo)致血小板在損傷處的異常沉積，同時(shí)加上內(nèi)皮素、兒茶酚胺和血管緊張素Ⅱ的共同作用，導(dǎo)致血管內(nèi)壁粥樣斑塊的形成，進(jìn)而誘發(fā)心血管疾病[5，6]。

ACE是一種單鏈多肽酸性糖蛋白，是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）反應(yīng)過程中的關(guān)鍵因子之一。作為血管緊張素Ⅱ生成的關(guān)鍵酶，ACE跟高血壓及冠心病的發(fā)病密切相關(guān)[7，8]。徐鶴等[9]研究認(rèn)為ACE基因D等位基因與原發(fā)性高血壓病的發(fā)生相關(guān)；劉龍梅等[10]研究也支持這一觀點(diǎn)。國內(nèi)外多個(gè)研究[11-13]均顯示ACE基因多態(tài)性與CHD相關(guān)，ACE基因D等位基因?yàn)镃HD的遺傳易感因素[14，15]。ADRB1是人類1000個(gè)“G蛋白偶聯(lián)受體”的跨膜分子中的一個(gè)，也是心肌細(xì)胞表達(dá)的三種腎上腺素受體中最重要的一個(gè)。Arnold等[16]的大鼠試驗(yàn)提示ADRB1與高血壓相關(guān)。Iwai等[17]及El-Menyar等[18]研究顯示ADRB1 GC基因型與ACS存在顯著相關(guān)性。在本研究中，ACE DD基因型攜帶者冠心病單支患者為9例，多支患者為58例，ID基因型攜帶者單支患者為18例，多支患者為32例，II基因型攜帶者單支患者為9例，多支患者為19例，ACEDD基因型攜帶者在冠脈病變支數(shù)中的多支病變組占比明顯高于ACE II及ACE ID基因型，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在Gensini得分分組中， ACE DD基因型在重度病變組的占比為66.67%，而ID及II基因型占比分別為23.81%及9.51%，在重度病變組中，DD基因型占比明顯高于ID及II基因型，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

了解高血壓患者中冠心病的高危因素，可以進(jìn)行有效的預(yù)防和干預(yù)[19-21]。已有研究顯示，血清non-HDL-C、動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)、血清低密度脂蛋白膽固醇、膜聯(lián)蛋白A1及RAGE基因多態(tài)性均與冠脈狹窄程度緊密相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，在高血壓人群中ACE基因多態(tài)性中DD基因型是冠脈嚴(yán)重病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，DD基因型和D等位基因與冠脈嚴(yán)重狹窄相關(guān)性顯著，可能對冠脈血管內(nèi)斑塊不穩(wěn)定、斑塊破裂和（或）血栓形成有影響，而對冠脈粥樣硬化影響不明顯。ADRB1基因多態(tài)性與冠脈狹窄無明顯相關(guān)性。年齡的增長及糖尿病是CHD的危險(xiǎn)因素。HDL-C是CHD的保護(hù)因素。本文中TC在對照組中較CHD組偏高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮跟本研究為回顧性研究，CHD組中大部分患者可能已經(jīng)長期服用他汀類調(diào)脂藥物，干擾了血脂水平，所以所得結(jié)果與既往的臨床研究相悖，有待后續(xù)深入研究。

本文通過探討高血壓人群中ACE基因多態(tài)性及ADRB1基因多態(tài)性與冠脈狹窄程度的相關(guān)性，以便于進(jìn)一步認(rèn)識CHD的易感基因，預(yù)測個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)，從而有利于個(gè)體化的預(yù)防和治療，促進(jìn)精準(zhǔn)治療的實(shí)施。