AFP、AFP-L3和AFU聯(lián)合檢測診斷肝細胞癌的應(yīng)用價值探討

陳宏斌 蘇明寬 陳勇 郭建峰 陳瓊 吳敏校

[摘要] 目的 探討聯(lián)合檢測甲胎蛋白（AFP）、甲胎蛋白異質(zhì)體3（AFP-L3）和α-L-巖藻糖苷酶（AFU）診斷HCC的性能。 方法 選擇2017年1月～2018年12月就診于我院的81例HCC患者為觀察組，選擇同期就診于我院的50例良性肝病為良性組，24例健康者為對照組。采集3組空腹靜脈血檢測AFP、AFP-L3和AFU水平。對比3組AFP、AFP-L3和AFU水平，并分析AFP、AFP-L3和AFU單一檢測與聯(lián)合檢測HCC的診斷價值。 結(jié)果 觀察組AFP、AFP-L3、AFP-L3%和AFU中位水平分別為319.42 ng/mL、49.50 ng/mL、18.65%和46.00 U/L，高于良性組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）;AFP+AFP-L3+AFU檢測曲線下面積（AUC）為0.831，高于單一檢測AFP（0.761）、AFP-L3（0.828）和AFU（0.685）。 結(jié)論 聯(lián)合檢測AFP、AFP-L3和AFU可提高HCC的診斷性能。

[關(guān)鍵詞] HCC;甲胎蛋白;甲胎蛋白異質(zhì)體;α-L-巖藻糖苷酶

[中圖分類號] R735.7? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）32-0125-04

[Abstract] Objective To explore the efficacy of combined detection of alpha-fetoprotein（AFP）， alpha-fetoprotein heterogene 3（AFP-L3） and α-L-fucosidase（AFU） in the diagnosis of HCC. Methods A total of 81 patients with HCC who were treated in our hospital from January 2017 to December 2018 were selected as the observation group. 50 cases of benign liver disease who were treated in our hospital during the same period were selected as the benign group. 24 healthy people were selected as the control group. Fasting venous blood in the three groups were collected to detect the levels of AFP， AFP-L3 and AFU. The levels of AFP， AFP-L3 and AFU in the three groups were compared and the diagnostic value of single and combined detection of AFP， AFP-L3 and AFU in the diagnosis of HCC was analyzed. Results The median levels of AFP， AFP-L3， AFP-L3% and AFU in the observation group were 319.42 ng/mL， 49.50 ng/mL， 18.65% and 46.00 U/L respectively， which were higher than those in the benign group and the control group， and the differences were statistically significant（P<0.001）; the area under the curve（AUC） of AFP+AFP-L3+AFU detection was 0.831， which was higher than that of AFP（0.761）， AFP-L3（0.828） and AFU（0.685） in the single detection. Conclusion The combined detection of AFP， AFP-L3 and AFU can improve the diagnostic efficacy of HCC.

[Key words] HCC; Alpha-fetoprotein; Alpha-fetoprotein heteroplasm; α-L-fucosidase

肝細胞癌（Hepato cellular carcinoma，HCC）是一種具有病程短、發(fā)展迅速、死亡率高等特點的惡性腫瘤。手術(shù)切除是臨床治療HCC的主要手段，但僅有1/5的患者有手術(shù)切除機會，多數(shù)患者因早期無特異性臨床表現(xiàn)，就診時已發(fā)展為中晚期，錯失最佳治療時機[1-2]。因此，早期準(zhǔn)確鑒別診斷HCC，盡早實施有效的治療，對提高患者生存率尤為重要。血清腫瘤標(biāo)志物檢測是臨床診斷HCC的常用方式，簡便易行，甲胎蛋白（Alpha fetal protein，AFP）是早期診斷HCC的傳統(tǒng)血清標(biāo)志物，但在肝硬化、慢性肝炎等良性肝病患者中會不同程度升高，而部分肝癌早期AFP水平不升高，30%～40%患者AFP為陰性[3-5]。甲胎蛋白異質(zhì)體3（Alpha fetoproteins L3，AFP-L3）是新一代HCC標(biāo)志物，而α-L-巖藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）屬于溶酶體酸性水解酶類，也是HCC生物標(biāo)志物之一。本研究通過聯(lián)合檢測AFP、AFP-L3和AFU評估診斷HCC的性能，旨在為臨床診斷HCC提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年12月～2018年12月就診于我院的81例HCC患者為觀察組，其中男54例，女27例;年齡27～80歲。選擇同期就診于我院的50例良性肝病為良性組，其中男33例，女17例;年齡26～79歲;乙型肝炎無癥狀攜帶者5例，慢性乙型肝炎20例，肝硬化25例。選擇同期在我院接受健康體檢的24名健康者為對照組，其中男16例，女8例;年齡27～79歲。3組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)者;簽署知情同意書者;認知功能正常者;年齡>18歲者。排除標(biāo)準(zhǔn)：精神疾病患者;妊娠期或哺乳期女性;自身免疫系統(tǒng)疾病者;嚴重心腦血管疾病者;肝腎等重要臟器功能不全者。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 良性肝病組? 符合《慢性乙型肝炎防治指南》[6]中關(guān)于良性肝病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)患者HBsAg陽性>6個月或既往有乙型肝炎病史，HBV DNA或/和HBsAg呈陽性，即可評定為慢性HBV感染。將慢性HBV感染按照病毒學(xué)、生物化學(xué)實驗、血清學(xué)和其他輔助、臨床檢查分為慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、無癥狀HBV攜帶者。

1.2.2 HCC診斷標(biāo)準(zhǔn)? （1）符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》[7]關(guān)于HCC相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，將肝外轉(zhuǎn)移灶/肝臟占位病灶活檢，或手術(shù)切除組織表變，經(jīng)細胞學(xué)或病理組織學(xué)檢查確診為HCC。（2）臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)臨床實際、既往國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)和我國國情，患者滿足①、②a或①、②b、③時，即可判定為HCC。①患者合并HCV感染或/和HBV感染、肝硬化。②存在典型的HCC影像學(xué)特征，動態(tài)對比增強MRI和同期多排CT掃描檢查，動脈期肝臟占位快速不均質(zhì)血管強化，延遲期或靜脈血快速洗脫。a：肝臟占位直徑2 cm及以上，MRI、CT檢查中任意一項顯示肝臟占位伴有肝癌的特征。b：肝臟占位直徑不足2 cm，MRI、CT檢查均顯示肝臟占位伴有肝癌的特征。③持續(xù)2個月血清AFP≥200 μg/L或持續(xù)1個月血清AFP≥400 μg/L，同時能排除生殖系胚胎源性腫瘤、妊娠、繼發(fā)性肝癌、活動性肝病等所致的AFP升高。

1.2.3 健康對照組標(biāo)準(zhǔn)? 健康對照生化指標(biāo)均正常，HBV血清學(xué)標(biāo)志物均為陰性，同時排除HIV/HCV感染和其他原因?qū)е赂闻K病變的疾病，如酒精性及代謝性肝病等。

1.3 方法

采集3組患者空腹靜脈血3 mL，待凝固后，10 min的離心，3000/min離心操作取上清液，置于-20℃冰箱中保存待檢。使用北京熱景生物技術(shù)股份有限公司提供的甲胎蛋白異質(zhì)體比率測定試劑盒檢測AFP及AFP-L3。該試劑盒中預(yù)裝有甲胎蛋白異質(zhì)體分離磁珠，通過分離磁珠將待測樣本中AFP-L3進行分離。將分離的AFP-L3及總甲胎蛋白分別在全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀中檢測。儀器檢測出AFP及AFP-L3值，通過計算得出AFP-L3%。使用速率法測定血清AFU水平，儀器為貝克曼AU5821全自動生化檢測儀，試劑盒購買自北京中生北控生物科技股份有限公司。正常參考值：AFP為0～7 μg/L，AFP-L3%<10%，AFU為0～40 U/L。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料均為非正態(tài)分布，用中位數(shù)（P25，P75）表示，組間的比較采用Mann-Whitney U檢驗;繪制受試者工作曲線（ROC）評估各指標(biāo)單獨和聯(lián)合檢測HCC的診斷效能，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組AFP、AFP-L3、AFP-L3%和AFU水平比較

觀察組AFP、AFP-L3、AFP-L3%、AFU水平均高于良性組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。見表1。

2.2 AFP、AFP-L3和AFU單一與聯(lián)合檢測診斷HCC價值

聯(lián)合AFP+AFP-L3+AFU診斷HCC的AUC為0.831，高于單一檢測AFP、AFP-L3、AFP-L3%、AFU診斷HCC的AUC。見表2、圖1。

3 討論

HCC是常見的肝臟惡性腫瘤，丙肝和乙肝病毒感染是導(dǎo)致HCC的主要原因，會導(dǎo)致患者出現(xiàn)全身臟器組織中毒，伴自身肝功能異常，誘發(fā)多器官功能衰竭，死亡率較高，5年生存率不足5%[8-10]。HCC發(fā)病隱匿，早期無明顯臨床表現(xiàn)，大部分患者就診時病情已發(fā)展為中晚期，失去手術(shù)切除機會，增加治療難度。因此，早期準(zhǔn)確診斷HCC，指導(dǎo)臨床實施針對性的治療，對改善患者預(yù)后具有積極意義。

生物標(biāo)志物在HCC的診斷和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移評估中具有突出作用，是指腫瘤細胞和組織因抗癌基因或癌基因、其他腫瘤相關(guān)的基因及產(chǎn)物異常表達所致的生物活性物質(zhì)和抗原，在良性疾病或正常組織中產(chǎn)量甚微或幾乎不產(chǎn)生，反映癌發(fā)生、進展過程和癌相關(guān)基因的失活或激活程度，可在體液、癌組織、血液、排泄物中被檢測出[11-15]。AFP具有與雌激素結(jié)合，對肝細胞的生長進行調(diào)節(jié)，是目前臨床診斷HCC的最常用標(biāo)志物。AFP是胚胎的重要血清成分，由肝細胞和卵黃囊合成，胎兒出生后1年血清水平降低至正常水平。當(dāng)機體受到HCC侵襲時，會激活腫瘤細胞中AFP合成基因，分泌大量的AFP，升高血清濃度。AFP可在胃癌、肺癌、膽道腫瘤、胰腺癌等患者血清中出現(xiàn)，同時11%～47%肝硬化患者和15%～58%慢性乙型肝炎患者的血清中AFP也會升高，而HCC中部分患者血清AFP呈陰性，診斷缺乏特異性，易出現(xiàn)漏診、誤診[16-19]。而AFP-L3即通常所說的扁豆凝集素親和型甲胎蛋白異質(zhì)體（Lentil lectin-reactive alpha-fetoprotein），目前認為僅由肝癌細胞所產(chǎn)生，可作為HCC標(biāo)志物。AFP-L3存在鑒別診斷良惡性肝病的能力，HCC定性診斷中測定AFP-L3，利于其對影像學(xué)檢查無法確診的肝占位性病變進行鑒別，被稱為新一代HCC標(biāo)志物。AFP-L3具有HCC早期診斷及預(yù)警作用，在影像學(xué)檢查尚未發(fā)現(xiàn)HCC特征性病變時，對AFP低濃度陽性病例進行AFP-L3檢測，可以早期發(fā)現(xiàn)很多血清AFP為20～50 μg/L的HCC。AFP-L3具有預(yù)測預(yù)后及評估療效的價值。楊針等[20]研究結(jié)果顯示，術(shù)前血清AFP-L3含量與HCC復(fù)發(fā)率關(guān)系密切，AFP-L3高含量組累計復(fù)發(fā)率明顯增高。因此，AFP-L3%陽性HCC患者存在易復(fù)發(fā)、預(yù)后差、易轉(zhuǎn)移等特點，可將AFP-L3可作為評估HCC預(yù)后的一個獨立指標(biāo)。

AFU是廣泛存在于人體內(nèi)各種細胞、組織、尿液中的溶酶體酸性水解酶，在尿液、血清、肝、腎、腦、肺、胰等均含有AFU，能催化含巖藻糖基的低聚糖、糖苷、糖蛋白的水解代謝，在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫反應(yīng)等多方面起到重要作用[21-22]。正常情況下，AFU作為細胞新陳代謝的少量產(chǎn)物不斷釋放到血液中，血清水平穩(wěn)定在一個低水平范圍內(nèi)，被作為HCC、口腔癌、結(jié)直腸癌等腫瘤早期診斷標(biāo)志物的指示因子。HCC代謝中L-巖藻糖轉(zhuǎn)換增加，會升高AFU活性水平，同時肝細胞會產(chǎn)生一種AFU抑制劑，降低其對底物水解的能力，促使底物堆積，亦或肝臟清除溶酶過程受到干擾，進而提高血清AFU水平。本研究結(jié)果顯示，AFU+AFP+AFP-L3聯(lián)合檢測AUC高于AFP、AFP-L3、AFU單一檢測，提示AFP、AFP-L3、AFU聯(lián)合檢測具有互補性，可有效提高診斷HCC的性能，有利于臨床早期實施針對性的治療措施干預(yù)，提高患者生存率。

綜上所述，聯(lián)合AFP、AFP-L3和AFU檢查可有效提高診斷HCC的性能，可將其作為臨床診斷HCC的常用手段。

[參考文獻]

[1] 楊永昌，賈志凌，張穎，等. 腫瘤標(biāo)志物AFP-L3、AFP、AFU在原發(fā)性肝癌早期診斷中的應(yīng)用評價[J]. 中國急救復(fù)蘇與災(zāi)害醫(yī)學(xué)雜志，2016，11（7）：682-684.

[2] 蔡潔新，楊立杰，趙振杰. 原發(fā)性肝癌病人AFP-L3、AFU、GP73及TSGF等血清標(biāo)志物的水平分析及臨床意義[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，23（12）：1409-1412.

[3] 王翠曉，高靜. 血清高爾基蛋白73、甲胎蛋白異質(zhì)體3、甲胎蛋白和α-L-巖藻糖苷酶水平診斷原發(fā)性肝癌的效能分析[J]. 實用肝臟病雜志，2019，22（1）：118-121.

[4] 徐偉紅，姚怡婷，曹華，等. 血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用評價[J]. 中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，39（4）：262-266.

[5] 程田，劉獻華，張清萍，等. 對甲胎蛋白異質(zhì)體在診斷肝細胞癌中的價值評估[J]. 中國實驗診斷學(xué)，2017，21（6）：948-950.

[6] 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會. 慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）[J]. 中華肝臟病雜志，2011，19（1）：13-24.

[7] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011年版）[J]. 臨床肝膽病雜志，2011，20（11）：929-946.

[8] 孫雯雯，王秀芹，司元全，等. PIVKA-Ⅱ、AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測在肝細胞肝癌診斷中的價值[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2018，15（2）：161-163.

[9] 俞禾濤，張楨，張永樂，等. 甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體及其比值檢測在肝細胞癌診斷中的應(yīng)用價值研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2018，28（16）：69-71.

[10] 陸小華，朱小慶，袁洪新，等. APE1基因單核苷酸多態(tài)性與肝細胞癌臨床表型的相關(guān)性研究[J]. 中國當(dāng)代醫(yī)藥，2020，27（13）：13-17.

[10] 肖瀟，何羽童，房萌，等. 甲胎蛋白異質(zhì)體在原發(fā)性肝癌臨床診斷中的應(yīng)用[J]. 實用肝臟病雜志，2017，20（5）：567-570.

[11] 郭鴻雁，劉慶峰，王蕊，等. 血清GP73、AFP和AFP-L3聯(lián)合檢測診斷原發(fā)性肝癌的可行性研究[J]. 中國腫瘤臨床與康復(fù)，2018，25（8）：908-911.

[12] 王秀麗，黃清勇，吳玉英. 甲胎蛋白異質(zhì)體比率和血清異常凝血酶原聯(lián)合檢測對肝細胞癌的臨床診斷價值[J]. 中外醫(yī)學(xué)研究，2020，18（6）：75-77.

[13] 杜玉，黃旭暉，王昌俊，等. PD-L2表達的研究及其在肝細胞癌中的意義[J]. 現(xiàn)代醫(yī)院，2019，19（12）：1808-1810.

[14] 楊益波，余保平. 循環(huán)miRNA在肝細胞癌治療及預(yù)后評估中的研究進展[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2020，17（16）：45-48.

[15] 王曉燕. 聯(lián)合檢測血清GP73、AFP及AFP-L3在原發(fā)性肝癌中的診斷價值[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床，2017， 24（1）：64-66.

[16] 滿冬亮，王齊暉. 不同肝臟疾病血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平的表達[J]. 肝臟，2016，21（5）：368-371.

[17] 司元全，王秀芹，高華，等. 甲胎蛋白和甲胎蛋白異質(zhì)體聯(lián)合檢測對肝癌的診斷價值及其與肝癌大小的相關(guān)性研究[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2017，14（11）：1523-1524.

[18] 李薇薇. 血清甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體、異常凝血酶原、鱗狀細胞癌抗原聯(lián)合檢測對肝細胞癌的診斷價值[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2020，27（22）：94-96，100，254.

[19] 黃玉亮，吳君榮，趙惠柳，等. AFP基因多態(tài)性與肝細胞癌易感性的相關(guān)性研究[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2019，16（28）：25-29.

[20] 楊針，汪建林，尚潤澤，等. 術(shù)前血清甲胎蛋白水平與肝細胞癌術(shù)后患者早期復(fù)發(fā)的相關(guān)性分析[J]. 中華肝膽外科雜志，2018，24（3）：179-183.

[21] 徐恩君，陳秋莉，李濤，等. 血清AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌中的診斷價值[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，51（7）：1066-1070.

[22] 許紅軍. 血清甲胎蛋白、α-L-巖藻糖苷酶、癌胚抗原及糖鏈抗原19-9聯(lián)合檢測對肝癌的診斷價值[J]. 中國當(dāng)代醫(yī)藥，2020，27（23）：164-166.

（收稿日期：2020-08-04）