高效液相色譜法測定頭孢呋辛賴氨酸原料藥的含量

毛 新

（吉林省藥品檢驗所化學室，吉林 長春 130033）

頭孢呋辛是臨床常用的二代頭孢類抗菌素，具有廣譜的抗菌作用。頭孢呋辛對于革蘭氏陰性菌導致的呼吸系統(tǒng)感染、生殖系統(tǒng)感染以及皮膚、軟組織感染等疾病中應用廣泛。且相較于頭孢呋辛鈉而言，頭孢呋辛賴氨酸具有溶解度高、穩(wěn)定性好的特點。雖然頭孢呋辛賴氨酸在臨床用途良多，但是關(guān)于其原料藥測定的相關(guān)報告卻比較少[1]。本次研究中采用HPLC測定頭孢呋辛賴氨酸原料藥的含量，為評價其品質(zhì)和質(zhì)量控制提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫的Agilent 1100型高效液相色譜儀、G1314A檢測器以ChemStations色譜數(shù)據(jù)工作站，梅特勒-托利多公司的AB135s電子天平。

1.2 試藥

頭孢呋辛賴氨酸原料藥由深圳清大中生物科技有限公司提供，批號：20180415、20180838、20180927。頭孢呋辛對照品由中國食品藥品檢定研究院提供，批號：130739-201811。冰醋酸和乙腈為色譜純，醋酸鈉為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選用Kromasil C8（4.6 mm×250 mm×5 μm）色譜柱，流動相選擇84:16的醋酸鹽緩沖液（0.68 g醋酸鈉+5.8 g冰醋酸+1 L水，PH調(diào)整為3.4）-乙腈溶液，檢測波長275 nm。柱溫設定35℃。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備

稱取適量的頭孢呋辛對照品加入100 mL量瓶，使用水溶解并稀釋至刻度，搖勻制備成1 ml含0.5 mg頭孢呋辛的對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液制備

取50 mg的頭孢呋辛賴氨酸原料藥樣品，加入100 mL量瓶中，在110℃條件高溫水浴2 h，加水進行溶解定容后即得供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適應性考察

分別吸取20 μL的對照品溶液和頭孢呋辛賴氨酸原料藥供試品溶液，在同樣色譜條件進行進樣測定，結(jié)果顯示頭孢呋辛賴氨酸的主峰保留時間在9.2 min，理療塔板數(shù)在3000以上。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取對照品儲備液1、2、4、6、8、10 mL加至100 ml量瓶中，加入水稀釋至刻度并搖勻。分別取樣20 μL注入色譜儀測定。以峰面積為縱坐標，以濃度為橫坐標，繪制標準曲線經(jīng)得到頭孢呋辛賴氨酸的線性回歸方程為Y=150471.35X-2674.62，在0.00192～0.03815 mg/mL濃度內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.99995）。

2.5 穩(wěn)定性試驗

將供試品溶液在室溫下放置0、2、4、6、8、12 h后，依次進行加樣并測定峰面積。頭孢呋辛賴氨酸峰面積變化小，RSD為1.37%，穩(wěn)定性較好。

2.6 精密度試驗

精密量取頭孢呋辛賴氨酸對照品溶液20 μL，在相同色譜條件下連續(xù)進行測定6次，結(jié)果峰面積無明顯變化，RSD為1.29%，精密度良好。

2.7 重復性試驗

重復稱取20180838批號的頭孢呋辛賴氨酸供試品6份，1 g/份，制成6份供試品溶液，分別進行進樣測定峰面積，RSD為1.03%，重復性佳。

2.8 加樣回收實驗

精密稱取20180838批號的頭孢呋辛賴氨酸供試品6份，1 g/份，分別加入頭孢呋辛對照品適量，其含量為供試品已知含量的80%、100%、120%，制備成加樣回收供試品溶液并進行加樣測定計算加樣平均回收率，結(jié)果為98.92%(RSD=0.97%）。

2.9 樣品含量測定

分別精密稱取1 g三個不同批號的頭孢呋辛賴氨酸供試品，制備成三份供試品溶液，進樣測定三批頭孢呋辛賴氨酸的含量，結(jié)果平均含量分別為97.53%、96.86%、99.02%，RSD分別為1.07%、1.12%、1.14%。

3 討 論

頭孢呋辛屬于二代頭孢類抗菌素，在感染性疾病的臨床治療中應用廣泛。而頭孢呋辛賴氨酸是一種新型的頭孢呋辛鹽，穩(wěn)定性更好。本次研究對頭孢呋辛賴氨酸原料藥的含量采用HPLC法進行測定。經(jīng)對頭孢呋辛對照組品溶液在不同波長處進行掃描，發(fā)現(xiàn)波長275 nm處最為最大吸收波長，故設此為檢測波長。經(jīng)過對比不同流動相條件下，頭孢呋辛賴氨酸原料藥供試品的色譜法分離情況、頭孢呋辛的保留時間和理論板數(shù)的對比，發(fā)現(xiàn)84:16的醋酸鹽緩沖液-乙腈溶液作為流動相的效果最佳[2]。本次實驗中應用HPLC法測定頭孢呋辛賴氨酸原料藥含量，結(jié)果準確，重復性佳，可用作其質(zhì)量控制方法。