大黃素通過(guò)選擇性調(diào)節(jié)腸道菌群緩解犬慢性腎衰竭

朱道仙 陸江 趙學(xué)剛 劉莉 吳雙

摘要：為研究大黃素對(duì)犬慢性腎衰竭（CRF）的治療效果與對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用之間的關(guān)系，探究大黃素延緩CRF的作用機(jī)制，采用34例犬慢性腎衰竭病例，其中大黃素治療組（RT）22例，常規(guī)治療組（UT）12例。UT組患犬口服復(fù)方α-酮酸片+腎臟處方糧;RT組在UT組基礎(chǔ)上按100 mg/（kg·d）口服大黃素，治療期為45 d。定時(shí)采集患犬血液，檢測(cè)尿毒素水平并無(wú)菌收集患犬糞便，用于腸道菌群16S rDNA測(cè)序及其代謝物檢測(cè)。將2組治療前后的患犬糞菌液移植給慢性腎衰竭模型無(wú)菌小鼠，驗(yàn)證患犬腸道菌群對(duì)CRF的影響。結(jié)果顯示：RT組患犬的血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、硫酸吲哚酚（IS）和硫酸對(duì)甲酚（PCS）含量逐漸降低，腸道菌群豐度增加，與試驗(yàn)前及UT組有顯著差異;菌群結(jié)構(gòu)也發(fā)生改變，表現(xiàn)為腸桿菌科、假單胞菌科等細(xì)菌豐度逐漸降低，而普氏桿菌屬、乳桿菌屬、丁酸梭菌屬和雙歧桿菌屬等有益菌逐漸成為優(yōu)勢(shì)菌群，與UT組有差異。RT組腸道菌群在遺傳信息處理、核苷酸代謝、輔助因子和維生素代謝等代謝途徑方面表現(xiàn)活躍，患犬糞中代謝物丁酸含量升高，吲哚與H2S含量逐漸降低，與試驗(yàn)前及UT組有顯著差異，這些代謝物含量的變化趨勢(shì)與其生產(chǎn)菌群的變化趨勢(shì)相一致。慢性腎衰竭無(wú)菌小鼠糞菌移植結(jié)果表明，RT組試驗(yàn)后的糞菌可以顯著降低小鼠血中Scr和BUN含量。以上結(jié)果說(shuō)明，大黃素可以使CRF犬紊亂的腸道菌群重建平衡，改變細(xì)菌代謝物水平，從而減少腸道菌群對(duì)犬慢性腎衰竭的不良影響。

關(guān)鍵詞：大黃素;犬;慢性腎衰竭;腸道菌群;16S rDNA測(cè)序

中圖分類(lèi)號(hào)：S858.292.659文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-4440（2020）06-1489-09

Abstract：To study the relationship between the therapeutic effect of emodin on chronic renal failure （CRF） and the regulating effect of emodin on gut microbiota in dogs， so as to explore the mechanism of emodin in alleviating CRF， 34 cases of CRF dogs were used， among which emodin treatment group （RT） contained 22 cases and usual treatment group （UT） contained 12 cases. The dogs in the UT group were given prescription diet containing compound α-ketoacid tablets plus kidney， while the dogs in the RT group were given 100 mg/（kg·d） emodin by oral on the basis of the prescription in the UT group， the treatment period was 45 days. Blood of the dogs was collected regularly to detect the level of urotoxin and feces of the dogs were collected aseptically for 16S rDNA sequencing of gut microbiota and related metabolites detection. The fecal bacterial solution of the two groups before and after treatment were transplanted into germ-less CRF mice respectively to verify the effect of gut microbiota on CRF. The results showed that the contents of serum creatinine （Scr）， blood urea nitrogen （BUN）， indole sulfate （IS） and p-cresol sulfate （PCS） of dogs in RT group decreased gradually and the abundance of gut microbiota increased， which showed significant difference with the group before test and UT group. The microflora structure also changed， presented as the abundance of Enterobacteriaceae， Pseudomonadaceae decreased gradually， while the beneficial bacteria such as Proteus， Lactobacillus， Butyricicoccus and Bifidobacterium gradually became the dominant microflora， which was different from UT group. The gut microbiota of RT group was active in metabolic pathways such as genetic information processing， nucleotide metabolism， cofactor and vitamin metabolism. The content of butyric acid in feces of the dogs from RT group increased， while the content of indole and H2S decreased gradually， which showed significant difference with the group before test and UT group. The change trend of these metabolites was consistent with the change trend of the productional flora. The result of fecal bacteria transplanting of the aseptic CRF mice showed that fecal bacteria from the RT group after experiment could significantly reduce the contents of Scr and BUN. In summary， emodin can restore the disarranged gut microbiota and change the levels of bacterial metabolites in CRF dogs， thus reduce the adverse effects of gut microbiota on CRF.

Key words：emodin;dog;chronic renal failure;gut microbiota;16S rRNA sequencing

近年來(lái)，犬的慢性腎衰竭（CRF）發(fā)病率逐年上升，治愈率低、成本高，對(duì)寵物診療業(yè)產(chǎn)生了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。慢性腎衰竭與腸道菌群間關(guān)系密切，前者可以導(dǎo)致后者發(fā)生紊亂，后者紊亂又可加劇CRF的發(fā)展，最終惡化病情[1-2]。因此，腸道菌群是一個(gè)復(fù)雜的微生物生態(tài)系統(tǒng)，增加有益菌豐度對(duì)動(dòng)物健康至關(guān)重要[3-5]，調(diào)節(jié)腸道菌群有望成為治療犬慢性腎衰竭的新方式。

大黃素具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理作用[6]，可以通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群治療多種疾病[7-9]。雖然有報(bào)道發(fā)現(xiàn)大黃素對(duì)CRF具有療效[10]，但是否與調(diào)節(jié)腸道菌群有關(guān)卻鮮有報(bào)道，而且也有研究結(jié)果表明大黃素對(duì)貓CRF無(wú)治療價(jià)值[11]。大黃素對(duì)犬CRF是否具有治療作用以及是否與調(diào)節(jié)腸道菌群有關(guān)，是一項(xiàng)值得研究的課題。因此，本試驗(yàn)給CRF患犬口服大黃素后，觀察尿毒素指標(biāo)和腸道菌群的動(dòng)態(tài)變化，探討二者間的因果關(guān)系，從腸道菌群調(diào)控角度闡釋大黃素治療犬慢性腎衰竭的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1病例資料

選取2017年7月至2019年7月期間，到江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)院教學(xué)寵物醫(yī)院就診的診斷為慢性腎衰竭的患犬45例，按照納入標(biāo)準(zhǔn)剔除11例，剩余病例用于研究。研究納入標(biāo)準(zhǔn)為：①符合國(guó)際腎病研究協(xié)會(huì)（IRIS）犬貓慢性腎病診斷標(biāo)準(zhǔn)[12];②就診前1個(gè)月內(nèi)未使用抗生素、益生菌或微生態(tài)調(diào)節(jié)劑等;③未伴有其他疾病，如胃腸道疾病，尿路感染、急性腎炎、尿結(jié)石等泌尿道疾病，心臟病、糖尿病、肥胖癥等可導(dǎo)致腎功能障礙的疾病以及各種感染性疾病。所有研究病例的主人均對(duì)本研究計(jì)劃有詳細(xì)的了解，并簽署知情同意書(shū)。

1.2臨床治療試驗(yàn)

按隨機(jī)數(shù)字表法將34例病例隨機(jī)分成大黃素治療組（RT組，n=22）和常規(guī)治療組（UT組，n=12）。UT組患犬治療方案為口服復(fù)方α-酮酸片（摩登狗生物科技有限公司產(chǎn)品，1片/次，2次/d）+自由采食腎臟處方糧（上海信元?jiǎng)游锼幤酚邢薰旧a(chǎn)），RT組在UT組治療的基礎(chǔ)上按100 mg/（kg·d）口服大黃素，自由飲食，治療期為45 d。并分別于治療前（0 d）與治療后15 d、30 d、45 d早晨，空腹采集血液，用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、硫酸吲哚酚（IS）和硫酸對(duì)甲酚（PCS）含量。同時(shí)，經(jīng)無(wú)菌直腸采集糞便后平分成4份，分別用于短鏈脂肪酸（SCFA）含量檢測(cè)（氣相色譜/質(zhì)譜法）、H2S含量檢測(cè)（亞甲基藍(lán)法）、吲哚含量檢測(cè)（分光光度計(jì)法）和腸道菌群16S rDNA測(cè)序。

1.3慢性腎衰竭無(wú)菌小鼠糞菌移植試驗(yàn)

1.3.1糞菌液制備試驗(yàn)前收集3例RT組患犬糞便并充分混勻，結(jié)束后再次收集相同病例糞便并充分混勻，UT組糞便收集方法同RT組。最終制成4種糞便樣本，分別為UT組試驗(yàn)前（U-pre）和試驗(yàn)后（U-post）、RT組試驗(yàn)前（R-pre）和試驗(yàn)后（R-post）。在無(wú)氧室中，分別取各個(gè)糞便樣本0.5 g，加入25 ml無(wú)菌Ringers緩沖液稀釋?zhuān)浞謹(jǐn)噭蚝箪o置5 min，然后將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的試管中，并添加等量20%（質(zhì)量體積比）無(wú)菌脫脂乳溶液，制成糞菌液。試驗(yàn)當(dāng)天制備新鮮糞菌液，其余的保存在-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2慢性腎衰竭無(wú)菌小鼠糞菌移植將32只斷奶的無(wú)菌C57BL/6J雄性小鼠在12 h（日）/12 h（夜）光周期下飼養(yǎng)于柔性薄膜塑料隔離器中，喂食經(jīng)過(guò)消毒的正常食物與水，在糞菌移植前定期收集糞便、食物、水和填料等樣本進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)菌污染情況。在7周齡時(shí)，隨機(jī)將小鼠等分為4組（每組單獨(dú)隔離），參考Michael等[13]的方法，第1周給各組小鼠按250 mg/kg體質(zhì)量隔天灌服腺嘌呤，后3周按150 mg/kg體質(zhì)量隔天灌服腺嘌呤。建模成功后，4組小鼠分別口服100 μl下列糞菌液：U-pre、U-post、R-pre和R-post，并于第2 d加強(qiáng)1次。分別于口服糞菌液前和口服后30 d，空腹收集各組小鼠血液用于Scr、BUN、IS和PCS的檢測(cè)，檢測(cè)方法同方法1.2，同時(shí)采集糞便進(jìn)行16S rDNA測(cè)序。

1.4腸道菌群16S rDNA高通量測(cè)序

稱(chēng)取無(wú)菌糞便樣100 mg，采用Qiagen DNA試劑盒按說(shuō)明書(shū)提取總DNA。再以獲得的細(xì)菌DNA為模板進(jìn)行細(xì)菌16S rDNA的V3、V4可變區(qū)PCR擴(kuò)增，上游引物（F）序列為5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′，下游引物（R）序列為5′-GGACTGCACGGGTATCTAAT-3′。擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性 10 min，92 ℃變性45 s，50 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，6個(gè)循環(huán);92 ℃變性45 s，68 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30個(gè)循環(huán);然后72 ℃擴(kuò)展延伸10 min，4 ℃保存。采用生工生物工程（上海）股份有限公司的PCR產(chǎn)物純化試劑盒對(duì)所得PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化后，用NEB Next UltraTM DNA Library Prep Kit for Illumina建庫(kù)試劑盒進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建， 使用Illumina Miseq PE 300平臺(tái)進(jìn)行Paired-end測(cè)序。

1.5生物信息學(xué)分析

將測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)QIIME（version 1.9.1）進(jìn)行去除接頭序列、低復(fù)雜度序列和低質(zhì)量序列的處理，得到高通量原始?jí)A基序列。用貝葉斯分類(lèi)器將相似性大于97%的序列劃分為1個(gè)分類(lèi)操作單元（OTU），與GreenGene數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，得到OTU注釋結(jié)果及豐度。OTU數(shù)量差異用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，將各樣本OTU豐度標(biāo)準(zhǔn)化后進(jìn)行主成分分析（PCA）。通過(guò)LEfSe分析[14]組間差異菌群，并繪制聚類(lèi)熱圖，運(yùn)用PICRUSt軟件[15]預(yù)測(cè)菌群基因組功能，與京都基因與基因組百科全書(shū)數(shù)據(jù)庫(kù)（KEGG）比對(duì)，獲得KEGG直系同源基因簇（KO）注釋信息及豐度，進(jìn)而進(jìn)行KEGG代謝通路的差異分析。

1.6數(shù)據(jù)處理

血液指標(biāo)及糞代謝物數(shù)據(jù)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示， 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件方差分析（ANOVA）程序單因素方差分析進(jìn)行組間比較，組內(nèi)比較采用重復(fù)測(cè)量資料方差分析，分類(lèi)資料用Pearson卡方檢驗(yàn)。腸道菌群數(shù)據(jù)比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2結(jié)果與分析

2.1研究對(duì)象的基本特征

本試驗(yàn)所用犬CRF病例共有34例，其中RT組22例，UT組12例（表1）。與UT組比較，RT組Scr及BUN水平、性別構(gòu)成、年齡分布、體質(zhì)量情況、飼養(yǎng)方式和生活環(huán)境等均無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.2大黃素對(duì)CRF患犬腎功能的影響

由圖1可知：與0 d比較，RT組患犬的Scr、BUN含量呈降低趨勢(shì)，從15 d開(kāi)始有顯著差異（P<0.05），30 d時(shí)差異極顯著（P<0.01），45 d時(shí)分別降低了48.39%、72.53%;與UT組比較，RT組患犬在15 d、30 d和45 d時(shí)的Scr、BUN含量顯著降低（P<0.05）。RT組患犬的IS、PCS含量從15 d開(kāi)始極顯著低于0 d時(shí)的含量（P<0.01），45 d時(shí)達(dá)到了最低值（分別為5.26 μg/ml、11.98 μg/ml），并且低于UT組（P<0.05）。

2.3大黃素對(duì)CRF患犬腸道菌群的影響

研究發(fā)現(xiàn)，RT組患犬腸道菌群OTUs數(shù)量隨時(shí)間推移明顯升高，UT組患犬腸道菌群OTUs數(shù)量變化不大（圖2a）。PCA結(jié)果顯示，PCA1可解釋35.52%樣本差異，各樣本隨著試驗(yàn)時(shí)間有沿PCA1軸右移的趨勢(shì)，試驗(yàn)后RT組樣本主要集中于右側(cè)，與其他樣本的離散程度較高（圖2b）。在比較不同時(shí)間點(diǎn)OTUs的差異性時(shí)發(fā)現(xiàn)，與0 d比較，RT組15 d時(shí)患犬腸道菌群有106個(gè)OTUs下調(diào)，84個(gè)OTUs上調(diào)（圖2c）;30 d時(shí)有183個(gè)OTUs下調(diào)，137個(gè)OTUs上調(diào)（圖2d）;45 d時(shí)共有211個(gè)OTUs下調(diào)，158個(gè)OTUs上調(diào)（圖2e）。與UT組比較，RT組有74個(gè)OTUs下調(diào)，54個(gè)OTUs上調(diào)（圖2f）。

2.4CRF患犬腸道菌群的LEfSe差異分析

通過(guò)LESfe分析發(fā)現(xiàn)，RT組患犬腸道在0 d時(shí)富集的細(xì)菌主要有腸桿菌科（Enterobacteriaceae）、假單胞菌科（Pseudomonadaceae）、腸桿菌屬（Enterobacter）、假單胞菌屬（Pseudomonas）、埃希氏菌屬（Escherichia）和變形桿菌屬（Proteus）等;給予大黃素后45 d，優(yōu)勢(shì)菌群發(fā)生了顯著變化，乳桿菌科（Lactobacillaceae）、普氏桿菌屬（Prevotella）、乳桿菌屬（Lactobacillus）、丁酸梭菌屬（Butyricicoccus）和雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）等有益菌數(shù)量顯著增加，而瘤胃球菌屬（Ruminococcus）、擬桿菌屬（Bacteroides）和優(yōu)桿菌屬（Eubacterium）等則富集在UT組（圖3a）。將上述各差異菌群不同時(shí)期的豐度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后繪制了聚類(lèi)熱圖（圖3b）?？梢钥闯?，RT組的患犬腸道菌群呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化過(guò)程，表現(xiàn)為原富集的菌群豐度逐漸降低，乳桿菌科等有益菌豐度逐漸升高。

2.5CRF患犬腸道菌群基因功能PICRUSt預(yù)測(cè)分析

PICRUSt分析結(jié)果（圖4）顯示，與0 d時(shí)（pre-RT）比較，45 d時(shí)RT組的患犬腸道菌群在遺傳信息處理過(guò)程中轉(zhuǎn)錄（Transcription）、翻譯（Translation）、折疊、分類(lèi)和降解（Folding， sorting and degradation）、復(fù)制和修復(fù)（Replication and repair）等方面以及核苷酸代謝（Nucleotide metabolism）、輔助因子和維生素代謝（Metabolism of cofactors and vitamins）與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)（Cell motility）等代謝途徑方面較活躍，而在碳水化合物代謝（Carbohydrate metabolism）、糖生物合成和代謝（Glycan biosynthesis and metabolism）、氨基酸代謝（Amino acid metabolism）等方面參與度較低，與UT組比較也得到了相似的結(jié)果。

2.6大黃素對(duì)CRF患犬腸道菌群代謝產(chǎn)物的影響

RT組和UT組患犬糞便的乙酸含量在試驗(yàn)過(guò)程中無(wú)顯著變化，但RT組的產(chǎn)乙酸菌群的比例卻從15 d開(kāi)始顯著（P<0.05）高于0 d（圖5a、圖5e）;RT組丁酸含量和產(chǎn)丁酸菌群豐度在15 d、30 d及45 d時(shí)均顯著（P<0.05）或極顯著（P<0.01）高于0 d和UT組同時(shí)間點(diǎn)（圖5b、圖5f）。RT組患犬糞便吲哚含量（圖5c）、H2S含量（圖5d）均呈降低趨勢(shì)，15 d、30 d及45 d時(shí)均極顯著低于0 d（P<0.01）并顯著低于同期UT組（P<0.05）;RT組產(chǎn)吲哚菌群OTUs相對(duì)豐度逐漸降低，與0 d比較，15 d時(shí)有顯著差異（P<0.05），30 d、45d時(shí)有極顯著差異（P<0.01，圖5g），試驗(yàn)15 d、30 d及45 d時(shí)產(chǎn)H2S菌群OTUs相對(duì)豐度也顯著低于0 d（P<0.05，圖5h）。

2.7CRF患犬糞菌移植對(duì)慢性腎衰竭無(wú)菌小鼠腎功能的影響

將RT組、UT組治療前與治療后的患犬腸道菌群分別移植給慢性腎衰竭無(wú)菌小鼠后發(fā)現(xiàn)，各組小鼠的Scr、BUN含量均低于灌服糞菌液前，IS與PCS含量均高于灌服糞菌液前，R-Post組IS及PCS含量均低于其他3組（P<0.05或P<0.01，圖6a）。R-Post組Scr、BUN含量降低幅度較大，低于其他3組（P<0.05，圖6b、圖6c）。PCA結(jié)果顯示，各組小鼠樣本與供給糞菌液的犬樣本較為聚集，與其他犬樣本較為分散（圖6d），菌群結(jié)構(gòu)也與糞菌液供體相似（圖6e）。

3討論

發(fā)生慢性腎衰竭時(shí)，由于腎小球?yàn)V過(guò)能力降低，導(dǎo)致肌酐、尿素氮等物質(zhì)不能順利經(jīng)腎排泄而聚積于血液形成氮質(zhì)血癥。本研究結(jié)果表明，大黃素可以降低CTF患犬的Scr和BUN含量，效果優(yōu)于常規(guī)治療組，證實(shí)了大黃素對(duì)犬CRF具有治療價(jià)值。

隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，16S rDNA測(cè)序技術(shù)已被廣泛用于腸道微生物的多樣性、物種組成及細(xì)菌基因功能預(yù)測(cè)等方面的定性與定量研究[16-19]。倫恒忠[20]通過(guò)16S rDNA測(cè)序技術(shù)研究了慢性腎病進(jìn)展中腸道菌群的變化情況，尋找到慢性腎病腸道菌群的生物標(biāo)記物（Biomarker）。Ye等[21]也利用16S rDNA測(cè)序技術(shù)找到了腎移植、慢性腎病與健康人的差異菌群。本研究發(fā)現(xiàn)，大黃素可以提高CRF犬腸道菌群的豐度，改變菌群結(jié)構(gòu)，說(shuō)明大黃素對(duì)CRF犬腸道菌群具有調(diào)節(jié)作用;通過(guò)LEfSe和PICRUSt分析發(fā)現(xiàn)，給予大黃素后，乳桿菌科、普氏桿菌屬、乳桿菌屬、丁酸梭菌屬和雙歧桿菌屬等有益菌數(shù)量顯著增加，菌群基因在遺傳信息處理過(guò)程、核苷酸代謝、輔助因子和維生素代謝等代謝途徑方面也較為活躍。進(jìn)一步分析菌群結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)大黃素可以提高細(xì)菌代謝物丁酸的水平，且與產(chǎn)丁酸細(xì)菌豐度增加有關(guān)。而有研究結(jié)果表明，腸道菌群產(chǎn)丁酸能力降低，引起腸道黏膜通透性增加，導(dǎo)致代謝性?xún)?nèi)毒素血癥和慢性炎癥，從而加劇CRF進(jìn)展[22]。由此可以推測(cè)，產(chǎn)丁酸菌增加可能是大黃素作用機(jī)制之一。

IS和PCS是慢性腎臟病及其并發(fā)癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，與腎小球?yàn)V過(guò)率呈負(fù)相關(guān)[23]。IS可介導(dǎo)腎小管纖維化相關(guān)基因的表達(dá)，加速腎損傷，PCS是一種促氧化劑，可使腎的抗氧化能力降低，加重腎組織損傷。而這2種物質(zhì)是某些腸道細(xì)菌的代謝產(chǎn)物，經(jīng)腸道吸收入血后由腎排泄。本研究發(fā)現(xiàn)，給予大黃素后，患犬糞便中吲哚含量及產(chǎn)吲哚菌減少，血液中IS和PCS含量也隨之降低。慢性腎衰竭無(wú)菌小鼠糞菌移植前的Scr、BUN含量均高于移植后，說(shuō)明腸道菌群對(duì)Scr、BUN含量有調(diào)節(jié)作用，但移植糞菌液后IS、PCS含量急劇升高，可能是由于可以產(chǎn)生吲哚等前體物的菌群增多有關(guān)，而給予大黃素后的糞菌液可明顯降低IS、PCS水平。研究結(jié)果也為大黃素通過(guò)選擇性調(diào)節(jié)腸道菌群改善犬CRF提供了有力證據(jù)。

由于樣本量較少，本研究?jī)H從時(shí)間梯度研究了大黃素選擇性調(diào)節(jié)患犬腸道菌群作用的動(dòng)態(tài)過(guò)程，未研究大黃素濃度梯度對(duì)患犬腸道菌群的影響，今后將進(jìn)一步擴(kuò)增樣本量，為本研究提供更多的數(shù)據(jù)資料。此外，由于16S rDNA測(cè)序技術(shù)對(duì)屬以上水平的測(cè)試精確度較高，而對(duì)細(xì)菌種水平的測(cè)試精確度較低，所以本研究未涉及細(xì)菌種水平的研究。

4結(jié)論

綜上所述，大黃素可以通過(guò)提高CRF患犬腸道中乳桿菌科、普氏桿菌屬、乳桿菌屬、丁酸梭菌屬和雙歧桿菌屬等有益菌的豐度，降低腸桿菌科和假單胞菌科等細(xì)菌數(shù)量，從而使腸道菌群代謝物丁酸的含量升高，IS和PCS等有害物質(zhì)含量降低，最終改善CRF癥狀。這種對(duì)菌群的調(diào)節(jié)作用，可為治療犬及其他動(dòng)物的CRF提供一種新的生態(tài)途徑。

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（責(zé)任編輯：張震林）