HFABP在急性缺血心肌中的表達(dá)及在法醫(yī)病理診斷中的意義

王 娟，田桂花，顏 貝，常 越，郭鳳英，景 麗

心型脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)是心臟中富含的一種新型小胞質(zhì)可溶性蛋白質(zhì)，在哺乳動物的小腸、肝、脂肪、心、腦、骨骼肌等多種細(xì)胞中廣泛存在，具有高度心臟特異性,它在長鏈脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行β氧化過程中起著重要作用。心肌細(xì)胞對缺血缺氧高度敏感，當(dāng)心肌缺血缺氧時可以動員脂肪酸供能， 這會引起心肌細(xì)胞中HFABP的迅速升高，由于HFABP是心肌胞質(zhì)中一種可溶性且分子量很小的蛋白質(zhì)，當(dāng)心肌受損時，HFABP可較早從心肌細(xì)胞胞質(zhì)滲出到血液中[1-2]，而存留在心肌細(xì)胞中的HFABP的含量即會出現(xiàn)變化。本實驗選取尸體解剖中的心臟標(biāo)本，通過肉眼觀察、HE染色、免疫組化染色觀察正常組、冠脈狹窄組及心肌梗死組中心肌形態(tài)及HFABP表達(dá)量的差異，從而探討檢測HFABP在法醫(yī)病理診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2007-2016年寧夏醫(yī)科大學(xué)病理系尸檢心肌組織標(biāo)本30例為研究對象，按如下標(biāo)準(zhǔn)分為3組。對照組：①該例尸檢者生前沒有心臟病史；②在系統(tǒng)解剖過程中未發(fā)現(xiàn)心臟存在器質(zhì)性病變；③可以導(dǎo)致心肌直接或間接受損的其他系統(tǒng)性疾病未檢出；④HE染色未發(fā)現(xiàn)心肌形態(tài)學(xué)改變。冠脈狹窄組：①尸檢中發(fā)現(xiàn)冠狀動脈左前降支Ⅲ～Ⅳ級狹窄；②系統(tǒng)解剖、組織病理學(xué)觀察、毒物分析中未發(fā)現(xiàn)其他死因；③肉眼觀察、HE染色均未發(fā)現(xiàn)心肌梗死的改變。心肌梗死組：①尸檢中發(fā)現(xiàn)冠狀動脈左前降支Ⅲ～Ⅳ級狹窄；②肉眼觀察或HE染色可見致死性急性和(或)陳舊性心肌梗死；③排除其他死因。

1.2 試劑:①HE染色試劑。蘇木素-伊紅(HE)染色液(Beijing Leagenem生物科技公司)。②免疫組化染色試劑：H-FABP單克隆抗體(Abcam公司)；羊抗兔二抗(中杉金橋公司)。

1.3 方法:HE及免疫組化染色，所取標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE 染色，采用免疫組化SP法。細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒視HFABP表達(dá)陽性，以PBS代替一抗作為陰性對照。應(yīng)用IPP 圖像自動分析系統(tǒng)，選取組織陽性表達(dá)區(qū)，選定具有代表性的5個視野，獲得所選視野的平均光密度(optical density，OD)值。比較各組HFABP的表達(dá)情況。

2 結(jié)果

2.1 肉眼及HE染色觀察冠狀動脈左前降支:結(jié)果見圖1(目錄后)。對照組：肉眼可見管腔完整通暢，未見狹窄。鏡下，①冠脈：內(nèi)膜完整，無受損，內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊，未見脂質(zhì)沉積；中膜層平滑肌細(xì)胞整齊排列，外層正常。②心肌組織：心肌細(xì)胞排列緊密，胞質(zhì)染色淡紅，均染，胞核未見固縮、凝集、碎裂。冠脈狹窄組：肉眼可見管腔明顯狹窄，狹窄程度達(dá)Ⅲ～Ⅳ級。鏡下，①冠脈：內(nèi)膜受損，內(nèi)皮下層及內(nèi)彈性膜有大量脂質(zhì)沉積，形成較為明顯的粥樣斑塊；中膜層平滑肌細(xì)胞受壓，細(xì)胞層數(shù)減少；外層有較多的脂肪組織，HE染色呈空泡狀。②心肌組織：心肌細(xì)胞胞質(zhì)染色淡紅，胞核部分固縮、凝集、碎裂，組織間隙未見炎細(xì)胞浸潤，與對照組心肌細(xì)胞無明顯區(qū)分。心肌梗死組：肉眼可見管腔明顯狹窄，狹窄程度達(dá)Ⅲ～Ⅳ級。鏡下，①冠脈：內(nèi)膜嚴(yán)重受損，內(nèi)皮下層及內(nèi)彈性膜有大量脂質(zhì)沉積，形成明顯的粥樣斑塊，并且粥樣斑塊內(nèi)部有機(jī)化和出血，管腔明顯狹窄(>75%)；中膜層平滑肌細(xì)胞受壓，平滑肌細(xì)胞層數(shù)減少；外膜層無明顯改變。②心肌組織：心肌細(xì)胞排列紊亂，部分心肌有斷裂，細(xì)胞核固縮、凝集、深染，并有核碎裂、核溶解，間質(zhì)出血，可見大量中性粒細(xì)胞浸潤。

2.2 HFABP在各組心肌組織中的表達(dá):心肌梗死組HFABP的表達(dá)量(平均光密度值0.14±0.01)明顯低于冠脈狹窄組(平均光密度值0.19±0.005)及對照組(平均光密度值0.26±0.01)，冠脈狹窄組HFABP的表達(dá)量明顯低于對照組。

3 討論

HFABP 是一種在心肌細(xì)胞胞漿中含量豐富的小分子量蛋白質(zhì)，由132個氨基酸組成，分子量為15 kDa，其基因位于1號染色體，特定位置為1p33p32。HFABP通過與長鏈多不飽和脂肪酸結(jié)合將其運(yùn)輸?shù)桨麧{中的過氧化物酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞核等部位，在這些部位實現(xiàn)長鏈脂肪酸自身儲存、氧化、合成生物膜、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和激活核內(nèi)受體等功能，參與生命活動的重要環(huán)節(jié)[3]。前期有研究者制作動物急性心肌梗死模型，并通過檢測HFABP來檢測心肌梗死的情況。研究發(fā)現(xiàn)，心肌缺血一定時間后可引起心肌細(xì)胞膜的損傷，位于胞漿里的HFABP由于分子量小且水溶性好，可以迅速進(jìn)入血液循環(huán)中[4]。以往在臨床上急性心肌梗死(AMI)的診斷主要通過病史、臨床癥狀體征、心電圖檢查結(jié)果等[1,5]。有些患者病史模糊，臨床癥狀體征不明顯，心電圖難以捕捉到心肌缺血的時刻，這些都使得以往的這三種指標(biāo)存在一定的局限性，對超極期AMI的診斷尚有困難。前期研究發(fā)現(xiàn)僅在心肌損傷30 min后，HFABP就可在血液中被檢出，AMI發(fā)生2 h，HFABP陽性的患者比例高達(dá)43.5%[6]。臨床研究表明HFABP可以作為早期診斷AMI的理想標(biāo)志物[7]。

目前在尸檢中我們往往遇到這樣的問題，冠狀動脈狹窄程度已達(dá)75%以上，但在心肌組織中沒有發(fā)現(xiàn)心肌梗死的任何表現(xiàn)，對于冠脈的狹窄是否引起了一定程度的心肌缺血無從考證。在活體中可以通過測量血液中HFABP含量反映AMI情況，在尸檢中由于患者死亡時間已較長且可以獲得心肌標(biāo)本，那是否可以采用測定心肌組織中HFABP含量來反映心肌缺血的情況呢？帶著這個問題我們進(jìn)行了此次研究，研究發(fā)現(xiàn)心肌梗死組HFABP的表達(dá)量明顯低于冠脈狹窄組及對照組，冠脈狹窄組HFABP的表達(dá)量明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這說明在尸檢中測定心肌組織中HFABP含量對反映心肌缺血程度有重要意義。