乳茄組培快繁技術(shù)

鞠玉棟 何炎森 李躍森 林啟杰

摘 要：以乳茄嫩枝為外植體，研究了不同消毒方法和不同激素對乳茄誘導(dǎo)、增殖及生根等的影響。結(jié)果表明，最適合乳茄外植體的消毒方法為70%的酒精消毒10s，0.1%的升汞消毒6min;最佳芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1;最佳繼代增殖培養(yǎng)基為MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA30.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1，增殖系數(shù)為4.35;最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5mg·L-1+ABT1 0.3mg·L-1，生根率達(dá)93.5%以上;組培苗移栽適宜基質(zhì)為泥炭土∶珍珠巖=5∶1，成活率達(dá)96.7%。

關(guān)鍵詞：乳茄;誘導(dǎo);組織培養(yǎng)

中圖分類號 S567.239文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A文章編號 1007-7731（2020）01-0019-03

Abstract：In this paper，the effects of different factors on the induction，multiplication and rooting of Solanum mammosum L. were studied. The results show that the optimal disinfection methods was 70% alcohol 10 s+0.1% HgCl2 6min.The optimalshoot-inducing medium wasMS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1;the optimal multiplication medium was MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA3 0.1 mg·L-1+sucrose 30 g·L-1，with multiplication coefficient of 4.35 times.The optimal rooting medium is 1/2MS+IBA0.5mg·L-1+ABT1 0.3mg·L-1，with rooting rate up to 93.5%. The optimal trans-plant medium was peat soil∶perlite（V/V）=5∶1，with survival rate up to 96.7%。

Key words：Solanum mammosum L.;Induction;Tissue culture

乳茄（Solanum mammosum L.）為茄科茄屬常綠植物，別名多頭乳茄、五指茄、黃金果等，原產(chǎn)于中美洲熱帶地區(qū)，果實(shí)成熟時(shí)為金黃色，基部生有5個(gè)乳頭狀突起，是一種外形奇特的觀果植物，常用作插花素材或盆栽觀賞。在我國廣東、廣西、福建等亞熱帶地區(qū)均有種植，其果色鮮艷、觀果期長，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和觀賞價(jià)值。此外，乳茄還具有消炎鎮(zhèn)痛、消腫散瘀等藥用功效，主治胃氣痛、淋巴炎、瘡癤等疾病[1-4]。乳茄一般用種子繁殖，種植多年后因各種病害感染，容易導(dǎo)致種性退化，嚴(yán)重影響植株生長、外觀品質(zhì)及觀賞價(jià)值[5-6]。生產(chǎn)上，采用組培快繁技術(shù)生產(chǎn)健康種苗是解決這一問題的有效途徑。為此，筆者以乳茄嫩枝為外植體開展了組培快繁的研究，初步建立了乳茄快繁體系，為乳茄健康種苗的工廠化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料 以健康無刺乳茄品種為試驗(yàn)材料，在田間選取健壯無病蟲害的植株嫩枝，去掉葉片和嫩梢頂端幼嫩部分，洗凈后流水沖洗30min以上，將其移至超凈工作臺(tái)上備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體消毒 嫩枝預(yù)處理后，按照以下4種方法進(jìn)行外植體消毒：（1）70%酒精10s，無菌水沖洗3～4遍，0.1%升汞3min，無菌水沖洗3～4遍;（2）70%酒精10s，無菌水沖洗3～4遍，0.1%升汞6min，無菌水沖洗3～4遍;（3）70%酒精10s，無菌水沖洗3～4遍，0.1%升汞9min，無菌水沖洗3～4遍;（4）70%酒精10s，無菌水沖洗3～4遍，0.1%升汞12min，無菌水沖洗3～4遍。接種于MS+6-BA 2mg/L培養(yǎng)基上，15d后統(tǒng)計(jì)萌芽數(shù)和污染率。

1.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng) 將消毒后的乳茄莖段接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每瓶1個(gè)莖段。誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，先配制6-BA濃度為0.5，1.0，2.0，3.0mg·L-1的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每處理接種外植體20個(gè)，重復(fù)3次。記錄每個(gè)處理的出芽時(shí)間，15d后統(tǒng)計(jì)出芽率，以此確定理想的6-BA濃度。在上述試驗(yàn)完成后，以含最適濃度6-BA的MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，分別添加0，0.05，0.1，0.2mg·L-1的NAA，每處理接種外植體20個(gè)，重復(fù)3次。記錄每個(gè)處理的出芽時(shí)間，15d后統(tǒng)計(jì)出芽率，以此確定理想的NAA濃度。

1.2.3 繼代增殖培養(yǎng) 以前述無菌體系得到的乳茄誘導(dǎo)芽為試驗(yàn)材料。采用L9（34）正交表安排試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以BA（A）、NAA（B）、GA3（C）和蔗糖（D）為因素，各設(shè)3個(gè)水平，每個(gè)處理接20瓶，每瓶接6個(gè)莖段，重復(fù)3次。接種20d后，觀察生長情況，統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)。

1.2.4 生根培養(yǎng) 將高度2～4cm，帶2～3個(gè)以上葉片的小苗為材料接種至生根培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基分別添加生長素IBA，ABT1號，進(jìn)行正交試驗(yàn)，共9個(gè)處理，每個(gè)處理接20瓶，每瓶接6株，重復(fù)3次。20d后統(tǒng)計(jì)生根率。

1.2.5 培養(yǎng)條件 培養(yǎng)溫度25～28℃，光照強(qiáng)度2000～2500lx，光照時(shí)間12h·d-1。

1.2.6 組培苗移栽 移栽前煉苗約7d，試驗(yàn)于2—3月進(jìn)行，選擇健壯、葉色亮綠、具2條根以上、4～6cm高的生根苗進(jìn)行移栽。以不同比例的泥炭土和珍珠巖為移栽基質(zhì)，每個(gè)處理種植100株，重復(fù)3次。移栽后注意保溫保濕和通風(fēng)，每7d噴施1次殺菌劑。20d后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。

1.3 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用Excel、DPS軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和方差分析，用新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒處理對外植體誘導(dǎo)的影響 乳茄枝條和葉片表面遍布絨毛，導(dǎo)致其易帶菌，不易消毒，在處理外植體時(shí)需要較長的消毒時(shí)間，才能達(dá)到降低污染的目的。從表1可以看出，隨著升汞消毒時(shí)間的延長，污染率逐漸下降，但消毒時(shí)間過長又會(huì)導(dǎo)致外植體發(fā)生褐化死亡，萌芽率降低;消毒時(shí)間過短，污染率迅速上升。采用方法2消毒，既可保持較低的污染率，又能保證較高的萌芽率，是較理想的消毒方法。

2.2 不同濃度6-BA對芽誘導(dǎo)的影響 從表2可以看出，6-BA可明顯影響外植體芽的誘導(dǎo)效果，隨著6-BA濃度的升高，誘導(dǎo)率逐漸增加，當(dāng)濃度為2.0時(shí)，達(dá)到最大為93.1%，之后開始下降。說明低濃度的6-BA可促進(jìn)芽的萌發(fā)，高濃度時(shí)反而對芽的萌發(fā)產(chǎn)生抑制作用，且6-BA濃度過高（≥2.0mg·L-1）時(shí)，誘導(dǎo)的芽易玻璃化。因此，較適合的6-BA濃度為2.0mg·L-1。

2.3 不同濃度NAA對芽誘導(dǎo)的影響 從表3可以看出，NAA濃度對出芽時(shí)間的影響不大，隨著NAA濃度的增加，誘導(dǎo)率略有上升，之后逐漸下降，但NAA濃度過高時(shí)，又會(huì)導(dǎo)致外植體切口長出大量愈傷組織，葉片脫落直至外植體死亡。因此，較適合的NAA濃度為0.05mg·L-1。

2.4 不同培養(yǎng)基對繼代增殖的影響 將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)的小苗切段（每段帶1個(gè)腋芽）轉(zhuǎn)接入9種正交組合繼代培養(yǎng)基中，3～4d后腋芽開始生長，增殖系數(shù)和方差分析結(jié)果見表4和表5。從表4可以看出，不同因素對乳茄繼代增殖的影響主次關(guān)系為6-BA>蔗糖>GA3>NAA。添加6-BA濃度在一定的范圍內(nèi)（0.5～1.0mg·L-1），增殖系數(shù)隨濃度的升高而增加，而隨著6-BA濃度繼續(xù)升高（1.5mg·L-1），增殖系數(shù)反而下降，且有玻璃化發(fā)生;蔗糖濃度對增殖也有一定的影響，呈先增加后下降的趨勢，NAA和GA3對增殖率的影響很小。方差分析結(jié)果表明：BA對增殖系數(shù)的影響達(dá)到了極顯著水平，其他3個(gè)因素均無顯著影響。由正交分析結(jié)果得出，MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA3 0.1mg·L-1+蔗糖30mg·L-1為最佳繼代增殖培養(yǎng)基，經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)表明，該組合的增殖系數(shù)為4.35，增殖芽生長良好，葉片顏色亮綠。

2.5 不同培養(yǎng)基對生根的影響 將生長健壯、高3～4cm的乳茄小苗轉(zhuǎn)接入9種正交組合生根培養(yǎng)基后，約7d左右開始有新根長出。20d后觀察統(tǒng)計(jì)，生根情況和方差分析的結(jié)果詳見表6和表7。從表6可以看出：不同培養(yǎng)基的生根率存在明顯的差異，添加一定濃度的植物激素對組培苗生根具有明顯的促進(jìn)作用。直觀分析表明，IBA對生根率的影響最大，ABT1號次之。方差分析結(jié)果表明，IBA對生根率的影響達(dá)極顯著水平，ABT1號對生根率無顯著影響。由表6可知，最佳生根培養(yǎng)基為：1/2MS+IBA0.5mg·L-1+ABT1 0.3mg·L-1，最高，生根率高達(dá)93.5%，且根系發(fā)達(dá)。

2.6 不同移栽基質(zhì)對成活率的影響 將經(jīng)過煉苗后的乳茄組培苗取出，洗凈瓊脂后移栽至不同基質(zhì)上。溫度控制在20℃左右，同時(shí)注意保溫保濕和通風(fēng)，定時(shí)噴施殺菌劑，20d后觀察結(jié)果，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表8。從表8可以看出，不同移栽基質(zhì)對組培苗成活率和生長有明顯的影響，在泥炭土∶珍珠巖=5∶1的移栽基質(zhì)上成活率最高，達(dá)96.7%，且組培苗生長健壯，葉片濃綠。

3 討論

乳茄為草本植物，外植體材料幼嫩、不耐消毒，只有合適的消毒方法才能保證無菌體系成功建立。本試驗(yàn)通過研究不同消毒方法和不同激素對乳茄誘導(dǎo)、增殖和生根等的影響，最終確定適合乳茄外植體的消毒方法為70%的酒精消毒10s，0.1%的升汞消毒6min;芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1，誘導(dǎo)的芽生長健壯無異常;最佳繼代增殖培養(yǎng)基為MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA3 0.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1，增殖系數(shù)為4.35;最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5mg·L-1+ABT1 0.3mg·L-1，生根率達(dá)93.5%以上;組培苗移栽適宜基質(zhì)為泥炭土∶珍珠巖=5∶1，成活率達(dá)96.7%。

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（責(zé)編：張宏民）