血漿微RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA聯(lián)合檢測在胃癌早期篩查及評估中的應(yīng)用*

卞晨璐 徐磊霞 周鋒

胃癌是臨床常見的消化道腫瘤，多數(shù)患者起病較隱匿，早期癥狀不典型，極易造成胃癌的進展[1]。目前臨床上對于胃癌的早期篩查尚未形成統(tǒng)一標準，絕大多數(shù)患者在發(fā)現(xiàn)胃癌時均已發(fā)展為進展型胃癌[2]。所以在臨床上及時尋找胃癌敏感性指標，對于患者的癌細胞早期發(fā)現(xiàn)及癌癥進展均具有積極意義。血漿微RNA-27b-3p（micro RNA-27b-3p，miR-27b-3p）是由19～22個核苷酸組成的單鏈小分子RNA，主要通過患者的靶基因的翻譯作用，進而對患者的細胞增殖、分化、凋亡等過程進行調(diào)控。胃蛋白酶原比值（pepsinogen ratio，PGR）主要通過患者胃腸道胃蛋白酶原的比值對患者的胃癌侵潤情況進行分析[3]。癌抗原15-3（CAl5-3）陽性表達可能是胃癌變細胞的標志之一，同時患者的胃癌進展情況呈現(xiàn)正相關(guān)[4]。血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）是早期癌癥的重要指標，對于胃癌的進展及治療效果具有顯著指示作用。本文通過對血漿微RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA聯(lián)合檢測在胃癌早期篩查及惡性程度評估中的臨床應(yīng)用進行分析，為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

對象與方法

1 基本資料 選取2012年2月～2013年2月的100例在本院住院的胃癌手術(shù)患者為研究對象，研究組患者TNM分期（第八版），Ⅰ期患者36例，Ⅱ期患者63例，在五年隨訪期間，研究組患者有8例應(yīng)變更聯(lián)系方式等原因失訪，失訪率為8%，平均隨訪時間為（58.72±10.22）月；另選本院同期體檢正常者92例為對照組。兩組研究對象的性別、年齡、BMI之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。研究內(nèi)容經(jīng)本院倫理委員會審核通過，所有研究對象均對內(nèi)容知情并簽署知情同意書。

表1 兩組患者一般資料比較

納入標準：①符合胃癌診斷標準[5]；②預(yù)計生存時間＞6個月；③KPS[6]評分均≥70分；④對本次研究使用藥物無用藥禁忌；⑤患者知情且同意本研究方案。排除標準：①心、肝、腎功能嚴重不全者；②存在交流障礙的患者；③血常規(guī)異?；颊?；④不配合本研究方案患者。

2 研究方法 所有患者均進行臨床資料收集，分別對患者的TNM腫瘤分期、腫瘤位置、體積、分化程度、轉(zhuǎn)移情況、浸潤情況、病理類型、生存情況進行統(tǒng)計。于入組后清晨空腹抽取外周靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min取上清，-80℃儲存。使用miRNeasy SERUM/Plasmakit儀器對患者血漿RNA進行提取，使用TRIzol SL（ambion）試劑對患者的血漿RNA進行提取，最后使用實時熒光定量PCR分析儀對患者的RNA-27b-3p水平進行定量分析。采用雙抗體夾心ELISA法對患者血清PGR、CA15-3及CEA水平進行檢測，試劑盒均購自美國Gene May 公司，操作流程嚴格按照說明書進行。

3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率表示，采用Pearson χ2檢驗，對單因素分析有統(tǒng)計學(xué)意義的，進一步行Logistic回歸分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 兩組RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平對比 研究組患者RNA-27b-3p、CA15-3及CEA水平均高于對照組，PGR低于健康人群，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2 胃癌患者臨床病理特征與RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平相關(guān)性 研究組患者中，不同性別、年齡、腫瘤位置、大小、浸潤深度、TNM分期、病理類型患者的血清RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移超過12枚、腫瘤復(fù)發(fā)及5年隨訪死亡患者的血清RNA-27b-3p、CA15-3及CEA水平明顯升高，PGR水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

3 Spearman相關(guān)性分析 通過對觀察組患者的RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤復(fù)發(fā)及隨訪死亡情況進行相關(guān)性分析，患者血清RNA-27b-3p、CA15-3及CEA水平越高，PGR越低，患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤復(fù)發(fā)情況及隨訪死亡情況越高。見表4。

表2 兩組研究對象臨床資料對比

表3 胃癌患者臨床病理特征與RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平相關(guān)性

表4 RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤復(fù)發(fā)及隨訪死亡情況進行相關(guān)性

4 患者五年生存情況危險因素Logistic回歸分析 血清RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA均為結(jié)腸癌患者五年生存的獨立危險因素，見表5。

表5 患者五年生存情況危險因素Logistic回歸分析

討 論

胃癌是全球常見的消化道腫瘤之一，據(jù)研究顯示[7]，超過70%的胃癌患者發(fā)生在發(fā)展中國家，其中亞洲東部地區(qū)的胃癌發(fā)病率占比超過50%[8]，而我國的胃癌發(fā)病率和死亡率均占全世界的50%以上[9]，患者的疾病負擔較高，是我國癌癥防治的重點疾病之一。在臨床上，胃癌患者一旦確診，基本上處于中晚期進展性胃癌，給患者造成嚴重的心理負擔[10]。所以，及時對早期胃癌患者的臨床診斷，對于患者的治療及預(yù)后均具有積極意義。但是目前對于患者胃癌的進展檢測方式僅局限于病理活檢和放射性檢查，包括核磁共振及CT檢查，病理活檢對于患者而言，損傷和機體耐受程度較差，而放射性檢查方法，不僅對患者造成了更大的射線損傷，同時給患者造成了巨大的經(jīng)濟負擔。所以，及時尋找科學(xué)有效的胃癌進展性血清學(xué)指標，對于患者的治療及病情判斷具有積極作用。

本研究中，RNA-27b-3p是胃癌的體異性生物指標，通過對患者癌細胞的增殖、分化等的促進作用，患者胃癌進展迅速，與健康人群相比，研究組患者的RNA-27b-3p水平明顯升高，通過對不同分期、浸潤程度、復(fù)發(fā)情況及五年生存情況的分析，患者的RNA-27b-3p水平升高，也可作為胃癌的獨立危險因素，其表達水平與胃癌進展呈現(xiàn)正相關(guān)。分析認為，RNA-27b-3p基因處于人體9號染色體[11]，患者的該基因位于腫瘤相關(guān)脆性位點，對于腫瘤的形成和增殖分化具有積極作用。崔業(yè)佳[12]等對胃癌患者的miR-27b-3p表達水平的分析指出，其與胃癌的進展相關(guān)，與本文相互印證。CA15-3最早是在乳腺癌患者中被發(fā)現(xiàn)，但近年來發(fā)現(xiàn)，當患者發(fā)生惡性腫瘤及腫瘤進展期，患者的CA15-3在細胞胞漿內(nèi)大量堆積，同時促進患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，CEA表達水平于患者胃癌癌細胞對胃壁的浸潤程度相關(guān)。而在本研究中，與健康人群相比，研究組患者的CA15-3、CEA水平明顯高于對照組，而在胃癌患者中，隨著患者的癌癥進展，患者的CA15-3、CEA水平明顯上升。郭佳[13]等在對胃癌患者的研究中發(fā)現(xiàn)，CEA水平與患者的腫瘤分期、淋巴轉(zhuǎn)移及遠端轉(zhuǎn)移相關(guān)，與本研究相互印證。PGR是胃蛋白酶原Ⅰ與胃蛋白酶原Ⅱ的比值，胃蛋白酶原Ⅰ主要由胃底腺主細胞和頸粘液細胞分泌，而胃蛋白酶原Ⅱ除上述細胞外[14]，其分泌細胞還來自患者的幽門腺和十二指腸腺，當患者的病灶部位發(fā)生嚴重癌癥甚至進展，患者的粘膜完整性遭到破壞，患者的胃蛋白酶Ⅰ與胃蛋白酶原Ⅱ分泌紊亂，造成PGR異常降低。本研究中，PGR也是惡性腫瘤及腫瘤進展期的重要危險因素之一，隨著患者的癌癥進展，患者的PGR異常升高。羅興利[15]等對胃癌患者的增殖和分化研究中發(fā)現(xiàn)，PGR表達水平與患者的胃癌進展呈現(xiàn)負相關(guān)，與本文研究一致。

綜上所述，RNA-27b-3p、CA15-3及CEA與胃癌進展呈現(xiàn)正相關(guān)，PGR水平與胃癌進展呈現(xiàn)負相關(guān)，RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA對胃癌的篩查及進展具有積極意義。