樂清地區(qū)老年H型高血壓腦卒中患者M(jìn)THFRC677T基因突變及防治

趙樂萍 楊理會 陳肖 邵傳鋒 陳力宇 徐洛丹

(溫州醫(yī)科大學(xué)附屬樂清醫(yī)院 樂清市人民醫(yī)院藥學(xué)部，浙江 樂清 325600)

我國流行病學(xué)研究表明，心血管疾病尤其是腦卒中已經(jīng)成為危害公眾健康的重要因素之一，分析其危險(xiǎn)因素并進(jìn)行早期預(yù)防已迫在眉睫〔1〕。腦卒中發(fā)病后病情危重、預(yù)后較差、致死率高。近年研究表明，高血壓合并高同型半胱氨酸血癥，即H型高血壓患者，腦卒中的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加10倍以上〔2〕。血漿中同型半胱氨酸水平每增加5 μmol/L，腦卒中發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加59%〔3〕。而在中國高血壓人群中，75%為H型高血壓〔4,5〕。因此，H型高血壓已經(jīng)成為中國腦卒中的主要危險(xiǎn)因素之一，如何預(yù)防和治療H型高血壓具有重要的臨床意義。血漿同型半胱氨酸水平的升高主要是葉酸代謝障礙造成的，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是葉酸在體內(nèi)代謝過程中的關(guān)鍵酶，由于MTHFRC677T 基因突變造成酶活性降低是葉酸代謝障礙的主要原因之一〔6〕。本研究旨在探討樂清地區(qū)老年高血壓腦卒中患者M(jìn)THFRC677T基因突變情況及防治。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇溫州醫(yī)科大學(xué)附屬樂清醫(yī)院于2015年1月至2017年1月收治的老年H型高血壓腦卒中患者100例作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)》〔7〕中關(guān)于腦卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)，符合《中國高血壓防治指南2010》〔8〕中關(guān)于H型高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者年齡≥65歲且≤80歲；③獲得知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴認(rèn)知功能障礙，記憶力下降、視空間障礙等認(rèn)知功能減退；②精神疾病者；③合并心肺、肝腎嚴(yán)重異常者。納入的100例患者中，男59例，女41例；年齡65～78〔平均(71.38±5.46)〕歲；高血壓病程3～15〔平均(8.98±1.76)〕年。另選擇州醫(yī)科大學(xué)附屬樂清醫(yī)院于2015年1月至2017年1月健康體檢者100例，男58例，女42例；年齡65～75〔平均(70.83±5.25)〕歲。兩組性別和年齡一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1MTHFRC677T基因檢測 均于入院第2天清晨空腹抽取外周靜脈血2 ml，經(jīng)溶膜液/蛋白酶K消化，提取基因組DNA，保存于-20℃下。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)體系50 μl，包括10×PCR緩沖液5 μl，濃度為25 mmol/L的氯化鎂溶液3 μl，濃度為2 mmol/L dNTP混合液5 μl，1.25U AmpliTaq DNA聚合酶，濃度為0.5 μmol/L的引物及100 μg的基因組DNA。MTHFRC677T基因引物序列：上游：5′-CAG TCC CTG TGG TCT CTT CAT-3′，下游：5′-CTC ACC TGG ATG GGA AAG AT-3′。PCR循環(huán)條件：95℃預(yù)變性10 min，94℃變性30 s，60℃復(fù)性30 s，72℃延伸30 s，反應(yīng)37個循環(huán)，再以72℃延伸10 min。以2%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增引物，放置于4℃下保存待測。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后作為測序模板，按照Genbank數(shù)據(jù)庫提供的全序列，采用引物設(shè)計(jì)軟件對各位點(diǎn)所需PCR引物以及相應(yīng)的內(nèi)切酶進(jìn)行設(shè)計(jì)。

1.2.2干預(yù)措施 老年H型高血壓腦卒中患者100例隨機(jī)分為常規(guī)治療組和個體化治療組，各50例，其中常規(guī)治療組給予常規(guī)治療，個體化治療組給予常規(guī)治療+葉酸補(bǔ)充0.8 mg/d。兩組連續(xù)干預(yù)3個月。

1.3觀察指標(biāo) ①觀察兩組MTHFRC677T等位基因分布；②觀察兩組MTHFRC677T基因型分布情況；③觀察兩組干預(yù)后隨訪6個月腦卒中復(fù)發(fā)情況；④不同方法干預(yù)后MTHFRC677T等位基因分布；⑤不同方法個體化干預(yù)后MTHFRC677T基因型分布。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組MTHFRC677T等位基因分布比較 觀察組MTHFRC677T等位基因T分布率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組MTHFRC677T等位基因分布比較〔n(%),n=100〕

2.2兩組MTHFRC677T基因型分布情況比較 觀察組MTHFRC677T基因型TT分布率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3不同方法干預(yù)后腦卒中復(fù)發(fā)情況比較 觀察組干預(yù)后腦卒中復(fù)發(fā)率(4.00%)明顯低于對照組(10.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.061，P<0.05)。

表2 兩組MTHFRC677T基因型分布情況比較〔n(%),n=100〕

2.4不同方法干預(yù)前后MTHFRC677T等位基因分布比較 兩組干預(yù)前C和T基因分布比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩組干預(yù)后C基因分布較干預(yù)前無明顯變化(P>0.05)；常規(guī)治療組干預(yù)后T基因分布較治療前無明顯變化(P>0.05)；個體化治療組干預(yù)后C基因分布較干預(yù)前增加，而T基因分布較干預(yù)前降低(P<0.05)；個體化治療組干預(yù)后C基因分布高于常規(guī)治療組，而T基因分布低于常規(guī)治療組(P<0.05)。見表3。

表3 不同方法干預(yù)后MTHFRC677T等位基因分布比較〔n(%)，n=50〕

與干預(yù)前比較：1)P<0.05，下表同

2.5不同方法干預(yù)前后MTHFRC677T基因型分布比較 兩組干預(yù)前CC、CT和TT基因型分布比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩組干預(yù)后CC和CT基因型分布較干預(yù)前無明顯變化(P>0.05)；常規(guī)治療組干預(yù)后TT基因型分布較干預(yù)前無明顯變化；個體化治療組干預(yù)后TT基因型分布較干預(yù)前顯著降低(P<0.05)；兩組干預(yù)后CC和CT基因型分布比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；個體化治療組干預(yù)后TT基因型分布低于常規(guī)治療組(P<0.05)。見表4。

表4 不同方法干預(yù)前后MTHFRC677T基因型分布比較〔n(%),n=50〕

3 討 論

流行病學(xué)資料顯示我國腦卒中年發(fā)病率約為250/10萬，已經(jīng)躍居全球首位〔9〕。腦卒中具有發(fā)病率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高以及病死率高的“四高”特點(diǎn)，發(fā)病后如果未能及時(shí)治療，將會造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)不可逆的損傷，對個人、對家庭乃至社會帶來極大的負(fù)擔(dān)〔10～13〕。因此，對于腦卒中的預(yù)防具有重要的臨床意義及社會價(jià)值。高血壓、高血糖、高脂血癥、吸煙和肥胖等是公認(rèn)的腦血管危險(xiǎn)因素。近年越來越多的研究顯示，高同型半胱氨酸血癥合并高血壓將極大增加腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)〔14，15〕。血漿同型半胱氨酸氨酸不僅能夠破壞血管內(nèi)皮、促使平滑肌增生，還能夠使血液處于高凝狀態(tài)，容易導(dǎo)致血栓的發(fā)生〔16，17〕。

MTHFRC677T基因存在3種基因型，CC型(野生型)、CT型(突變雜合子型)、TT型(突變純合子)，它可以使5，10-亞甲基四氫葉酸還原為5-甲基四氫葉酸，從而作為甲基的間接供體參與體內(nèi)嘌呤嘧啶的合成及DNA、RNA、蛋白質(zhì)的甲基化，同時(shí)與維持體內(nèi)正常的同型半胱氨酸水平發(fā)生密切相關(guān)〔18，19〕。MTHFR基因突變導(dǎo)致葉酸利用能力不足，使葉酸缺乏，引起高同型半胱氨酸血癥、血液異常凝固導(dǎo)致腦卒中、冠心病、靜脈血栓等。研究已證實(shí)，MTHFRC677T不僅與高同型半胱氨酸血癥相關(guān)，其與腦卒中的發(fā)生也存在密切關(guān)系〔20〕。本研究表明，MTHFRC677T等位基因T可能為老年H型高血壓腦卒中易感基因。

常規(guī)服用降壓藥對于H型高血壓患者的腦卒中預(yù)防作用十分有限。因此針對H型高血壓患者增加葉酸的補(bǔ)充，降低血壓的同時(shí)降低血漿同型半胱氨酸水平，能夠有效預(yù)防這類人群腦卒中的發(fā)生。由于遺傳差異，不同個體對葉酸的代謝吸收能力不盡相同。根據(jù)MTHFRC677T基因型進(jìn)行個體化葉酸補(bǔ)充能夠最大限度地預(yù)防腦卒中的發(fā)生，降低患者的治療費(fèi)用、節(jié)約醫(yī)療資源及減輕社會負(fù)擔(dān)。本研究表明，采取個體化治療可降低T基因分布，從而降低腦卒中發(fā)生。

綜上所述，樂清地區(qū)老年H型高血壓腦卒中患者M(jìn)THFRC677T基因突變中，攜帶T突變基因可能會導(dǎo)致H型高血壓腦卒中概率增加；葉酸干預(yù)后可降低腦卒中復(fù)發(fā)率，認(rèn)為可能與降低T等位基因和TT基因型分布相關(guān)。